Запись Intracavernosal давления для оценки эректильной функции у грызунов

Резюме

Запись Intracavernosal давления (ИКП) является важным методом для оценки эректильной функции экспериментальных животных. Здесь подробный протокол свидетельствует для записи процедуры ПМС катетеризация пенис голеней и затем электрически стимулирования кавернозных нервов в крыс.

Аннотация

Эректильная дисфункция (Эд) определяется как неспособность достичь или поддерживать эрекцию полового члена, и это стало распространенным мужского сексуального расстройства. Грызуны работают многие исследования исследования физиологии/патологии эректильной функции. Эректильной функции в грызунов можно оценить путем измерения intracavernosal давления (ИКП). На практике может контролироваться ICP, после электрической стимуляции кавернозных нервов (ЦНС). Артериальное давление сонной артерии (среднее артериальное давление) используется в качестве ссылки для МСП. С помощью ICP записи протоколов, многих ключевых параметров эректильной функции может быть измерено от кривой отклика МСП. Измерение МСП предоставляет больше информации, чем тест апоморфин индуцированной полового члена эрекция и дешевле, чем телеметрический мониторинг корпус spongiosum пенис, что делает этот метод один из самых популярных для оценки эректильной функции. Однако по сравнению с легко выполняются АПО индуцированной эректильной функции тестирования, успешных МСП записи требуют внимания к деталям, практике и придерживаться метода операции. В этой работе введение в ICP запись в крыс предоставляется для дополнения процедура эффективно.

Введение

Эд определяется как неспособность достичь или поддерживать полового члена эрекция и стала общей мужского сексуального расстройства¹. Подопытных животных используются и предоставляют воспроизводимые модели для изучения эректильной функции². Для долгое время были использованы несколько крупных животных моделей для изучения эректильной функции^3,4,5. Хотя грызунов являются относительно небольшими по сравнению с другими животными, они также используются для изучения мужской эректильной дисфункции благодаря выставке несколько преимуществ⁶. Во-первых Морфологические и функциональные характеристики сексуальных людей изъятый у грызунов. Во-вторых по сравнению с более крупных животных, используемых в исследованиях Эд, грызуны являются более экономически целесообразным приобрести, дом и поддерживать. В-третьих, генетически модифицированных грызунов модели обеспечивают преимущества в воспроизводимость и последующего поведения, а также нейрофизиологических исследований. Таким образом грызуны быстро стали основным животных, используемых в исследовании мужской эректильной дисфункции.

Выгоды от чисто генетический фон и условий последовательного культуры, грызун модели предоставили последовательно воспроизводимость данных^5,6,,78. Среди многочисленных имеющихся исследований, связанных с многими аспектами эректильной функции, апоморфин (АПО)-индуцированного эректильной ответ и испытания электро стимуляции индуцированного ответ МСП являются наиболее широко используемых методов, которые достоверно отражать эректильной Функция^,910,,1112. АПО индуцированной эректильной функции испытания, разработанной Heaton и др. ¹³, является био assay который использует явление, что администрация апоморфин крыс вызывает эрекции и зевает. Как легко, неинвазивная и стабильной био assay для оценки эректильной функции тест АПО индуцированной эректильной функции широко используется во многих исследованиях. Однако этот assay должным образом не отражают качество эрекции или динамических изменений в поток крови, связанные с эректильной ответ¹⁴. ICP измерения были первоначально разработанный Куинлан и др. ¹⁵. в этом методе, катетер помещается в сонной артерии для измерения системного артериального давления, и другой катетер вводится в Крю пещеристых для записи ICP. До или во время ПМС, запись, вазоактивное агента и/или электрического поля стимуляции основных таза ганглии (MPG) или CN часто были переданы крыс¹⁴. Этот assay был надежным инструментом для оценки методов лечения и лекарственных средств для Эд и скорее всего будет использоваться в качестве метода жизненно важное значение оценки в будущем⁶.

По сравнению с легко выполняются АПО индуцированной эректильной функции тестирования, успешных МСП записи требуют внимания к деталям, практике и придерживаться метода операции. Таким образом здесь, мы предоставляем подробное описание о том, как выполнить запись МСП.

протокол

Трех месячного и 18-месячных крысах Sprague-Dawley использовались в настоящем исследовании. Все животные были обработаны в соответствии с руководящими принципами низ для ухода и использования лабораторных животных. Процедуры с участием животных темы были утверждены местных институциональных животное уход и Комитет по этике с целью свести к минимуму страдания животных. Протоколы были одобрены институциональный уход животных и использование Комитет (IACUC) в университете Tech Наньцзин (Нанкин, Китай).

Крысы были разделены на две группы в зависимости от их возраста и предварительные показатели в Апо индуцированной эректильной функции тестирования перед МСП запись: молодые нормальной (Группа YN) и возрасте эректильной дисфункции группа (Группа AE)¹⁰.

1. Подготовка перед операцией

1. Вручную сделайте пару биполярных электродов для МСП записи (Рисунок 1). Слегка согнуть концы электродов и подрегулируйте расстояние между двумя электродами для 1-2 мм, как показано на рисунке 1A.
2. Подключите электроды к стимулятор, используя два зажимы крокодил (рис. 1AB).
3. Собрать катетер системы: Во-первых подключение подкожных инъекций иглой 23G к 3-ходовой кран с трубы, затем краном для датчика давления. Далее присоедините шприц 10 мл к концу третьего запорный предоставлять физиологического раствора гепарина.
4. Тщательно проверьте утечки после заполнения всей системы с физиологического раствора гепарина (200 ед/мл). Затем поверните кран 3-способ закрыть шприц канал или канал датчика давления (рис. 1 c).
5. Поднимите уровень деревянной колодки иглы 20 см. Затем калибровки давления, записи системы до 20 см H₂O. После этого переместите высота иглы для проверки точности системы записи. Повторите калибровку до тех пор, пока точность была подтверждена.
6. Передача крыс из животных фонда перевезут в операционную и позволить им стать accustomed к номер операции для по крайней мере 30 минут.
7. Газобетона инструментов распыляется с 70% этанол незадолго до операции

2. процедура

1. Анестезировать Крыса с внутрибрюшинного введения Пентобарбитал натрия в дозе 45 мг/кг веса тела и ждать 5-10 мин щепотку пальцев для подтверждения надлежащего анестезии.
2. Бритье мех шеи и живота с электробритва и место крысы на его обратно на грелку.
3. Протрите области хирургии с 10% повидон йод раствор пропитанной ватные шарики, следуют 70% этанол пропитанной ватные шарики. Кроме того применяются глазная мазь для предотвращения глаза от высыхания.
4. Catheterize левой сонной артерии.
   1. Возьмите кожи шеи с щипцами и сделать горизонтальный надрез в середине шеи. Надрезать мышцы, тщательно разоблачить левой сонной артерии и изолировать 5-мм части судна.
   2. Тщательно отделяют сонной артерии от блуждающего нерва, используя пинцет, рисовать Шелкового шва под сонной артерии и положить потерять галстук на хвостовой части судна, а затем сделать еще один тугой узел в черепной части судна.
   3. Каудально зажим судна с струбциной бульдог над швом, чтобы остановить поток крови.
   4. Тщательно надрезают на судне с микрохирургической ножницами и вставьте артериального катетера сторону сердца с помощью микро Рассекающий крюк и пинцет.
   5. Закрепите свободной каудальной лигатура вокруг катетера для обеспечения его. Выньте зажим бульдог для восстановления кровотока.
5. Изолировать CN и место электрода
   1. Поднимите кожи и мышц живота с парой щипцов. Рассечения ножницами вырежьте через нижнюю часть живота на пенис, чтобы сделать разрез средней линии.
   2. Аккуратно вставьте кишечника с тампоном в верхней части брюшной полости.
   3. Возьмите мочевого пузыря с парой щипцов и вытащить мочевого пузыря от брюшной полости. Разоблачить вентральной лопастями предстательной железы, который расположен на брюшной части уретры.
   4. Вытащите вентральной долей семяпроводов подвергать спинной доле предстательной железы простаты и семенных пузырьков. Найти точку прилипания семяпроводов и простаты.
   5. Разделите пространство между простаты и семяпроводов. Тщательно разоблачить фиброзной капсулой, который расположен кзади стыке простаты и семявыносящих. Затем найдите основных таза ганглии (рис. 2).
      Примечание: Основные таза ганглия и кавернозных нервов можно увидеть на поверхности простаты.
   6. Тщательно высушите CN области с помощью стерильного тампона. Тщательно изолировать и закрепить право кавернозных нервов с биполярных электродов.
6. Catheterize левой голеней
   1. Вырежьте небольшой надрез на коже полового члена с рассечения ножницами, а затем тщательно оголять кожи полового члена вала.
   2. Вскрыть полосатая мускулатура полового члена. Найти верхней ветке лобка кости.
   3. Предоставить bulbospongiosus мышцы, которая охватывает лампы spongious.
   4. Разделите bulbospongiosus мышцы от ischiocavernosus мышц с помощью Изогнутый пинцет.
   5. Тщательно изолировать мышцы ischiocavernosus с изогнутой щипцами, а затем вырезать ischiocavernosus мышцы, чтобы разоблачить белый белочной пещеристых голени.
   6. После анатомическое направление пещеристых голени осторожно вставьте иглу в Крю пещеристых через белый белочной.
      Примечание: Это решающий шаг для успешного катетеризации. Небольшое количество гепаринизированным физиологического раствора может быть введен, и небольшой penile опухоль должна соблюдаться, если иглы был вставлен правильно.
   7. Тщательно освободить иглы и избежать любого скольжения иглы или нарушение соединительную трубу. Осмотрите на предмет утечки.

3. стимулировать CN

1. Откройте программу программное обеспечение для записи сигнала давления и начать запись сигнала давления.
2. Установите параметры стимуляции: 15 Герц, ширина импульса 5 миллисекунд, 5 вольт и длительностью 60 s. Стимулировать CN с частотой 15 Гц с шириной импульса 5 мс.
   Примечание: Резкий рост МСП может наблюдаться при применении электрической стимуляции.
3. Позвольте 30-минутный перерыв между стимуляцию. Максимум последовательных стимуляции в каждое животное в три раза.

4. в конце процедуры

1. После записи, администрировать эвтаназии путем инъекций передозировки Пентобарбитал натрия в дозе 150 мг/кг веса тела. Подтвердите смерть крыс, проверяя их артериальное давление. Удалите крыс и очистите инструменты хирургии.

5. анализ данных

1. Сохранение и экспорт данных из программного обеспечения. Ответ обычно выражается как отношение ICP для системных среднее артериальное давление (карта). Отношение пик ICP/карта была рассчитана для оценки эректильной функции.
2. Объединить данные из по меньшей мере пять крыс и анализировать с статистического программного обеспечения. Различия считаются статистически значимым, когда p < 0,05, с помощью t критерия Стьюдента.

Результаты

Многочисленные исследования показали что эректильная дисфункция в возрасте мужчины становится общей проблемой. Однако лечение ограничено в управлении связанных со старением Эд¹⁶. В грызунов модели Эд, связанных со старением многие терапии тестируются н?...

Обсуждение

Прямым показателем эректильной функции МСП является надежным методом¹⁴. Это позволяет для приобретения данных на базальную ПМС, пик ПМС, плато ICP, время от времени постройки и детумесценцию, продолжительность ответ и т.д. Кроме того, эти прямые измеряемых параметров, ес?...

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
Animal
Rats			Strain: Sprague-Dawley Age: 2-3 month
Rats			Strain: Sprague-Dawley Age: 15-18 month
Name	Company	Catalog Number	Comments
Reagents
Saline	Sigma-Aldrich, S7653		dissolve 8.5 gram sodium chloride in distilled water
Pentobarbital sodium solution	Sigma-Aldrich, P3761		dissolve 1 gram in 100 ml saline
Povidone-iodine	BTP Pharmaceutical Co. Limited		10% (V/V)
Ethanol	China National Pharmaceutical Group Corporation (SINOPHARM)		70% (V/V)
Heparin	Sigma-Aldrich, H3149		dissolve 20000U heparin in 100 ml saline
Name	Company	Catalog Number	Comments
Materials
Hypodermic needle	Shandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd.	23G
Syringe	Shandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd	10 ml
Three-way stopcock	Chengdu Instrument factory	TSK 01
Electrode	Chengdu Instrument factory	JST-1
Catheter tube	Chengdu Instrument factory	PE-10, PE-50
Operating scissors	Shanghai operation equipment factory	J22010, J22020
Ophthalmic operating scissors	Shanghai operation equipment factory	Y00010, Y00020
Ophthalmic forceps	Shanghai operation equipment factory	JD1010, JD1020
MicroScissors	World Precision Instruments	WAA260
silk suture	Shandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd.	5-0
Name	Company	Catalog Number	Comments
Equipment
Stimulator	Nanjing medease science and technology co. ltd (model 4C501H)		15 Hz, 5 ms pulse, 5 V, 60 s duration and 5 minutes interval
Multichannel signal collection processing system	Nanjing medease science and technology co. ltd (model 4C501H)		Blood pressure model
Pressure transducer	Beijing Xin Hang Xing Ye Technology Trading Company Limited (model YP100)		40KPa