АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

A protocol is described to extract primary human cells from surgical colon tumor and normal tissues. The isolated cells are then cultured on soft elastic substrates (polyacrylamide hydrogels) functionalized by an extracellular matrix protein, and embedded with fluorescent microbeads. Traction cytometry is performed to assess cellular contractile stresses.

Аннотация

Раковые клетки реагируют на механическую жесткость матрицы сложным образом с помощью скоординированный иерархическую механо-химическую систему, состоящую из рецепторов адгезии и связанные сигнальной трансдукции мембранных белков, архитектуру цитоскелета и молекулярные двигатели 1, 2. Механоре- различных раковых клеток в пробирке исследовали в первую очередь с иммортализованных клеточных линий или мышиных получены первичные клетки, а не с первичными раковых клеток человека. Следовательно, очень мало известно о механоре- первичных человеческих клеток рака толстой кишки в пробирке. Здесь оптимизирован протокол разработан, что описано выделение первичных человеческих клеток толстой кишки у здоровых и раковых хирургических образцов тканей человека. Изолированные толстой кишки клетки затем культивируют успешно на мягкие (2 кПа жесткость) и жесткой (10 кПа жесткость) полиакриламидные гидрогели и жесткого полистирола (~ 3.6 ГПа жесткость) субстратов функционализованных внеклеточного матрикса (фибронектинв этом случае). Флуоресцентные микросферы, внедренные в мягких гелей вблизи поверхности клеточной культуры, и тяги анализ выполняется для оценки клеточных напряжений сократительные помощью бесплатного программного обеспечения с открытым доступом. Кроме того, иммунофлюоресценции микроскопии на различных подложках жесткости обеспечивает полезную информацию о первичной клеточной морфологии, цитоскелета и винкулина содержащей фокальные адгезии как функцию жесткости подложки.

Введение

В последние годы она становится все более очевидным, что механическое микро-среды, в дополнение к био-химических факторов, играет важную роль в регуляции клеточных функций. Клетки могут воспринимать и реагировать на жесткости подложки, на которой они придерживались (как в 2D культуры) или в окружении (например, в 3D культуры) 3-7. Поступая таким образом, клетки могут модулировать их дифференциацию 3, 4, морфологию миграции / моторику 5, био-физических свойств 6, 7, рост и другие процессы.

Раковые клетки также реагируют на матрицы жесткости 2D и 3D, используя скоординированный, иерархическую механо-химическую комбинацию рецепторов адгезии и трансдукции сигнала, связанные мембранные белки, архитектуру цитоскелета и молекулярные моторы 1, 2. Например, эпителиальных клеток молочной железы (МИК) образуют нормальную паренхиму ацинарных при культивировании на 150 Па субстратов, что похожа на жесткостьздорового ткани молочной железы. Интересно, что они проявляют признаки развивающейся опухоли, как структурные, так и транскрипционные, при культивировании на жестких подложек (> 5000 Па), которые имитируют жесткость опухоли стромы 8. Кроме того, еще один эксперимент показывает, что рак молочной канцерогенез сопровождается коллагена сшивание и ЕСМ жесткости 9. Недавние эксперименты показывают, что карциномы толстой кишки человека (НСТ-8) клетки обладают метастазы, как фенотип (MLP), когда они культивируют на 2D подложек, имеющих физиологически соответствующую жесткость (20-47 кПа), но не на очень жесткой (3,6 ГПа) субстраты 10- 12 которые пребывают клетки первой форме опухолевидные кластеры клеток и затем отделить друг от друга, начиная от периферии. Как этого эпителия к округлой морфологического (Е к R перехода) происходит изменение, они размножаются, уменьшить клетка-клетка и клетка-ECM адгезию, и стать миграционная. НСТ-8 клетки культивировали на очень жестких полистирольных подложках не обладают этимизлокачественные черты. Таким образом, была выдвинута гипотеза, что НСТ-8 метастатической клетки становятся из-за их воздействия соответствующей микросреде. Стоит отметить, что эти эксперименты проводились с иммортализованных клеточных линий рака или мышиных получены первичные клетки, а не с первичными раковых клеток человека.

Недавнее исследование предполагает, что дополненной сотовой тяги стресс может быть использован в качестве потенциального биофизической подписи для метастатических клеток 13 .The исследование включает измерение силы тяги для различных линий раковых клеток человека на полиакриламидном геле. Установлено, что метастатические раковые клетки могут оказывать значительно большее тяговое усилие по сравнению с не-метастатических клеток во всех случаях 13. Тем не менее, эти результаты прямо противоречат ранее опубликованные выводы о мышиных получены линии клеток рака молочной железы 14. Кроме того, недавнее исследование подчеркивает замечательные различия между иммортализованных и первичных клеток человека в их цитоскелета реконструкции проTein профилирование и экспрессии белка выживания клеток 15. Следовательно, важно, чтобы повторно многие из биофизических анализов, включая тяги для первичных раковых клеток человека. Это будет решать вопрос первичные клетки воспроизводят ли увековечен клеточных линий рака тяги тенденцию.

Протокол, описанный здесь, оптимизирована для выделения первичных человеческих клеток толстой кишки (как здоровых, так и раковых), и для их культивирования на мягких подложках (полиакриламидных гидрогелей), а также на чашках Петри. Протокол основан на пищеварение и, как следствие ферментативной диссоциации хирургического образца ткани в одной клеточной суспензии 16. По нашим сведениям, это первая демонстрация культивирования изолированных первичной опухоли толстой кишки и нормальные клетки непосредственно на мягких гидрогелевых субстратов со встроенными люминесцентными микросфер для тяги цитометрии. Прозрачные гелевые подложки также позволяют иммуноокрашивания. Этот анализ показал, различия в F-актин организации ифокальные адгезии в первичных человеческих клеток толстой кишки, как изменения субстрат жесткости. Эта ячейка культуры платформа открывает возможность изучения различных биофизических свойств первичных человеческих клеток, таких как жесткость клеток и тяги в качестве параметров для прогнозирования рака.

протокол

Протокол, описанный ниже следующим рекомендациям UIUC человек исследовательские комитета по этике.

1. Сбор и пищеварение хирургической образец ткани

  1. Соберите образец опухолевой ткани сразу после двоеточия резекции (рис 1А и 1В). Соберите ткань от соседнего здорового сайт.
  2. Передача ткани сразу к 15 мл флакон, содержащий 12 мл раствора HBSS. Держите флакон на льду внутри изолированной коробкой пены.
  3. Транспортировать ткани, содержащий флакон с культурой капотом ткани для дальнейшей переработки в пределах 45 мин. Держите флакон на ледяной блок внутри капота.
  4. Налейте в комплект поставки ткани в 6-луночного планшета, содержащего 6-7 мл раствора HBSS с помощью пипетки.
    Примечание: количество ткани на лунку не является критическим в этом полоскания.
  5. Держите тарелку 6 а на ледяную глыбу. Промойте ткань в растворе HBSS в два раза.
  6. Вырезать ткани чисто в разделенных секций с стерильных SCISСор. Фарш ткани на меньшие части не более 1-2 мм 3 в размере стерильным скальпелем лезвия.
  7. Взвесить меченого 0,1% трипсин, содержащий флакон (1 мл 0,1% раствора трипсина) перед передачей ткани. Передача ~ 20 мг ткани в каждом из 0,1% трипсина флаконах с пипеткой.
  8. Постарайтесь свести к минимуму передачу ССРХ в трипсин флакон, чтобы избежать дальнейшего разведения трипсина.
  9. Взвесьте трипсина флаконов после передачи ткани; документировать разницу в качестве массы ткани.
  10. Налейте ~ 20 мг ткани и 1 мл трипсина в каждую лунку 24-луночного планшета.
  11. Поместите 24-луночного планшета на шейкере в холодильнике при 4 ° С в течение 16-20 ч. В течение этого периода ожидания или в более раннее время, подготовить гель субстраты полиакриламидные и функционализации их ECM белков, как описано в разделе 3.

2. Ферментативный диссоциации образец ткани в одну ячейку Подвеска и культивирования изолированных клеток на ECM функционализированных упругой SubstratES и жесткого полистирола Блюда

  1. После 16-20 часов инкубации в трипсина и при 4 ° С на шейкере, передачи ткани от 4 ° C трипсина до 4 ° C полного роста медиа-флаконе (содержащую 2-3 мл полной среды роста) с помощью пипетки. Убедитесь, минимальный передачу трипсина в питательных средах.
    Примечание: Комплект препарат ростовую среду заключается в следующем: RPMI 1640, базовая среда с добавлением лошадиной сыворотки до конечной концентрации 10% и пенициллин-стрептомицина до 1% от всего раствора.
  2. Поместите ткань, содержащую медиа флакон в теплой водяной бане при 37 ° С в течение 12-15 мин.
  3. Передача ткани в 15 мл флакон, содержащий раствор HBSS помощью пипетки, слегка встряхнуть.
  4. Повторите 2.3.
  5. Удалить ткани из раствора HBSS и передачи до 0,1% раствора коллагеназы (в HBSS) флакон, содержащий 1 мл раствора. Инкубировать в течение 45 мин при 37 ° С и 5% СО 2 окружающей среды в увлажненном инкубаторе для клеточных культур. Во время периода ожидания, теплый growtч носителе в 15 мл флакон при 37 ° С на водяной бане.
  6. Вытащите все фрагменты тканей в пипетку минимизирующей коллагеназы переносом. Извлечь только тканевые фрагменты в предварительно нагретой флаконах культура СМИ.
  7. Поместите хорошо фильтрующего 40 мкм в каждую лунку луночный планшет 6. Смочите фильтр с клеточной культуры 1 мл.
  8. Растирают ткани в средах с стеклянной пипетки 10 мл несколько раз до тех пор, ткань не полностью диссоциированы.
  9. Поддержание пипетки как можно ближе к основанию флакона.
  10. Депозит решение на фильтр для удаления мусора и недиссоциированной части.
  11. Центрифуга клеточной суспензии фильтруют в среде при 150 х г в течение 5 мин при комнатной температуре.
  12. Удалить супернатант и ресуспендируют затем осадок клеток с 2 мл свежей культуральной среды.
  13. Граф клеток с использованием гемоцитометра (если требуется). Семя изоляции первичных клеток на внеклеточного матрикса (ЕСМ) с функциональными гелями и полистирола блюд в нужной концентрации.

3. Подготовка и Функционализация различную жесткость полиакриламид (ПА) Гели и полистирола субстратов

Примечание: Для наглядной демонстрации разделе 3, зрители / читатели сослался на недавнее журнале визуализированных экспериментов (Юпитер) статьи 17.

  1. Принятие опубликованные протоколы 18, 19, 12 мм, включите 2 стеклянная крышка скользит химически обеспечить ковалентное связывание гидрогеля.
    1. Во-первых, удовольствие стеклянная крышка скользит с 3- Aminopropyltrymethoxysilane (ATS) в течение 7 мин при комнатной температуре.
    2. Извлеките АТС полностью деионизированной воды для полоскания и лечения крышка скользит с 0,5% глутарового альдегида (разведенного в PBS с 70% -ным глутаровым альдегидом маточного раствора) раствора в течение 30 мин.
  2. Получение 2 гелевые решения кПа путем смешивания 5% вес / объем раствора акриламида и 0,05% N, метиленбисакриламида (BIS) раствора N 'в 10 мМ HEPES-буферным раствором 20. Используйте 8% вес / объем акриламид и 0,13% N, метиленбисакриламида (бис) решение N 'в 10 мМ HEPES-буферным раствором для 10 кПа геля 20.
    1. В обоих случаях используется 1: 200 персульфат аммония (10% вес / объем) и 1: 2000, N, N, N ', N' тетраметилэтилендиамина (TEMED) в качестве инициатора и катализатора процесса полимеризации, соответственно.
    2. Кроме того, добавить 100 мкл флуоресцентных бисером 2 решения гель кПа в тайне маркеров 21, 22.
  3. Депозит каплю 20 мкл предварительно полимерный гель раствора ПА на 12 мм 2 активированного покровным стеклом. Поместите другой 12 мм 2 регулярного покровным стеклом на капли. Убедитесь, что падение распространяется между покровных стеклах в связи с капиллярности. Обратить бутерброд для 2 кПа гели для обеспечения, что большинство из бисера приблизится к поверхности клеточной культуры.
  4. Лечение гель Па в течение 45 мин при комнатной температуре.
  5. Снимите верхний покровное использованием одного края бритву.
    Примечание: Во время пилинга, отряд исходит из одного краясэндвича. Гель остается прилипший к активированному стекло.
  6. Хранить гели в растворе PBS перед использованием.
  7. Функционализации PA гели и стекло с молекул ECM, фибронектина человека в концентрации 50 мкг / мл по опубликованным методам 23.
    1. Вкратце, инкубировать субстратов с 2 мл чистого гидрата гидразина O / N.
    2. Удалить гидразингидрат и промыть тщательно субстраты с дистиллированной водой.
    3. Промыть субстратов с 5% уксусной кислоты в течение 30 мин.
    4. Удалить уксусную кислоту и промыть тщательно субстраты с дистиллированной водой.
    5. Хранить подложек, погруженных в деионизированной воде в течение 30 мин.
    6. Инкубируйте субстратов с окисленной фибронектина в течение 35 мин при концентрации 50 мкг / мл.
    7. Промыть субстратов с PBS на шейкере при низких оборотах в течение 10 мин.
    8. Перед покрытие клетки инкубируют все субстраты на 37 ° C в течение 2-3 мл культуральной среды в течение 30 мин.
      Примечание: Пластина клеток в скудно Заполнитьd способом (1000-3000 клеток / см 2). Каждый гель-стекла покрыта скольжения должна содержаться в 35 мм чашки Петри. Разрешить клетки придерживаться полностью, прежде чем любой микроскопии (по крайней мере O / N).

4. Тяговые силовой микроскопии и иммунофлуоресценции микроскопии Анализы

  1. Анализ тяги силовой микроскопии
    1. Теплый 0,25% трипсина-ЭДТА / 10% -ный раствор ДСН при 37 ° С в водяной бане в течение 10 минут, прежде чем начать эксперименты тяговые.
    2. Удалить один гель из клеточной культуры инкубатор на время и место на люминесцентном перевернутый столик микроскопа (32X увеличение).
    3. Найти одну ячейку в поле зрения. Снимите крышку блюдо Петри.
    4. Возьмите фазового контраста изображения клеток (например, рисунок 3).
    5. Переключитесь в режим визуализации флуоресценции и выберите соответствующий фильтр. Не перемещайте столик микроскопа или образец в течение этого времени.
    6. Возьмите образ displac флуоресцентные бисеромред сотовой тяги (рис 4C).
    7. Добавить 1 мл раствора трипсина / SDS в чашку Петри, чтобы отделить клетки от геля. Не перемещайте столик микроскопа или образец в течение этого времени. Кроме того, принять контрольный снимок клетки, чтобы обеспечить полное удаление из геля.
    8. Получать опорный (нулевой силы) изображение шариков после удаления клеток.
    9. Повторите шаги 4.1.2-4.1.8 для всех других гелей.
    10. Сделать стек изображения, используя ImageJ из двух изображений, полученных в шаге 4.1.6 и 4.1.8 для каждого случая. Для создания стека изображений, используйте следующую последовательность команд в ImageJ после открытия изображения: Image → стеки → Картинки укладывать.
    11. Чтобы получить поле перемещений и сцепление, использовать ImageJ плагины следующие опубликованных методов 21, 22 Получить коды и подробные учебники для этих плагинов с помощью следующей ссылке:. https://sites.google.com/site/qingzongtseng/imagejplugins.
      1. Совместите изображения в стеке, используя 'шаблон' Matching плагин. Использование в следующей последовательности команд в ImageJ после открытия стека изображений, сформированных на этапе 4.1.10: Плагины → Шаблон Matching → Выровнять Ломтики в Stack → ОК. Сохранить стек изображения, следовательно. Используйте этот новый стек изображения в следующих шагах.
      2. Получить поле смещения, используя PIV (изображение велосиметрия частиц) плагин (рис 4D). Использование в следующей последовательности команд после открытия стек изображения, сохраненный на шаге 4.1.11.1: Плагины → PIV → Итерационный PIV (Начальный) → ОК → Примите этот PIV и выход → ОК. Сохранить выход PIV в той же директории, в оригинальной стек изображений. Используйте это в качестве входных в следующем шаге.
      3. Наконец использовать (преобразовать тягу Фурье цитометрии) FTTC плагин для получения тяги карту (рис 4E). Использование следующая последовательность команд: Плагины → FTTC → InsERT свойства материала, т.е., модуль Юнга и коэффициент Пуассона ПА гель → OK → Выберите выходной файл PIV сохраненный на шаге 4.1.11.2 → ОК. Сохранить FTTC приводит в той же директории, как в стек изображений и выхода PIV.
  2. Иммунофлюоресценции микроскопии Анализы
    1. Возьмите субстраты для иммуноокрашиванию для ламинарного капотом и удалить культуральной среды.
    2. Промыть субстратов с PBS и зафиксировать клетки с 4% параформальдегида в PBS в течение 20 мин при комнатной температуре.
    3. Вымойте субстратов с PBS 3 раза (5 мин каждый раз). Следовательно, инкубировать субстратов с усилителем сигнала 500 мкл в течение 30 мин и промывают PBS.
    4. Инкубируйте клетки с моноклональными анти-антитела винкулина в разведении 1: 250 в PBS в течение 45 мин при комнатной температуре. Вымойте субстратов с PBS 3 раза (5 мин каждый раз).
    5. Инкубируйте образцы с вторичным антителом Alexa Fluor 488 козьего анти-мышиного IgG в разведении 1: 200в PBS при комнатной температуре в течение 30 мин. Вымойте субстратов с PBS 3 раза (5 мин каждый раз).
    6. Для визуализации F-актина структуру, инкубировать клетки с TRITC фаллоидином конъюгатов в концентрации 50 мкг / мл в течение 45 мин при комнатной температуре. Вымойте субстратов с PBS 3 раза (5 мин каждый раз).
    7. Изображение образцы, использующие сканирующего лазерного микроскопа конфокальной (рис 5А - 5D).

Результаты

Протокол, описанный выше, успешно применяется для нескольких образцов ткани (п = 12) из четырех разных пациентов соответствии с руководящими принципами институциональной наблюдательный совет. 1А иллюстрирует характерную колоректального опухоли сразу после операции, из которы...

Обсуждение

Сотовый тяги стресс в последнее время появились в качестве потенциального биофизической показателя метастатической стадии 13. Однако никаких экспериментальных данных, тяги с первичных опухолевых клеток не существует в литературе до сих пор. Кроме того, непосредственно культиви...

Раскрытие информации

The authors have nothing to disclose.

Благодарности

This project was funded by the National Science Foundation ECCS grant 10-02165, and the Interdisciplinary Innovation Initiative Program, University of Illinois grant 12035. M.Y. A. was funded at UIUC from NIH National Cancer Institute Alliance for Nanotechnology in Cancer ‘Midwest Cancer Nanotechnology Training Center’ Grant R25 CA154015A. Immnunostaining and confocal microscopy imaging were carried out at the Institute for Genomic Biology (IGB), UIUC. M.Y.A. acknowledges the discussions with B. J. Williams of UIUC regarding the isolation experiments. M.Y.A. acknowledges C. Nemeh and Abdul Bhuiya of UIUC for assistance in schematic and materials list preparation.

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
Reagents
HBSSLife technologies14175-095
PBSLonza17-516F
TrypsinWorthingtonLS003736
CollageneseWorthingtonLS004176
3- Aminopropyltrymethoxysilane (ATS) Sigma-Aldrich281778
GlutaraldehydePolysciences, Inc.01201-5
AcrylamideSigma-AldrichA4058
N- methylenebisacrylamide (bis)Sigma-AldrichM1533
HEPES buffer solutionSigma-Aldrich83264
Ammonium persulfateBio-Rad161-0700
Nˊ-tetramethylethylenediamine (TEMED)Bio-Rad161-0801
Human fibronectinBD biosciences354008
Hydrazine hydrateSigma-Aldrich18412Hazardous
Acetic acidSigma-AldrichA6283
Paraformaldehyde Electron Microscopy SciencesRT15710
Signal enhancerLife technologiesI36933
Monoclonal anti vinculin antibody Sigma-AldrichV9131
Alexa fluor 488 goat anti-mouse IgGLife technologiesA11001
TRITC phalloidin conjugates Sigma-AldrichP1951
0.1 µm fluroscent beadsLife technologiesF8801
0.25% Trypsin-EDTALife technologies25200-056
Materials
12 mm2 glass cover slipsCorning2865-12

Ссылки

  1. Ingber, D. E. Can cancer be reversed by engineering the tumor microenvironment. Semin. Cancer Biol. 18, 356-364 (2008).
  2. Kumar, S., Weaver, V. M. Mechanics, malignancy, metastasis: the force journey of a tumor cell. Cancer Metastasis Rev. 28, 113-127 (2009).
  3. Engler, A. J., Sen, S., Sweeney, H. L., Discher, D. E. Matrix elasticity directs stem cell lineage specification. Cell. 126, 677-689 (2006).
  4. Yeung, T., et al. Effects of substrate stiffness on cell morphology, cytoskeletal structure, and adhesion. Cell Motil. Cytoskeleton. 60, 24-34 (2005).
  5. Pelham, R. J., Wang, Y. L. Cell locomotion and focal adhesions are regulated by substrate flexibility. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 94 (25), 3661-3665 (1997).
  6. Solon, J., Levental, I., Sengupta, K., Georges, P. C., Janmey, P. A. Fibroblast adaptation and stiffness matching to soft elastic substrates. Biophys. J. 93, 4453-4461 (2007).
  7. Wang, H. B., Dembo, M., Wang, Y. L. Substrate flexibility regulates growth and apoptosis of normal but not transformed cells. Am. J. Physiol. Cell. Physiol. 279, 1345-1350 (2000).
  8. Paszek, M. J., et al. Tensional homeostasis and the malignant phenotype. Cancer Cell. 8, 241-254 (2005).
  9. Levental, K. R., et al. Matrix crosslinking forces tumor progression by enhancing integrin signaling. Cell. 139, 891-906 (2009).
  10. Tang, X., et al. Mechanical force affects expression of an in vitro metastasis-like phenotype in HCT-8 cells. Biophys. J. 99, 2460-2469 (2010).
  11. Ali, M. Y., Saif, M. T. A. Substrate Stiffness Mediated Metastasis Like Phenotype of Colon Cancer Cells is Independent of Cell to Gel Adhesion. Cell. Mol. Bioeng. , (2014).
  12. Ali, M. Y., Chuang, C. Y., Saif, M. T. A. Reprogramming cellular phenotype by soft collagen gels. Soft Matter. , (2014).
  13. Kraning-Rush, C. M., Califano, J. P., Reinhart-King, C. A. Cellular traction stresses increase with increasing metastatic potential. PLoS ONE. 7 (2), e32572 (2012).
  14. Indra, I., Undyala, V., Kandow, C., Thirumurthi, U., Dembo, M., Beningo, K. A. An in vitro correlation of mechanical forces and metastatic capacity. Phys. Biol. 8 (1), (2011).
  15. Alge, C. S., Hauck, S. M., Priglinger, S. G., Kampik, A., Ueffing, M. Differential protein profiling of primary versus immortalized human RPE cells identifies expression patterns associated with cytoskeletal remodeling and cell survival. J. Proteome Res. 5 (4), 862-878 (2006).
  16. Oikonomou, E., Kothonidis, K., Zografos, G., Nasioulas, G., Andera, L., Pintzas, A. Newly established tumourigenic primary human colon cancer cell lines are sensitive to TRAIL-induced apoptosis in vitro and in vivo. Br. J. Cancer. 97 (1), 73-84 (2007).
  17. Knoll, S. G., Ali, M. Y., Saif, M. T. A. A novel method for localizing reporter fluorescent beads near the cell culture surface for traction force microscopy. J. Vis. Exp. (91), (2014).
  18. Wang, Y. L., Pelham, R. Preparation of a flexible, porous polyacrylamide substrate for mechanical studies of cultured cells. Methods in Enzymology. 298, 489-496 (1998).
  19. Tang, X., Ali, M. Y., Saif, M. T. A. A novel technique for micro-patterning proteins and cells on polyacrylamide gels. Soft Matter. 8, 3197-3206 (2012).
  20. Tse, J. R., Engler, A. J. Preparation of hydrogel substrates with tunable mechanical properties. Current Protocols in Cell Biology. , 10-16 (2010).
  21. Tseng, Q., et al. Spatial organization of the extracellular matrix regulates cell–cell junction positioning. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 109 (5), 1506-1511 (2012).
  22. Chopra, A., et al. Augmentation of integrin-mediated mechanotransduction by hyaluronic acid. Biomaterials. 35 (1), 71-82 (2014).
  23. Damljanovic, V., Lagerholm, B. C., Jacobson, K. Bulk and micropatterned conjugation of extracellular matrix proteins to characterized polyacrylamide substrates for cell mechanotransduction assays. Biotechniques. 39 (6), 847-851 (2005).
  24. Tilghman, R. W., et al. Matrix rigidity regulates cancer cell growth and cellular phenotype. PLoS ONE. 5 (9), e12905 (2010).
  25. Ulrich, T. A., de Juan Pardo, E. M., Kumar, S. The mechanical rigidity of the extracellular matrix regulates the structure, motility, and proliferation of glioma cells. Cancer Res. 69, 4167-4174 (2009).
  26. Williams, B. J., Anand, S. V., Rajagopalan, J., Saif, M. T. A. A self-propelled biohybrid swimmer at low Reynolds number. Nat. Commun. 5, (2014).

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

100Mechanobiology

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены