JoVE Logo
АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Дрозофилы полезны в изучении генетических или экологических манипуляций, которые влияют на поведения, такие как спонтанной двигательной активности. Здесь мы опишем протокол, который использует мониторы с инфракрасными лучами и анализа данных программного обеспечения для количественного спонтанной двигательной активности.

Аннотация

Дрозофилы была использована как отличный модельного организма для изучения окружающей среды и генетические манипуляции, которые влияют на поведение. Одним из таких поведение стихийно двигательную активность. Здесь мы опишем наш протокол, который использует Drosophila населения мониторы и системы слежения, что позволяет непрерывный мониторинг спонтанной двигательной активности мух в течение нескольких дней за один раз. Этот метод прост, надежен и цель и может быть использован для изучения влияния старения кожи, пола, изменения в калорийности пищи, помимо наркотиков, или генетических манипуляций, которые имитируют человеческие болезни.

Введение

Плодовые мушки, дрозофилы, были использованы в качестве ценного модельного организма для изучения механизмов, лежащих сложные поведения, такие как обучение и память, социальное взаимодействие, агрессии, наркомании, сна, сенсорной функции, ухаживания и спаривания 1,2. Один поведение, которое было изучено с помощью нескольких протоколов является спонтанным двигательную активность. Отрицательный geotaxis был одним из первых методов, разработанных для измерения Drosophila активность, и этот протокол включает измерение процент мух, которые достигают определенного высоту флакона после мухи встряхивали в нижней части контейнера 1,3. Этот способ имеет преимущества быть простой, недорогой, и так как он не требует никакого специального оборудования она может быть выполнена в любой лаборатории. Он был использован в качестве ценного инструмента отбора для изучения влияния различных генетических манипуляций на лету мобильности 3. Тем не менее, пришло время и трудоемкийй имеет возможность смещения из-за переменной сотрясением флаконов и человека записей.

Метод отрицательный geotaxis была повышена за счет развития метода быстрого итеративного Негативный Geotaxis (КОЛЬЦО) 4,5, который принимает фотографии лету флаконах следующие сотрясение мух на дно. Преимущество этого протокола является его чувствительность и возможность проверки большого количества мух флаконах в то же время. Тем не менее, этот протокол все еще имеет возможность ошибки человека, и только измеряет негативные geotaxis. Другие лаборатории использовали простое наблюдение в культуре флаконах для определения двигательной активности 6.

Недавно были разработаны несколько систем видеорегистрации для измерения летать двигательную активность. Один протокол видеонаблюдение дает время для регулировки перед записью 7. Способ, описанный на Slawson и соавт. Также использует импульс воздуха, чтобы остановить movemenт до начала записи, которые потенциально могут быть стресс для животных 7. Этот метод предоставляет информацию о средней скорости, максимальной скорости, времени проводят в движении, и т.д. Другой трехмерная система слежения измеряет максимальной скорости отдельных мух в течение ~ 0,2 секунды свободного полета отрыв 8. Трехмерное протокол видеонаблюдение использует мух, выражающие GFP и несколько камер, оснащенных фильтрами, позволяющими для обнаружения флуоресценции для определения летучей мобильность 9. Мухи в этом протоколе, как правило, обладают цилиндрические образцы полета, который является потенциально из-за форме Drosophila культуры флаконы 10. Этот метод был усовершенствован с помощью купол, который позволяет измерения самопроизвольное движение двух мух 11. Способ высокой пропускной что использует камеру для автоматического контроля и количественной оценки индивидуального и социального поведения дрозофилы был также описано 12. Цзоу др.др.. разработала поведенческий систему монитора (BMS), которая использует два помощью компьютера камер для записи поведения жизни, и движения, такие как отдыха, перемещение, летать, еды, питья или смерти индивидуального tephritid дрозофил 13. Несколько других видео системы были разработаны для контроля полетов поведенческую активность 14,15.

