JoVE Logo
АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

In this manuscript, experimental techniques, including blood preparation, confocal microscopy, and lysis rate analysis, to examine the morphological differences between normal and abnormal clot structures due to diseased states are presented.

Аннотация

Fibrin is an extracellular matrix protein that is responsible for maintaining the structural integrity of blood clots. Much research has been done on fibrin in the past years to include the investigation of synthesis, structure-function, and lysis of clots. However, there is still much unknown about the morphological and structural features of clots that ensue from patients with disease. In this research study, experimental techniques are presented that allow for the examination of morphological differences of abnormal clot structures due to diseased states such as diabetes and sickle cell anemia. Our study focuses on the preparation and evaluation of fibrin clots in order to assess morphological differences using various experimental assays and confocal microscopy. In addition, a method is also described that allows for continuous, real-time calculation of lysis rates in fibrin clots. The techniques described herein are important for researchers and clinicians seeking to elucidate comorbid thrombotic pathologies such as myocardial infarctions, ischemic heart disease, and strokes in patients with diabetes or sickle cell disease.

Введение

Повреждение эндотелия накладки кровеносных сосудов является исправлено с помощью гемостаза ответ, или образования сгустка крови. Когда кровь проникает во внеклеточный матрикс, факторы ткани активации тромбоцитов в крови, которые способствуют инициации каскада свертывания. Ключ механический компонент этого процесса исцеления фибрина матрица, состоящая из фибрина волокон, которые являются весьма эластичен, и может выдержать большие силы 1-4. Многие исследователи изучали структуру формирования и функции фибрина широко в последние десятилетия 5-13.

Пациенты с такими заболеваниями, как сахарный диабет и серповидно-клеточная имеют повышенный риск развития тромботических осложнений, таких как инфаркт миокарда, ишемическая болезнь сердца, и гладит 14-19. Более 2 миллионов человек только что поставили диагноз сахарный диабет каждый год в Соединенных Штатах. Есть два типа сахарного диабета: тип I, гдеорганизм не может производить достаточное количество инсулина, и типа II, где тело становится резистентным к инсулину. Среди больных сахарным диабетом, сердечно-сосудистые заболевания (ССЗ) являются причиной 80% заболеваемости и смертности, связанной с заболеванием 20,21.

Серп клеточная болезнь (SCD) является генетическое заболевание крови, что влияет на более чем 100000 человек в Соединенных Штатах 22. ВСС является заболеванием, точка-мутации, что вызывает красные кровяные клетки, чтобы стать в форме полумесяца, что затрудняет клетки проходить через сосудистую крови 23. Оба этих болезненных состояний увеличить шансы развития атеротромбоза условия в организме. Одной из причин этого является то, результат измененной структурой фибрина и функции в болезненные состояния, 14,24-26.

В обоих диабетом и серповидно-клеточной анемией, есть гиперкоагуляция и hypofibrinolysis деятельность, которая вызывает атеротромбоза и сердечно-сосудистых заболеваний (CВ.Д.) по сравнению со здоровыми пациентами 17,27,28. Известно, что hypofibrinolysis способствует развитию атеросклероза и порождает повторных ишемических событий для пациентов с преждевременной ишемической болезни сердца 29. В текущем рукописи, мы исследовали роль фибрина физических свойств в данном обстановке. Сгусток фибрина структуры в не-больных пациентов состоят из тонких волокон, крупных пор и в целом менее плотной 14,24. Увеличение пористости и менее плотные сгустки фибрина у здоровых пациентов были обнаружены чтобы облегчить фибринолиз 16. В hyperthrombotic условий, таких как диабетическая и серповидно-клеточной анемии, происходит увеличение производства фибриногена, в результате чего концентрация фибриногена, чтобы увеличить от нормальных уровней 2,5 мг / мл у здоровых пациентов 30-33. Сгустков фибрина, образованные у больных сахарным диабетом были найдены, чтобы быть менее пористым, более жесткой, больше точки ветвления, и плотнее, по сравнению с здоровых, не диаметромBetic пациентов 14,24,33-35. Изменена структура фибрина является результатом гликирования механизмов, которые происходят в белках, участвующих в тромба. Неэнзиматической (необратимое) гликирование происходит, когда молекулы глюкозы связываются с остатками лизина в молекуле фибриногена, который ингибирует человеческий фактор XIIIa (FXIIIa) от правильно сшивающих глютамина и лизина 33,36,37.

Структурный анализ фибрина сетей была изучена в последнее время. В частности, исследователи использовали электронную микроскопию и 3D-реконструкция фибрина сетей 38, исследованных как оба внутрисосудистых (эндотелиальные) клетки и внесосудистые (фибробласты и гладкие мышцы) клетки влияют фибрина структуру 39, используемых вязкоупругих и спектральный анализ анализировать фибрина структуры 40, и развитые корреляции между структурой фибрина и механических свойств с помощью экспериментальных и расчетных подходов 41 . В центре внимания данного исследования заключалась в разработке сгусток структуры моделируемых условиях диабетической и молот тромбоза клеток и использовать конфокальной микроскопии для исследования структуры и функции тромбов в болезненные состояния. Сгустки фибрина были сформированы из фибриногена человека, тромбина человека и FXIIIa. Сгустки лизируют с помощью плазмина. Для моделирования диабетических условий, повышение концентрации фибриногена инкубировали в растворе глюкозы, чтобы вызвать в пробирке фибриногена гликирование. Для имитации серповидно-клеточной анемией условия свертывания, повышение концентрации фибриногена смешивают с серповидно-клеточной гематокрита, полученной от больных, как это сделано ранее в нашей группе 42. Эти методы были использованы для изучения структуры и функций, участвующих в образовании сгустка фибрина и фибринолиза при болезненных состояниях, а также механизмы, которые вызывают ССЗ. На основании текущей информации об этих заболеваний, гликозилированного фибринового сгустка структуры были плотнее с меньшим Аой мелкие поры. Фибрина сгустки с красных кровяных клеток из серпа больных клеток (эритроцитов) также плотнее и отображается агрегацию эритроцитов и агломерированные фибрина кластеров. Это хорошо установлено, что явление было определено ранее 43. Было также высказано предположение, что скорость фибринолиза будет значительно ниже в гликированного сгустков фибрина с и без плазмина пониженном по сравнению со здоровыми, нормального фибрина. Результаты показали, что для гликированного сгустков фибрина, значительно отличающиеся результаты скорости лизиса были обнаружены только в условиях пониженной концентрации плазмина. Этот экспериментальный методика с использованием конфокальной микроскопии обеспечивает значительные преимущества по сравнению с другими методами обработки изображений, потому что клетки и белки остаются в их нативном состоянии, что позволяет захват видео в реальном времени от активность по свертыванию. Этот метод синтетически, индуцирующих свертывание и дешевле, и больше времени эффективным, чем получение образцов пациентов и фильтрации человекабелков и ферментов. Кроме того, с помощью разделенных белков и ферментов для синтеза сгустки, тромбы были стандартизированы так, чтобы не было вариабельность между образцами, в результате других белков в плазме.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

протокол

ПРИМЕЧАНИЕ: Следующий протокол придерживается руководящих принципов, установленных ведомственного комитета (IRB) в Джорджии.

1. Сбор крови и красных кровяных Порядок Выделение клеток

  1. Сбор 40-120 мл крови от доноров в 10 мл гепаринизированные Vacutainer трубы. Начните РВМС (периферическая кровь Мононуклеированные клеток) изоляции, в 4 часа сбора. В течение этого времени держать кровь при комнатной температуре.
    Примечание: O / N для хранения крови в РТ или в 4 ° С не рекомендуется, поскольку это приведет к снижению выхода РВМС.
  2. Развести всю кровь 1: 1 в ледяной (4 ° С) стерильного PBS.
  3. Пипетка 10 мл охлажденного льдом гидрофильного полисахарида в пустую, стерильную 50 мл коническую трубку. Осторожно передавать разбавленный цельной крови в верхней части гидрофильного полисахарида.
  4. Использование пипетки 25 мл в медленном установки и пипетки крови вдоль стороны трубки очень медленно. Убедитесь, что кровь не смешивается с сахаридом до Centrifugation потому гидрофильный полисахарид является токсичным для клеток и иным образом, выход РВМС будет ниже.
  5. Образцы крови Центрифуга течение 30 мин при 400 х г при 4 ° С. Если возможно, снизить скорость тормоза центрифуги половине максимума для лучшего разделения после центрифугирования.
  6. Аспирируйте от плазмы / тромбоцитов фракции пробы крови центрифугируют. Тщательно аспирата от гидрофильных полисахаридных слой непосредственно над упакованного слоя РБК.
  7. Собирают 8-10 мл эритроцитарной массы и разбавленной 1: 1 с нестерильной 0,9% NaCl раствором.

2. конфокальной микроскопии Оценка гликированного Сгусток сооружения (Имитация Диабетическая сгустки)

  1. Размораживание фибриноген человека и флуоресцентно меченый конъюгат фибриногена человека при 37 ° С.
  2. Внесите следующее в 0,5 мл окончил микроцентрифужную трубку.
    1. Для здоровых, нормальных фибриногена сгустков, смешать фибриноген человека с 10% флуоресцентно-меченного фибриногена человекаконъюгат в 50 мМ Трис / 100 мМ NaCl буфера в концентрации 5 мг / мл.
    2. Для искусственно гликозилированного фибриногена (для имитации диабетических сгустки), инкубировать фибриноген человека и 10% флуоресцентно меченных фибриногена конъюгата в 5 мМ раствора глюкозы, растворенной в 50 мМ Трис / 100 мМ NaCl в течение результате концентрации 6,8 мг / мл.
  3. Обложка микро-центрифужные пробирки с помощью непрозрачного материала, чтобы избежать попадания света. Инкубировать пробирки в водяную баню при 37 ° в течение 48 ч.
  4. Сделайте камеру на предметное стекло микроскопа, путем проставления тонкий клей на 2 сторонах слайда.
  5. После 48 ч периода инкубации, подготовить реагенты для образования фибрина путем размораживания FXIIIa, альфа тромбина при комнатной температуре.
  6. Развести FXIIIa 80 ЕД / мл в 5 мМ CaCl 2 буфера.
  7. Развести тромбина 4 ед / мл в 5 мМ CaCl 2 буфера.
    1. Для нормальных сгустков, убедитесь, что конечные концентрации фибриногена, FXIIIa, и тромбина до 2,5 мг / мл, 20 ед / мл, и 1 ед / мл, соответственно, при объеме 50 мкл.
    2. Для гликированного сгустков, гарантировать, что конечные концентрации фибриногена, FXIIIa, и тромбина являются 3,4 мг / мл, 20 ед / мл, и 1 ед / мл, соответственно, при объеме 50 мкл.
  8. Сразу пипетки 30 мкл раствора фибрина в камере, образованной адгезивом.
  9. Поместите 22 мм х 22 мм покровным стеклом толщиной 0,15 мм в верхней части 2 слоев клея. Печать открытые стороны с клейкой предотвращения сгусток фибрина от высыхания. Убедитесь, что клей не взаимодействует с фибринового сгустка.
  10. Дайте сгустков фибрина для полимеризации в 21-23 ° С в течение 2 ч до конфокальной микроскопии.
  11. Возьмите конфокальной микроскопии изображения тромбов с помощью конфокальной микроскопии с 40X / 1.30 Нефть M27 объектив с 488 нм аргонового лазера.

3. конфокальной микроскопии Оценка сгустков фибрина, содержащих эритроциты от серповидно-клеточная пациентов

  1. Размораживание фибриноген человека и флуоресцентно меченый конъюгат фибриногена человека при 37 ° С.
  2. Внесите следующее в 0,5 мл окончил микроцентрифужную трубку.
    1. Для здорового, нормального фибринового сгустка, смешать фибриноген человека с 10% флуоресцентно меченого конъюгата человеческого фибриногена в 50 мМ Трис / 100 мМ NaCl буфера в концентрации 5 мг / мл.
    2. Для сгустков, содержащих SCD БС, смешать фибриноген человека и 10% флуоресцентно меченого человеческого фибриногена конъюгата в таких 50 мМ Трис / 100 мМ NaCl, что в результате концентрация фибриногена составляет 10 мг / мл.
  3. Этикетка изолированных эритроцитов (как нормальные, так и те, у пациентов с серповидно-клеток, полученных из протокола изоляции РБК), используя решение ячейки-маркировки.
    1. Приостановка клетки при плотности 1 х 10 6 на мл в любой выбранной бессывороточной культуральной среде.
    2. Добавить 5 мкл / мл клеточной суспензии в клеточной маркировки раствора. Все хорошо перемешать, осторожно пипеткой осторожно.
    3. Инкубировать в течение 20 мин при 37 ° С.
    4. Центрифуга меченых подвески труб на 1500 оборотах в минуту в течение 5 мин при 37 ° С.
    5. Удалить супернатант и мягко повторно приостанавливать клетки в 37 ° C среды.
    6. Повторите процедуру промывания (3.3.4 и 3.3.5) еще два раза.
  4. Развести FXIIIa 80 ЕД / мл в 5 мМ CaCl 2 буфера.
  5. Развести тромбина 4 ед / мл в 5 мМ CaCl 2 буфера.
    1. Для обычных сгустков, гарантировать, что конечные концентрации фибриногена, FXIIIa, и тромбина в 2,5 мг / мл, 20 ед / мл, и 1 ед / мл, соответственно, при объеме 50 мкл.
    2. Для сгустков, содержащих SCD БС, обеспечить, чтобы конечные концентрации фибриногена, FXIIIa, и тромбина 5 мг / мл, 20 ед / мл, и 1 ед / мл, соответственно, при объеме 50 мкл.
  6. Пипетка 10 мкл меченых эритроцитов в растворе фибрина. Пипетка 30 мкл фибрина с БС на предметное стекло (см скользить подготовку к GLycated сгустки).
  7. Дайте фибрина для полимеризации в 21-23 ° С в течение 2 ч до конфокальной микроскопии.
  8. Возьмите конфокальной изображения тромбов с помощью конфокальной микроскопии, а также использовать лазеры возбуждения с длинами волн 488 нм и 633 нм для возбуждения флуоресцентно меченный фибрин и эритроциты.

4. конфокальной микроскопии Оценка фибринолиза Цены в гликированного Сгусток структур

  1. Повторите конфокальной микроскопии протокол гликированного сгустков (Протокол шаг 2) для оценки скорости фибринолиза в гликированными сгустков.
  2. Не закрывать концы камеры с чистой клея. Дайте сгустков фибрина дл полимеризации в течение 1,5 ч при 21-23 ° С в герметичном корпусе, содержащем 250 мл воды, чтобы предотвратить обезвоживание.
  3. После полимеризации получить изображения сгустков с помощью конфокальной микроскопии.
  4. Пипетка плазмина в открытый конец камеры и диспергирования плазмин через сгустка через капиллярного действия.
    1. Длянормальные и гликированного эксперименты фибринолиза с нормальной концентрацией, пипетки 25 мкл на 200 мкг / мл плазмин в отверстие камеры.
    2. Для гликированного сгустков с сокращением концентрации, пипетки 25 мкл в 50 мкг / мл в отверстие камеры.
  5. Используйте функцию временного ряда (рисунок 1) в конфокальной программного обеспечения микроскопа, чтобы захватить видео в реальном времени кадры плазмина лизирующим сгусток.
    1. Нажмите режиме сбора, а затем выберите "временных рядов." Выберите количество циклов и интервал времени записи.

5. Расчет фибринолиза цены

  1. Определить скорость лизиса, установив область (2500 мкм 2) и расчета прошедшее время, необходимое для растворения фиксированные области сгустка. Рассчитайте коэффициент лизиса, используя следующее уравнение (рисунок 2):
    figure-protocol-8198

6. Статистический анализ фибринолиза Цены

  1. Анализ данных лизиса с помощью программного обеспечения статистического анализа. Выполните одну сторону ANOVA и пост специальную Тьюки-Крамера теста 44,45.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Результаты

Конфокальной микроскопии анализ гликозилированного фибринового сгустка структур

В конфокальной микроскопии изображения нормальных и гликозилированного сгустков представлены на фиг.3. Конфокальной микроскопии анализ нормальных и гликозилированного сгустк...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Обсуждение

Чтобы получить значимые данные о структуре свертывания механизмов болезненных состояний, важно, чтобы изолировать факторы, участвующие в процессе свертывания, чтобы определить эффекты белков и клеток в этих условиях. Этот протокол был разработан в целях изучения структуры фибриново?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Раскрытие информации

The authors have nothing to disclose.

Благодарности

The authors would like to thank the Lam Lab at Georgia Tech for many helpful discussions in developing the experimental assays. Research reported in this publication was supported by the National Heart, Lung, and Blood Institute of the National Institutes of Health under Award Number K01HL115486 and by New Innovator Grant 1DP2OD007433-01 from the Office of the Director, National Institutes of Health. The content is solely the responsibility of the authors and does not necessarily represent the official views of the National Institutes of Health.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
PBSLife Technologies10010031
Ficoll-Paque (hydrophilic polysaccharide)GE Healthcare45-001-749
10 ml heparinized vacutainer tubesBD Biosciences366643
Human FibrinogenEnzyme Research LaboratoriesN/A
Alexa Fluor 488 human fibrinogen conjugateMolecular ProbesF13191
0.5 ml graduated microcentrifuge tubeFisher Scientific05-408-120
Glucose powderLife Technologies15023-02
FXIIIaEnzyme Research LaboratoriesN/A
VIS Confocal MicroscopeZeiss LSM 510LSM 510
50 mM TrisLonzaS50-642
Calcium Chloride (CaCl2)Sigma Aldrich449709-10G
Vybrant DiD cell-labeling solutionLife TechnologiesL7781
PlasminEnzyme Research LaboratoriesN/A
Sodium Chloride (5 M NaCl)Life TechnologiesAM9759
Statistical Modeling SoftwareIBMSPSS Statistics 22

Ссылки

  1. Averett, R. D., et al. A Modular Fibrinogen Model that Captures the Stress-Strain Behavior of Fibers. Biophysical Journal. 103, 1537-1544 (2012).
  2. Carlisle, C. R., et al. The mechanical properties of individual, electrospun fibrinogen fibers. Biomaterials. 30, 1205-1213 (2009).
  3. Falvo, M. R., Gorkun, O. V., Lord, S. T. The molecular origins of the mechanical properties of fibrin. Biophysical Chemistry. 152, 15-20 (2010).
  4. Guthold, M., Cho, S. S. Fibrinogen Unfolding Mechanisms Are Not Too Much of a Stretch. Structure. 19, 1536-1538 (2011).
  5. Gerth, C., Roberts, W. W., Ferry, J. D. Rheology of fibrin clots II: Linear viscoelastic behavior in shear creep. Biophysical Chemistry. 2 (74), 208-217 (1974).
  6. Nelb, G. W., Kamykowski, G. W., Ferry, J. D. Rheology of fibrin clots. v. shear modulus, creep, and creep recovery of fine unligated clots. Biophysical Chemistry. 13 (81), 15-23 (1981).
  7. Roberts, W. W., Kramer, O., Rosser, R. W., Nestler, F. H. M., Ferry, J. D. Rheology of fibrin clots. I.: Dynamic viscoelastic properties and fluid permeation. Biophysical Chemistry. 1, 152-160 (1974).
  8. Ryan, E. A., Mockros, L. F., Weisel, J. W., Lorand, L. Structural Origins of Fibrin Clot Rheology. Biophysical Journal. 77, 2813-2826 (1999).
  9. Weisel, J. W. Fibrin assembly. Lateral aggregation and the role of the two pairs of fibrinopeptides. Biophysical Journal. 50, 1079-1093 (1986).
  10. Weisel, J. W. The mechanical properties of fibrin for basic scientists and clinicians. Biophysical Chemistry. 112, 267-276 (2004).
  11. Wolberg, A. S. Thrombin generation and fibrin clot structure. Blood Reviews. 21, 131-142 (2007).
  12. Wolberg, A. S., Campbell, R. A. Thrombin generation, fibrin clot formation and hemostasis. Transfusion and Apheresis Science. 38, 15-23 (2008).
  13. Yeromonahos, C., Polack, B., Caton, F. Nanostructure of the Fibrin Clot. Biophysical Journal. 99, 2018-2027 (2010).
  14. Dunn, E. J. Fibrinogen and fibrin clot structure in diabetes. Herz. 29, 470-479 (2004).
  15. Gladwin, M. T., Sachdev, V. Cardiovascular abnormalities in sickle cell disease. Journal of the American College of Cardiology. 59, 1123-1133 (2012).
  16. Collet, J. P., et al. Altered Fibrin Architecture Is Associated With Hypofibrinolysis and Premature Coronary Atherothrombosis. Arteriosclerosis, thrombosis, and vascular biology. 26, 2567-2573 (2006).
  17. Carr, M. E. Diabetes mellitus: a hypercoagulable state. Journal of Diabetes and its Complications. 15, 44-54 (2001).
  18. Ajjan, R. A., Ariëns, R. A. S. Cardiovascular disease and heritability of the prothrombotic state. Blood Reviews. 23, 67-78 (2009).
  19. Standeven, K. F., Ariëns, R. A. S., Grant, P. J. The molecular physiology and pathology of fibrin structure/function. Blood Reviews. 19, 275-288 (2005).
  20. American Diabetes Association. , Available from: http://www.diabetes.org/ (2014).
  21. Alzahrani, S., Ajjan, R. Review article: Coagulation and fibrinolysis in diabetes. Diabetes and Vascular Disease Research. 7, 260-273 (2010).
  22. Sickle Cell Disease Association of America, Inc. , Available from: http://www.sicklecelldisease.org/ (2014).
  23. Stuart, M. J., Nagel, R. L. Sickle-cell disease. The Lancet. 364, 1343-1360 (2004).
  24. Dunn, E. J., Ariëns, R. A. S., Grant, P. J. The influence of type 2 diabetes on fibrin structure and function. Diabetologia. 48, 1198-1206 (2005).
  25. Dunn, E. J., Philippou, H., Ariëns, R. A. S., Grant, P. J. Molecular mechanisms involved in the resistance of fibrin to clot lysis by plasmin in subjects with type 2 diabetes mellitus. Diabetologia. 49, 1071-1080 (2006).
  26. Famodu, A., Reid, H. Plasma fibrinogen levels in sickle cell disease. Tropical and geographical medicine. 39, 36-38 (1987).
  27. Richardson, S., Matthews, K., Stuart, J., Geddes, A., Wilcox, R. Serial Changes in Coagulation and Viscosity during Sickle-Cell Crisis. British journal of haematology. 41, 95-103 (1979).
  28. Ataga, K. I., Orringer, E. P. Hypercoagulability in sickle cell disease: a curious paradox. The American Journal of Medicine. 115, 721-728 (2003).
  29. Collet, J. P., et al. Altered fibrin architecture is associated with hypofibrinolysis and premature coronary atherothrombosis. Arteriosclerosis, thrombosis, and vascular biology. 26, 2567-2573 (2006).
  30. Barazzoni, R., et al. Increased Fibrinogen Production in Type 2 Diabetic Patients without Detectable Vascular Complications: Correlation with Plasma Glucagon Concentrations. The Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism. 85, 3121-3125 (2000).
  31. Ceriello, A. Coagulation activation in diabetes mellitus: the role of hyperglycaemia and therapeutic prospects. Diabetologia. 36, 1119-1125 (1993).
  32. Mayne, E. E., Bridges, J. M., Weaver, J. A. Platelet adhesiveness, plasma fibrinogen and factor VIII levels in diabetes mellitus. Diabetologia. 6, 436-440 (1970).
  33. Weisel, J. W. Fibrinogen and fibrin. Advances in protein chemistry. 70, 247-299 (2005).
  34. Collet, J., et al. Influence of Fibrin Network Conformation and Fibrin Fiber Diameter on Fibrinolysis Speed Dynamic and Structural Approaches by Confocal Microscopy. Arteriosclerosis, thrombosis, and vascular biology. 20, 1354-1361 (2000).
  35. Jörneskog, G., et al. Altered properties of the fibrin gel structure in patients with IDDM. Diabetologia. 39, 1519-1523 (1996).
  36. Svensson, J., et al. Acetylation and glycation of fibrinogen in vitro occur at specific lysine residues in a concentration dependent manner: A mass spectrometric and isotope labeling study. Biochemical and Biophysical Research Communications. 421, 335-342 (2012).
  37. Pieters, M., et al. Glycation of fibrinogen in uncontrolled diabetic patients and the effects of glycaemic control on fibrinogen glycation. Thrombosis Research. 120, 439-446 (2007).
  38. Baradet, T. C., Haselgrove, J. C., Weisel, J. W. Three-dimensional reconstruction of fibrin clot networks from stereoscopic intermediate voltage electron microscope images and analysis of branching. Biophysical journal. 68, 1551-1560 (1995).
  39. Campbell, R. A., Overmyer, K. A., Selzman, C. H., Sheridan, B. C., Wolberg, A. S. Contributions of extravascular and intravascular cells to fibrin network formation, structure, and stability. Blood. 114, 4886-4896 (2009).
  40. Curtis, D. J., et al. A study of microstructural templating in fibrin-thrombin gel networks by spectral and viscoelastic analysis. Soft Matter. 9, 4883-4889 (2013).
  41. Kim, E., et al. Correlation between fibrin network structure and mechanical properties: an experimental and computational analysis. Soft Matter. 7, 4983-4992 (2011).
  42. Keegan, P. M., Surapaneni, S., Platt, M. O. Sickle cell disease activates peripheral blood mononuclear cells to induce cathepsins k and v activity in endothelial cells. Anemia. 2012, 201781(2012).
  43. Allison, A. Properties of sickle-cell haemoglobin. Biochemical Journal. 65, 212(1957).
  44. Kuehl, R. O. Design of experiments : statistical principles of research design and analysis. , 2nd ed, Cengage Learning. Pacific Grove, CA. (2000).
  45. Lindman, H. R. Analysis of variance in experimental designs. , Springer-Verlag Publishing. New York, N.Y., USA. (1992).
  46. Pan, W., Galkin, O., Filobelo, L., Nagel, R. L., Vekilov, P. G. Metastable Mesoscopic Clusters in Solutions of Sickle-Cell Hemoglobin. Biophysical Journal. 92, 267-277 (2007).
  47. Wootton, D. M., Popel, A. S., Alevriadou, B. R. An experimental and theoretical study on the dissolution of mural fibrin clots by tissue-type plasminogen activator. Biotechnology and bioengineering. 77, 405-419 (2002).
  48. Sazonova, I. Y., et al. 127 Mathematic model of fibrin clot lysis by plasmin. Fibrinolysis and Proteolysis. 12, Suppl 1. 45(1998).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

98

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены