Financiado pela American Heart Association e March of Dimes.

Este protocolo foi aprovado pelo Institutional Animal Care e do Comitê Use na Universidade de Stanford e age de acordo com os Institutos Nacionais de Saúde diretrizes para o uso de animais experimentais. Modelo de HIE neonatal Rat <ol><li> Dia pós natal (PND) 7 filhotes de ratos Sprague-Dawley (Charles River Laboratories, Inc., Wilmington, MA) estão totalmente anestesiados com isoflurano (Aerrane, Baxter, Deerfield, IL; 3-4% para a indução e 1-2% para manutenção). </li><li> Uma pequena incisão é feita no pescoço (Extra Fino Tesoura Iris # 14088-10, Fine Ciência Tools Inc, Foster City, CA) para expor a artéria carótida comum esquerda (CCA). </li><li> O CCA é ligada com um fio de seda 5-0 (5-0 seda, Ethicon, Somer, NJ). </li><li> A incisão é fechada com cola de cianoacrilato (Elmers Products Inc, Columbus, OH). A incisão é coberta com fita adesiva e anestesia é interrompida. Os filhotes são devolvidos aos seus barragem e permitiu a recuperação de 1-2 horas. </li><li> Filhotes são então colocados em uma câmara hipóxica que contém oxigênio de 8% balanceada com nitrogênio 92% para 100 minutos a 37 ° C. 8% de gás nitrogênio oxygen/92% (Airgas, Sacramento, CA) do fluxo através de um tubo na gaiola do mouse equipado com uma cobertura de plástico. A capa é feita para se ajustar à gaiola e tem dois furos de 2 cm de diâmetro, um dos quais para receber o tubo ligado ao tanque de oxigênio de 8% do gás e outra permite que o gás flowout. A câmara é colocada em um banho de água e é aquecido antes do uso e um termômetro dentro dele deve registrar 37 ° C antes do início da hipóxia. </li><li> No final de 100 minutos de hipóxia, os filhotes são devolvidos de novo à sua barragem para a recuperação. </li><li> 24 horas após o fim da hipóxia, os filhotes são sacrificados por anestesia profunda com isoflurano. Tecido cerebral é perfundido com solução salina fria, seguido de uma solução de frio TTC 1% em tampão fosfato pH, solução salina 7,4 (Sigma Chemical Co, St Louis, MO). TTC devem ser mantidos ao abrigo da luz. </li><li> Cérebros são removidos e resfriados por 1-2 minutos no gelo, e quatro cortes coronais 3 milímetros de distância (níveis 1-4) são cortados, começando rostralmente ao nível do opticchiasm e infundíbulo, correspondente ao bregma 1,8 ~ 2,0 mm de nível o cérebro do rato adulto. </li><li> Fatias de cérebro são imersos numa solução TTC e incubados a 37 ° C por 8 minutos, seguido de fixação em paraformaldeído a 4% / PBS durante a noite. TTC porque é sensível à luz, manter fatias longe da luz durante este tempo. </li><li> Os cortes corados TTC são escaneados e digitalizados. Usando Image J (NIH, Bethesda, MD), os seguintes são medidos para cada nível: área de infarto (área imaculada), a área do hemisfério ipsilateral, ea área do hemisfério contralateral. O percentual de infarto área por fatia é calculado como: (área de infarto / área do hemisfério ipsilateral) ou A 1, A 2, A 3 e A 4. Por cento do volume de infarto é calculada como a soma (A 1 + A 2 + A 3 + A 4) * 3mm. Áreas de lesão cortical ou estriado também pode ser quantificado separadamente de forma semelhante. </li></ol> Resultados representante <img src="/files/ftp_upload/old/955_2008_9_2_2/955_Fig-01.png" alt="Figura 1" width="660" height="190" /> Figura 1. HIE representativo níveis coronal 04/01 corados com TTC. TTC manchada secções coronal demonstram área de infarto (em branco).

<ol>
	<li>Rice, J. E., Vannucci, R. C., Brierley, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+immaturity+on+hypoxic-ischemic+brain+damage+in+the+rat.">The influence of immaturity on hypoxic-ischemic brain damage in the rat.</a> Annals of neurology. 9 (2), 131-141 (1981).</li><li>Vannucci, R. C., Vannucci, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perinatal+Hypoxic-Ischemic+Brain+Damage:+Evolution+of+an+Animal+Model.">Perinatal Hypoxic-Ischemic Brain Damage: Evolution of an Animal Model.</a> Dev Neurosci. 27 (2-4), 81-86 (2005).</li><li>Bona, E., Hagberg, H., Loberg, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effects+of+moderate+hypothermia+after+neonatal+hypoxia-ischemia:+short-+and+long-term+outcome.">Protective effects of moderate hypothermia after neonatal hypoxia-ischemia: short- and long-term outcome.</a> Pediatric research. 43 (6), 738-738 (1998).</li><li>Trescher, W. H., Ishiwa, S., Johnston, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+hypothermia+and+hyperthermia+on+attentional+and+spatial+learning+deficits+following+neonatal+hypoxia-ischemic+insult+in+rats.">Effects of hypothermia and hyperthermia on attentional and spatial learning deficits following neonatal hypoxia-ischemic insult in rats.</a> Behavioural brain research. 151 (1-2), 209-209 (2004).</li><li>Mishima, K., Ikeda, T., Yoshikawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brief+post-hypoxic-ischemic+hypothermia+markedly+delays+neonatal+brain+injury.">Brief post-hypoxic-ischemic hypothermia markedly delays neonatal brain injury.</a> Brain development. 19 (5), 326-326 (1997).</li><li>Young, R. S., Olenginski, T. P., Yagel, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+graded+hypothermia+on+hypoxic-ischemic+brain+damage:+a+neuropathologic+study+in+the+neonatal+rat.">The effect of graded hypothermia on hypoxic-ischemic brain damage: a neuropathologic study in the neonatal rat.</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 14 (6), 929-929 (1983).</li><li>Bederson, J. B., Pitts, L. H., Germano, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+2,3,5-triphenyltetrazolium+chloride+as+a+stain+for+detection+and+quantification+of+experimental+cerebral+infarction+in+rats.">Evaluation of 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride as a stain for detection and quantification of experimental cerebral infarction in rats.</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 17 (6), 1304-1304 (1986).</li><li>Cai, J., Kang, Z., Liu, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrogen+therapy+reduces+apoptosis+in+neonatal+hypoxia-ischemia+rat+model.">Hydrogen therapy reduces apoptosis in neonatal hypoxia-ischemia rat model.</a> Neuroscience letters. 441 (2), 167-167 (2008).</li><li>Grow, J., Barks, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+of+hypoxic-ischemic+cerebral+injury+in+the+term+infant:+current+concepts.">Pathogenesis of hypoxic-ischemic cerebral injury in the term infant: current concepts.</a> Clinics in perinatology. 29 (4), 585-585 (2002).</li><li>Aden, U., Halldner, L., Lagercrantz , H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aggravated+brain+damage+after+hypoxic+ischemia+in+immature+adenosine+A2A+knockout+mice.">Aggravated brain damage after hypoxic ischemia in immature adenosine A2A knockout mice.</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 34 (3), 739-739 (2003).</li></ol>

O roedor modelo HIE pós-natal é um modelo estabelecido que recapitula hipóxia cerebral que ocorrem no período peri-natal em recém-nascidos. Extensos estudos de caracterização histológica e imunocitoquímica têm demonstrado que o roedor 7 dias de idade tem a maturidade do cérebro análogo ao modelo um terceiro trimestre 7 feto humano. O modelo HIE roedor foi muito informativo para a compreensão dos mecanismos da lesão cerebral de peri-natal hipóxia 2, onde as intervenções, tais como hipotermia foram valid...

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		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Sprague-Dawley Rat Pups</td>
<td>Animal</td>
<td>Charles River Laboratories</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Isoflurane</td>
<td>Surgery</td>
<td>Aerrane,Baxter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>8% Oxygen/ 92% Nitrogen Gas</td>
<td>Surgery</td>
<td>Airgas</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride </td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>T8877</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Phosphate buffered saline (PBS) pH 7.4 </td>
<td>Reagent</td>
<td>Gibco/Invitrogen</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Paraformaldehyde</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>P6148</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

the hypoxic ischemic encephalopathy model of perinatal ischemia

Encefalopatia hipóxico-isquêmica (EHI) é a conseqüência de asfixia sistêmica que ocorre no nascimento. Vinte e cinco por cento dos recém-nascidos com EHI desenvolver seqüelas graves e permanentes neuropsicológicos, incluindo retardo mental, paralisia cerebral e epilepsia. Os resultados da HIE são devastadores e permanentes, tornando-se fundamental para identificar e desenvolver estratégias terapêuticas para reduzir a lesão cerebral em recém-nascidos com EHI. Para o efeito, o modelo de rato neonatal para hipóxico-isquêmica lesão cerebral foi desenvolvido para este modelo condição humana. O modelo HIE foi validado por Vannucci et al 1 e desde então tem sido amplamente utilizado para identificar mecanismos de lesão cerebral resultante da isquemia perinatal hypoxia-2 ​​e para testar potenciais intervenções terapêuticas 3,4. O modelo HIE é um processo em duas etapas e envolve a ligadura da artéria carótida comum esquerda, seguida da exposição a um ambiente hipóxico. Fluxo sangüíneo cerebral (CBF) no hemisfério ipsilateral à artéria carótida ligada não diminui por causa do fluxo sanguíneo colateral através do polígono de Willis, no entanto com a tensão mais baixa de oxigênio, a CBF no hemisfério ipsilateral diminui significativamente e resulta em lesão isquêmica unilateral . O uso de cloreto de 2,3,5-trifeniltetrazólio (TTC) a mancha e identificar o tecido cerebral isquêmico foi originalmente desenvolvida para modelos adultos de isquemia cerebral de roedores 5, e é usado para avaliar a extensão da infarctin cerebral em momentos iniciais até 72 horas após o evento isquêmico 6. Neste vídeo, demonstramos o modelo de lesão hipóxico-isquêmica no cérebro de ratos pós-natal ea avaliação do tamanho do infarto usando coloração TTC.

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The Hypoxic Ischemic Encephalopathy Model of Perinatal Ischemia

O modelo de ratos pós-natal para hipóxico-isquêmica lesão cerebral é um modelo bem estabelecido de humanos encefalopatia hipóxico isquêmica neonatal (HIE). Neste artigo, descrevemos o modelo de HIE em filhotes de ratos pós-natal.

O Modelo de encefalopatia hipóxico isquêmica Perinatal da Isquemia

Hypoxic-Ischemic Encephalopathy (HIE) is the consequence of systemic asphyxia occurring at birth. Twenty five percent of neonates with HIE develop severe ...

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35.4K visualizações.  Stanford University School of Medicine. O modelo de ratos pós-natal para hipóxico-isquêmica lesão cerebral é um modelo bem estabelecido de humanos encefalopatia hipóxico isquêmica neonatal (HIE). Neste artigo, descrevemos o modelo de HIE em filhotes de ratos pós-natal.