Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.
Method Article
Здесь мы описываем подробный протокол для изоляции лимфоцитов из индуктивных сайтов, включая патчи Пейера кишечнике связанных лимфоидной ткани и крылом брыжеечных лимфатических узлов и эффекторных сайтов, включая lamina propria и кишечного эпителия кишечной иммунной системы малых.
Кишечные иммунная система играет важную роль в поддержании барьерной функции желудочно-кишечного тракта, создавая терпимая(ый) ответы на пищевые антигены и синантропных бактерий во время монтажа эффективного иммунного ответа на энтеропатогенные микробы. Кроме того стало ясно, что местные кишечного иммунитета имеет глубокое влияние на отдаленные и системного иммунитета. Таким образом важно изучить как индуцируется кишечных иммунный ответ и что итоги иммунологического ответа. Здесь описывается подробный протокол для изоляции лимфоцитов из тонкой кишки индуктивный как патчи Пейера кишечнике связанных лимфоидной ткани и крылом брыжеечных лимфатических узлов и эффекторных сайты как lamina propria и кишечного эпителия. Эта техника обеспечивает изоляцию большое количество лимфоцитов из небольших кишечных тканей с оптимальной чистоты и жизнеспособности и минимальным полигамное загрязнения в течение приемлемого времени. Технические возможности изолировать лимфоциты и другие клетки иммунной системы от кишечных тканей позволяет понимание иммунной реакции на инфекции ЖКТ, рак и воспалительные заболевания.
Желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) имеет много складок и выступов, которые представляет крупнейший интерфейс, отделяя внутреннего тела и внешней среды. Кишечные иммунная система играет важную роль в поддержании барьерной функции желудочно-Кишечного тракта. Оно постоянно подвергается воздействию пищевых антигенов, синантропных бактерий и болезнетворных микробов. Таким образом оно должно оставаться терпимая(ый) антигенов продовольственной и синантропных бактерий при сохранении способности быстро генерировать эффективного иммунного ответа на энтеропатогенные микробы1. Кишечной иммунной системы может анатомически разделить индуктивных сайтов, где лим....
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Все эксперименты на животных были проведены в соответствии с рекомендациями Национального института здравоохранения и утверждены Стоуни-Брук университета уход для институциональных животных и использования Комитетом.
Примечание: Убедитесь, что все утверждений перед выполнением процедуры.
1. решение подготовка
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Схематическое представление протокола изображен (рис. 1). Лимфоциты в пределах слизистой кишечника индуктивный и эффекторных сайты отчетливо организуются. Пейера в патчи (PP) и брыжеечных лимфатические узлы (млн.) содержат лимфоциты в хорошо организован.......
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Подробный протокол представляется для изоляции лимфоцитов из кишечной слизистой индукционные (млн и PP) и эффектор (LP и IEL отсека) сайтов. Протокол был разработан чтобы сбалансировать ввод (время) и выходного (жизнеспособности и урожайность) для обеспечения максимальной производительно?.......
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Авторы не имеют ничего сообщать.
Б.С.Ш поддерживается гранта NIH (R01 AI076457) и средства, предоставленные Университет Стоуни-Брук. Z.Q. поддерживается NIH Грант (K12 GM102778).
....Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
HEPES | Fisher Scientific | BP310-500 | |
L-glutamine | Sigma-aldrich | G3126-100G | |
Penicillin-Streptomycin | Life Technologies | 15140-122 | |
Gentamicin | Life Technologies | 15710-072 | |
Sodium Hydroxide | Fisher Scientific | S318-500 | |
RPMI 1640 | Life Technologies | 21870-076 | |
Sodium bicarbonate | Fisher Scientific | S233-500 | |
Fetal bovine serum | Life Technologies | 26140-079 | |
10x Hanks' balanced salt solution | Sigma-aldrich | H4641-500ML | |
1,4-Dithioerythritol | Sigma-aldrich | D9680-5G | |
0.5M EDTA, pH 8.0 | Life Technologies | 15575-020 | |
Calsium chloride hexahydrate | Sigma-aldrich | 21108-500G | |
Magnesium chloride hexahydrate | Sigma-aldrich | M2670-100G | |
Collagenase, Type I | Life Technologies | 17100-017 | |
DG gradient stock solution (Percoll) | GE Healthcare | 17-0891-01 | |
Red Blood Cell Lysis Buffer | Biolegend | 420301 | |
70-µm cell strainer | Corning | 352350 | |
14 mL Polypropylene Round-Bottom Tube | Corning | 352059 | |
Erlenmeyer flask | Kimble | 26500R-50mL | |
Magnetic stirrer | Thermo Fisher | 50094596 | |
Stir bar | Fisher Scientific | 14-512-148 |
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи
Запросить разрешениеThis article has been published
Video Coming Soon
Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены