Quantificação da morte celular induzida por citocinas em organoides colônicos humanos usando microscopia de fluorescência ao vivo

As citocinas inflamatórias interferon-gama e TNF-existem há centenas de milhões de anos e são essenciais para a defesa eficaz do hospedeiro contra patógenos intercelulares. Nosso grupo de pesquisa está tentando entender como essas citocinas funcionam para matar células, como células epiteliais no intestino e células cancerígenas. Os sistemas comumente usados para estudar os mecanismos de morte de células epiteliais intestinais incluem modelos de camundongos e linhagens de células cancerígenas imortalizadas.

Os organoides de teste em humanos são vantajosos, pois são gerados diretamente a partir de biópsias de pacientes e retêm muitas características fisiológicas e morfológicas do tecido original. Isso significa que eles aumentaram o valor translacional. A pesquisa de órgãos tem problemas com a reprodutibilidade de experimentos e tem vários desafios técnicos em comparação com a cultura de células tradicional.

As técnicas atuais para medir a morte celular de organoides também apresentam limitações. Alguns são apenas semiquantitativos, não medem a morte celular diretamente, não podem medir respostas organoides únicas ou requerem equipamentos caros e protocolos complexos. Nosso protocolo para análise quantitativa da morte de células organoides é direto, robusto e barato.

Usamos nosso protocolo para medir as respostas de um único organoide a combinações de citocinas citotóxicas, mas ele pode ser facilmente adaptado para estudar qualquer tipo de perturbação. Este método é útil para pesquisas sobre morte celular, função de barreira epitelial ou imunologia da mucosa. Recentemente, relatamos que o interferon-gama e o TNF-sinergizam para induzir a morte celular inflamatória em células epiteliais intestinais e células de câncer de cólon.

Eles fazem isso através da via de sinalização JAK1/2-STAT1. Em trabalhos futuros, desejamos entender que tipo de morte celular é essa e como JAK1 e JAK2 matam as células.