Здесь мы опишем метод для количественного Drosophila деятельность, которая использует мониторы населения. Эти мониторы размещены в и температуры контролируемой влажностью инкубаторов при 25 ° С на 12 час день-ночь светового цикла. Каждый монитор население имеет инфракрасные лучи, размещенные в кольцах, расположенных на трех разных высотах. Каждый раз, когда муха движется по кольцам он прерывает инфракрасный луч, который записывается с помощью микропроцессора, которые независимо учета и рассчитывает на активность мух в пузырьке. Микропроцессор будет загружать об активности в пузырьке к компьютеру через определенные пользователем intervaLs, которые могут изменяться от 1 секунды до 60 минут. Описанный здесь метод предоставляет достаточно времени для мух, чтобы приспособиться к новой среде и позволяет одновременного измерения на спонтанную двигательную активность целых 120 популяций мух. Кроме того, мы опишем приготовление пищи, летать обслуживания, настройке мобильность населения мониторы в контролируемой температурой инкубаторов и потенциальных факторов, которые могут повлиять результаты. Этот метод может быть использован для изучения, как различные экологические или генетические изменения влияют на спонтанную двигательную активность мух.

протокол

Примечание: штамм Canton-S является стандартным дикого типа фон ма, полученна из Bloomington Stock Center.

1. Приготовление блюд и Рецепт для 1000 мл продовольствия

Примечание: В этом разделе описывается протокол для приготовления пищи. Большие металлические горшки используются для приготовления около 18 л пищи за один раз. Протокол, описанный здесь сокращенных и использует 1000 мл H 2 O. Питание в автоклаве в два раза.

  1. Смешайте 113 г сахарозы и 28 г пивных дрожжей в 643 мл воды. Оставьте ингредиентов на горячем наборе пластины при 25 ° С с мешалкой для смешивания в течение 15 минут.
  2. Автоклав решение еда в течение 20 мин.
  3. Смешайте 49 г кукурузной муки и 8,1 г агара в 268 мл воды и добавить в автоклавного пищевой смеси, описанной в шаге 1.2. Хорошо перемешать с большой ложкой или венчиком.
  4. Автоклав смесь пищевой течение еще 20 мин.
  5. Поместите продукты на тарелку и дайте остыть при постоянном перемешивании с мешалкой. Яе дополнительные решения следует добавлять в пищу, например, мифепристона (RU486), держать еду на плитке, созданной при 60 ° С и добавить решение, когда пища достигает необходимой температуры.
  6. Растворите 2,4 г tegosept в 10,7 мл 100% этанола и держать на холодной тарелке мешалкой до полного растворения и смешивания в течение 15 мин.
  7. Добавить tegosept решение на питание, когда температура пищи является 60 ° C и хорошо перемешать.
  8. С помощью насоса или пищевой дозатор лить около 10 мл пищи в широком флаконе. При использовании продовольственной диспенсер можно вылить еду одновременно в 100 широких пластиковых флаконах (1 лоток) за один раз.
  9. Обложка флаконы с Kimwipes и марли и оставить еду при комнатной температуре в течение 12-24 часов, чтобы остыть. Храните продукты при 4 ° С и использовать в течение 3-4 недель. Разминка еду до комнатной температуры перед использованием для летучей работы.

2. Подготовка стеклянных флаконах

  1. Подготовка пищи в соответствии с протоколом, перечисленных в пункте 1.
  2. Алиготе 5 мл пищи в каждую узкой, стеклянный флакон, который является правильный размер для мониторов населения. Это количество пищи должно быть достаточно низким, чтобы быть ниже нижнего кольца монитора населения.
  3. После того, как пища остывает до комнатной температуры покрытия флаконов с губкой пробками и держать их при температуре 4 ° С в течение до 2 недель. Потому что количество пищи во флаконе является довольно низким, то лучше использовать пищу в течение недели или двух, чтобы предотвратить любую сушку.
  4. Разминка флаконов до комнатной температуры перед использованием.

3. Поддержание Родительского мух

  1. Grow мух в широких пластиковых флаконах с стандартной лабораторной пищи и держать флаконы в увлажненной контролируемой температурой окружающей среды камере при 25 ° С на 12 час цикле свет / темнота. Период дневного света начинается в 6:00 утра в этой лаборатории.
  2. Утром ясно, взрослых рейсы из флаконов, из которых будут собраны родительские мухи.
  3. Сбор вновь eclosed Flieс и разделить их по полу на CO 2 площадки в 8 часов после вылупления, чтобы убедиться, что женские мухи девственники. Мухи начинают спариваться 8 ч после вылупления.
  4. Когда Дева мужские и женские мухи от 5 до 10-дневного возраста, положить 10 мужчин и 10 женщин мух в пробирку со стандартной пищи и несколько зерен активных дрожжей на вершине.
    Примечание: Контроль плотность личинок с использованием того же количества мух и держать их в пробирку в течение двух дней. Добавление активных дрожжей способствует яйценоскости.
  5. Держите мух спариваться и откладывать яйца в контролируемой температурой окружающей среды камере при 25 ° С при 12-часовом цикле свет / темнота в течение 2 дней. Настройка 5-10 флаконов родительских мух.
  6. Pass мух к новой пластиковой флакон через день и держать флаконы с яиц в инкубаторе при 25 ° С

4. Совокупность экспериментальных мух

  1. После 9 дней мухи начнет eclose из флаконов, где parentaл мухи отложили яйца (описанные в шаге 3.6.). Ясно и отбросить мух, что eclosed в первый день и вернуться флаконов в инкубаторе. Большинство мух eclosed на 1 день составляют женщины. Более синхронизированы населения мух будет eclose на 2 день.
  2. В 24 часа в сутки место вновь eclosed мухи на СО 2 колодки и собрать 25 мужские и 25 женские мух на флаконах с кистью или металлической ложкой. Хранить мух на СО 2 прокладок в течение короткого периода времени, чтобы свести к минимуму влияние СО 2. Запишите день вылупления на флаконе. Соберите по крайней мере 5 дублирующие флаконы для экспериментальных и для контрольных групп.
  3. Хранить флаконов в контролируемой температурой окружающей среды камер при 25 ° С при 12-часовом цикле свет / темнота.
  4. Pass мух на новый пластиковый флакон через день, используя воронку.
  5. Возраст мух, пока желаемый возраст для экспериментов не будет достигнута.

5. Настройка подвижности Мониторы

  1. Наведитенаселение контролирует в инкубаторе с регулируемой температурой.
  2. Подключите каждый монитор с помощью телефонного кабеля 4-проводной к источнику питания Interface Unit (PSIU) через 5-позиционная раскольников (многоканальный), которые могут быть подключены до 5 отдельных мониторов к одному отверстию в PSIU. См. рисунки 1А и 2В.
  3. Подключите PSIU к розетке линии (100-240). Подключите выходной разъем питания в одном из гнезд PSIU спаривания 2. На прилегающей зеленый свет горит зеленым цветом, когда подключен правильно.
  4. Подключите PSIU к универсальной последовательной шины (USB) оборудования. Подключите кабель USB между аппаратным USB с Macintosh или Windows PC для записи данных. Было бы лучше иметь компьютер, посвященный только для сбора данных с коллекции проходит в течение нескольких дней за один раз.
  5. Скачать программное обеспечение USB (PSIUdrivers.zip). Драйвер USB используется интерфейс источника питания и должен быть загружен только один раз. Он синтезируетканала передачи данных между компьютерной программой и PSIU / деятельности мониторов. Для использования ПК COM порта и для Macintosh использовать простой последовательный порт.
  6. Скачать компьютерную программу для Macintosh OSX (Intel) или для Windows PC (XP/Vista/7) программ, следуя инструкциям производителя Notes 308.pdf.
  7. Запустите компьютерную программу и настроить программу, нажав на предпочтениях, огней или мониторы. Программа будет работать, пока пользователь не выберет "бросить", чтобы остановить программу. Если компьютерная программа или компьютер выключен мониторы будут продолжать рассчитывать перерывов луча, но на счету не будет записываться, пока программа не будет вновь запущен. В этом случае первое чтение будет включать в себя все счетчики с момента последнего PSIU послал данные на компьютер.
  8. Выберите вкладку Настройки и выберите последовательный порт, PSIU для Macintosh и COM для ПК.
  9. Выберите интервал считывания, которая колеблется от нескольких секунд, минут или час.
    10. <литий> Выберите мониторов: Каждый монитор имеет свой уникальный номер, который задается производителем. Выберите Monitor диапазона, соответствующего цифры, указанные на мониторы производителем.
  10. Коробка огни: Убедитесь, что все мониторы подключены правильно, который отмечен зеленым светом рядом с номером монитора на программное обеспечение. Красный свет указывает, что связь потеряна, и черный ящик показывает, что система выключена или неправильной установки.

6. Настройка эксперимента

  1. Удалить стеклянные флаконы, содержащие пищу от 4 ° С, и пусть они нагреться до комнатной температуры.
  2. Отдельные мужские и женские мухи того же возраста на CO 2 площадки. Для процессов старения можно начать обучение мобильности еще в 3-дневном возрасте.
  3. Положите 10 мужской или 10 женского мух в каждом стеклянном флаконе с кормом. Используют не менее трех флаконов для каждой экспериментальной и контрольной линии мух и для каждого пола.
  4. Держите VIлов на их стороне, пока мухи не оправиться от СО 2 для обеспечения мух не застрять в еде. Отдельные мухи приблизительно в 8:00 и оставить их около 2 часов при комнатной температуре, чтобы оправиться от CO 2.
  5. Поместите пробирки внутри населения мониторов, размещенных в инкубаторах.
  6. Откажитесь от данных, собранных в первые 24 часа после того, как мухи помещаются в инкубатор, чтобы позволить им адаптироваться к новой среде.
  7. Pass мух после 3 или 4 дня в новых флаконах, чтобы избежать высыхания пищи. Если мухи склонны к смерти или возраст 40 дней и старше, пройти мух через 2 дня и использования данных, собранных за день 2. Кроме того, использование более трех ампул в группе, чтобы обеспечить адекватные повторов. Данные из флаконов с мертвых мух следует сбрасывать со счетов и не включены в анализ.

7. Запуск активность Мониторы и расчете общей спонтанной активности

  1. Выберите предпочтения - интервал для сбора данных <.бр /> Примечание: Компьютерная программа позволяет сбор данных с интервалами от 1 секунды до 60 минут. 10 и 30 минутных периодов были найдены, чтобы обеспечить адекватную информацию о подвижности без подавляющее число временных точках. На выбранный период времени, программа будет отправлять текущий общий счет для каждого монитора к компьютеру и начать отсчет снова с нуля. Компьютерная программа хранит данные в новой папке, созданной системы данных компьютера. Данные, собранные в каждом мониторе хранятся отдельно, и индивидуальные текстовые документы создаются для каждого флакона. Данные собирали непрерывно, пока программа работает.
  2. В конце эксперимента, сканировать данные с помощью FileScan110X для Macintosh OSX (Intel) или SystemMB108 для программы ПК с Windows (XP/Vista/7).
    Примечание: Сканирование Программа устраняет дубликаты показания и убеждается, что записи являются полными.
  3. Сохранить данные, собранные в течение определенного времени и рeriod дней. Выберите экспериментальный имя и скопируйте файлы из папки данных компьютера для анализа.
    Примечание: В это время, интервалы активности могут быть изменены и преобразованы в разных. Исходные данные останутся хранятся в папке данных компьютера и могут быть получены, если они не удаляются.

8. Анализ данных

  1. Скопируйте данные, собранные в текстовых файлах в колонкам таблицы Excel для анализа данных. Данные, собранные с помощью этого программного обеспечения в столбцах, которые содержат числа, представляющие общую деятельность в одном мониторе в течение определенного периода времени, выбранной исследователем.
    Примечание: Данные, собранные для каждого монитора в отдельных текстовых файлах. Есть 32 колонки для каждого монитора. Первые шесть столбцы пусты и содержат только 0; Следующие три содержат данные, собранные на нижнем кольце, в середине и в верхнем кольце. Остальные каналы могут быть удалены, поскольку они не содержат никаких данных. Каждое кольцо выводитодно значение за время. См. снимок экрана исходных данных на рисунке 2.
  2. Вычислить общую активность в пределах желаемого периода времени для каждого монитора, которая представляет собой сумму активностью, собранную в трех различных высотах инфракрасных лучей.
    Примечание: Период времени может составлять от нескольких часов, 24 часов или нескольких дней.
  3. Определить среднюю активность двигательную и стандартное отклонение между 3 мониторов, которые представляют 3 биологических повторяет.
    Примечание: данные могут быть проанализированы на статистическую значимость с помощью ряд испытаний. Т-тест двухсторонний студентов-х годов, с односторонним дисперсионный анализ (ANOVA) и тест после специальной Туки HSD могут быть использованы для определения влияния нескольких экологических и генетических манипуляций на 24 часов спонтанной двигательной активности 16. Есть целый ряд других программ, которые можно использовать и которые были ранее опубликованных 17.

Результаты

Спонтанной двигательной активности у дрозофилы зависит от летучей пола (фиг.3А), калорийности пищи (рис. 3б) и цикле свет / темнота. Как только свет выключен муха деятельности резко снижается. 3А иллюстрирует 24 часа двигательной активности записи мужски...

Обсуждение

Спонтанное двигательную активность мух зависит от многих факторов, таких как возраст, генетический фон и пола 2,13,18,19. Кроме того, экологические факторы, такие как калорийности пищи, температуры окружающей среды, добавлением различных препаратов, и день / ночь светового цикла може?...

Раскрытие информации

Нам нечего раскрывать.

Благодарности

Эта работа была поддержана грантом Национального института здоровья (AG023088 БР).

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
Sucrose FCC Food Grade 100 LB,Fisher Scientific MP BiomedicalsICN90471380
Brewer’s YeastFisher Scientific MP BiomedicalsICN90331280
Drosophila Agar FineSciMartDR-820-25F
CornmealFisher Scientific MP BiomedicalsICN90141125
Methyl4-hydroxybenzoate, tegoseptSigmaH5501-5KG
EtOHPharmco-AAPER111000200
Active Dry YeastFisher ScientificICN10140001
Fly CO2 padLabScientificBGSU-7
Stereo MicroscopeOlympusSZ40
Drosophila carbon dioxide (CO2) tankAirgasUN1013
Small paint brush for pushing the flies
Shell vial wideFischer ScientificAS519
Buzzplugs for wide plastic vialsFischer ScientificAS275
Glass vials (25 x 95 mm)Fischer Scientific Kimble 60931-8AS-574
Sponge plugs for glass vialsSciMartDR-750
Drosophila Food DispenserApplied Scientific (Fischer Scientific)AS780Q
DPM Drosophila Population MonitorTrikinetics Inc.
DC Power Supply with line cordTrikinetics Inc.
PSIU9 The Power Supply Interface UnitTrikinetics Inc.
Telephone cables and 5 way splittersTrikinetics Inc.
Universal Serial Bus (USB) hardwareTrikinetics Inc.
Macintosh or Windows PC with UCB port
DAMSystem308X Data Acquisition Software for Macintoch OSX (Intel)www.trikinetics.com
DAMSystem308 Data Acquisition Software for Windows PC (XP/Vista/7)www.trikinetics.com
[header]
DAMFileScan108X software for Macintoshwww.trikinetics.com
DAMFileScan108X software for Windows PC (XP/Vista/7)www.trikinetics.com
USB software (PSIUdrivers.zip)www.trikinetics.com
DAMSystem Notes 308(http://www.trikinetics.com/Downloads/DAMSystem%20Notes%20308.pdf

Ссылки

  1. Ali, Y. O., Escala, W. E., Ruan, K., Zhai, R. G. Assaying Locomotor, Learning, and Memory Deficits in Drosophila Models of Neurodegeneration. J. Vis. Exp. 49, 2504 (2011).
  2. Jones, M. A., Grotewiel, M. Drosophila as a model for age-related impairment in locomotor and behaviors. Exp. Gerontol. 46 (5), 320-325 (2011).
  3. Grotewiel, M. S., Martin, I., Bhandari, p., Cook-Wiends, E. Functional senescence in Drosophila melanogaster. Aging Res. Rev. 4 (3), 372-397 (2005).
  4. Gargano, J. W., Martin, I., Bhandari, P., Grotewiel, M. S. Rapid Iterative Negative Geotaxis (RING): a New Method for Assessing Age-related Locomotor Decline in Drosophila. Exp. Gerontol. 40 (5), 386-395 (2005).
  5. Nichols, C. D., Bechnel, J., Pandey, U. B. Methods to assay Drosophila behavior. J. Vis. Exp. 61, 3791 (2012).
  6. Long, T. A., Rice, W. R. Adult locomotor activity mediates Intralocus sexual conflict in a laboratory-adapted population of Drosophila melanogaster. Proc. Biol. Sci. 274 (1629), 3105-3112 (2007).
  7. Slawson, J. B., Kim, E. Z., Griffith, L. C. High-resolution video tracking of locomotor in adult Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. 24 (24), 1096 (2009).
  8. Marden, J. H., Rogina, B., Montooth, K. L., Helfand, S. L. Conditional tradeoff between aging and organismal performance of Indy long-lived mutant flies. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 100 (6), 3369-3372 (2003).
  9. Grover, D., Yang, J., Tavaré, S., Tower, L. Simultaneous tracking of fly movement and gene expression using GFP. BMC Biotechnol. 8, 93 (2008).
  10. Grover, D., Yang, J., Tavaré, S., Tower, J. Simultaneous tracking of movement and gene expression in multiple Drosophila melanogaster flies using GFP and DsRED fluorescent reporter transgenes. BMC Res Notes. 2 (58), 1-11 (2009).
  11. Ardekani, R., et al. Three-dimensional tracking and behaviour monitoring of multiple fruit flies. J. R. Soc. Interface. 10 (78), (2013).
  12. Branson, K. A., Robie, A. A., Bender, J., Perona, P., Dickinson, M. H. High-throughput ethomics in large groups of Drosophila. Nat Methods. 6 (6), 451-457 (2009).
  13. Zou, S., et al. Recording Lifetime Behavior and Movement in an Invertebrate Model. PLOS One. 6 (4), (2011).
  14. Valente, D., Golani, I., Mitra, P. P. Analysis of the trajectory of Drosophila melanogaster in a circular open field arena. PLoS One. 2 (10), 1083 (2007).
  15. Inan, O. T., Marcu, O., Sanchez, M. E., Bhattacharya, S., Kovacs, K. T. A portable system for monitoring the behavioral activity of Drosophila. J Neurosci. Methods. 202 (1), 45-52 (2011).
  16. Parashar, V., Rogina, B. dSir2 mediates the increased spontaneous physical activity in flies on calorie restriction. Aging. 1 (6), 529-541 (2009).
  17. Kaneuchi, T., Togawa, T., Matsuo, T., Fuyama, Y., Aigaki, T. Efficient measurement of H2O2 resistance in Drosophila using an activity monitor. Biogerontology. 4 (3), 157-165 (2003).
  18. Carey, J. R., et al. Age-specific and lifetime behavior patterns in Drosophila melanogaster and the Mediterranean fruit fly, Ceratitis capitata. Exp. Gerontol. 41 (1), 93-97 (2006).
  19. Rhodenizer, D., Martin, I., Bhandari, P., Pletcher, S. D., Grotewiel, M. Genetic and environmental factors impact age-related impairment of negative geotaxis in Drosophila by altering age-dependent climbing speed. Exp. Gerontol. 43 (8), 739-749 (2008).
  20. Osterwalder, T., Yoon, K. S., White, B. H., Keshishian, H. A conditional tissue-specific transgene expression system using inducible GAL4. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 98 (22), 12596-12601 (2001).
  21. Dietzl, G., et al. A genome-wide transgenic RNAi library for conditional gene inactivation in Drosophila. Nature. 448 (7150), 151-156 (2007).
  22. Chiu, J. C., Low, K. H., Pike, D. H., Yildirim, E., Edery, I. Assaying locomotor activity to study circadian rhythms and sleep parameters in Drosophila. J. Vis. Exp. 43, 2157 (2010).
  23. Pfeiffenberger, C., Lear, B. C., Keegan, K. P., Allada, R. Locomotor activity level monitoring using the Drosophila Activity Monitoring (DAM) System. Cold Spring Harbor Protoc. 11, (2010).
  24. Pfeiffenberger, C., Lear, B. C., Keegan, K. P., Allada, R. . Processing circadian data collected from the Drosophila Activity Monitoring (DAM) System. Protoc. 11, (2010).
  25. Ardekani, R., Tavaré, S., Tower, J. Assessing senescence in Drosophila using video tracking. Methods Mol. Biol. 965, 501-516 (2013).

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

86Fly

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены