JoVE Logo
АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

В этом исследовании изучается связь между экспрессией гена MLH1 в периферической крови и раке толстой кишки с использованием подхода случай-контроль для сравнения уровней экспрессии у пациентов и здоровых людей из контрольной группы.

Аннотация

Гомолог MutL 1 (MLH1) является компонентом гетеродимерного комплекса MutLα, который обнаруживает и исправляет несоответствия оснований и основания, а также петли вставки/делеции, вызванные неправильным включением нуклеотидов. При отсутствии белка MLH1 частота неустраненных несоответствий увеличивается, что приводит к раку органов. В текущем исследовании была предпринята попытка количественно оценить экспрессию гена MLH1 и ее связь с инвазией опухоли (T) и инвазией лимфатических узлов (N) в образцах крови пациентов с колоректальным раком (CRC). Образцы крови были получены у 36 пациентов с КРР. Была выделена РНК, а кДНК синтезирована с помощью набора. Праймеры были построены с использованием подхода экзон-экзонного перехода, а гены MLH1 и β-актина были протестированы 3 раза с использованием полимеразной цепной реакции в реальном времени (ПЦР в реальном времени). Для анализа данных использовалось программное обеспечение для анализа экспрессии генов, а для изучения экспрессии MLH1 и его связи с T и N переменными был использован t-критерий. В исследование было включено 36 пациентов с колоректальным раком, в том числе 15 (41,6%) женщин и 21 (58,4%) мужчина, со средним возрастом 57,35 ± 4,22 года и в возрастном диапазоне 26-87 лет. Результаты показали, что коэффициент экспрессии гена MLH1 у пациентов снижался по сравнению с здоровыми лицами, а снижение экспрессии генов на разных стадиях заболевания было значимым. Результаты данного исследования показали, что снижение экспрессии гена MLH1 играет эффективную роль в развитии КРР.

Введение

Рак толстой кишки (КРР) является одним из наиболее распространенных видов рака. Это четвертая по значимости причина смертности от ракаво всем мире 1. КРР чаще встречается у мужчин, чем у женщин, и в три-четыре раза чаще встречается в промышленно развитых странах, чем в развивающихся. Стандартизированный по возрасту (глобальный) показатель заболеваемости на 1 x 105 случаев КРР составляет 19,7 для обоих полов, 23,6 для мужчин и 16,3 для женщин2. Эпидемиологические исследования показали сильную связь окружающей среды и образа жизни с КРР. Ожирение, красное / обработанное мясо, табак, алкоголь, андрогенная депривационная терапия и холецистэктомия связаны с умеренно повышенным риском КРР 2,3.

Хромосомная нестабильность, микросателлитная нестабильность и фенотип метилатора острова CpG (CIMP) играют важную роль в онкогенезе CRC4. Согласно предыдущим исследованиям, у пациентов с КРР было выявлено около 250 различных мутаций, что эквивалентно примерно 55% известных мутаций, связанных с генами репарации несоответствия ДНК (MMR). Дефекты белков репарации несоответствия могут быть вызваны мутациями зародышевой линии в генах MSH6, MLH1, PMS2 и MSH2, и большинство этих мутаций обнаружено в генах MLH1 и MSH2 4,5. Самым важным белком в системе MMR, который обычно участвует в CRC, является MLH1. Недавние исследования показали, что любое изменение экспрессии MLH1 может увеличить риск развития КРР. Мутации зародышевой линии в MLH1 ответственны за синдром Линча, наследственный тип КРР. Кроме того, 13-15% случаев диффузного рака толстой кишки вызваны дефицитом MLH1 на основе гиперметилирования соматического промотора 6,7,8.

Ген MLH1 расположен на коротком плече хромосомы 3 в положении 22.2 и содержит 21 экзон9. Белок, кодируемый геном MLH1, может сотрудничать с эндонуклеазой, участвующей в репарации несоответствия, PMS2, для генерации MutLα, который является частью системы MMR. MutLα в основном участвует в исправлении несоответствий между основаниями и петлями делеции и добавления в результате неполной репликации ДНК. Кроме того, кодируемый белок участвует в передаче сигналов о повреждении ДНК и может быть преобразован в форму ɣMutL с белком MLH3, который участвует в репарации несоответствия ДНК, наблюдаемой при мейозе 10,11,12. Исследования показали, что MLH1 участвует в других основных клеточных активностях, включая регуляцию контрольных точек клеточного цикла, апоптоз, кроссинговерную рекомбинацию и митотическую несовместимость.

Ген MLH1 играет ключевую роль в системе репарации несоответствия ДНК (MMR). Дефект функции этого гена может привести к накоплению генетических мутаций и, как следствие, развитию колоректальногорака14. Предыдущие исследования показали, что около 55% мутаций, связанных с генами MMR у пациентов с КРР, связаны с мутациями гена MLH1. Кроме того, снижение экспрессии гена MLH1 может привести к синдрому Линча, который является наследственной формой колоректального рака15,16. Кроме того, дефект гена MLH1, основанный на гиперметилировании соматического промотора, наблюдался в 13-15% случаев спорадического колоректального рака17. Эти научные данные показывают, что ген MLH1 действует как важный биомаркер колоректального рака, и анализ его экспрессии может предоставить ценную информацию о функции пути MMR и генетическом риске CRC18. Измерение уровня экспрессии MLH1 в периферической крови пациентов с раком толстой кишки может предоставить ценную информацию о функциональности пути MMR, который часто нарушается при раке толстой кишки. Этот метод может быть использован в прогностических целях и для понимания генетической предрасположенности к раку толстой кишки19,20. Исследование взаимосвязи между мутацией MLH1 415 locus G to C и спорадическим колоректальным раком у китайских пациентов показало, что частота генотипа MLH1 C/C была значительно выше у пациентов со спорадическим КРР, чем в контрольной группе, что свидетельствует о генетической восприимчивости к спорадическому КРР у китайских пациентов21. В другом исследовании сравнивалась экспрессия генов генетических биомаркеров КРР в периферической крови и биопсийных образцах пациентов с воспалительными заболеваниями кишечника (ВЗК), подчеркивая потенциал анализа экспрессии генов периферической крови для пониманиябиомаркеров, связанных с раком толстой кишки.

Учитывая важную роль гена MLH1 и проведенные в последние десятилетия исследования с молекулярным анализом путем профилирования экспрессии мРНК, рак был классифицирован с более высокой точностью. Целью данного исследования явилось количественное изучение экспрессии MLH1 в образцах периферической крови пациентов с КРР с помощью ПЦР в реальном времени, а также изучение ее взаимосвязи с патологическими факторами, стадиями прогрессирования опухоли в слои кишечной стенки (Т) и стадиями инвазии в лимфатические узлы (N). Это исследование было проведено на 36 пациентах с КРР с целью потенциального установления количественных изменений в экспрессии генов в качестве биомаркеров для скрининга КРР, прогноза и диагностики с использованием образцов периферической крови.

протокол

В период с апреля 2021 года по май 2023 года в аффилированной больнице No2 Университета Наньтун было проведено исследование типа «случай-контроль». Взаимодействуйте с административным отделом больницы для создания основы исследования. Этическое одобрение было получено путем подачи предложения об исследовании в Комитет по этике Наньтунского университета. Этические принципы были соблюдены для обеспечения конфиденциальности и информированного согласия.

1. Набор пациентов и дизайн исследования

  1. Выборка для включения участников в исследование
    1. Исследовать экспрессию гена MLH1 в периферической крови 36 человек с раком толстой кишки и контрольной группы. Разработайте четкие критерии включения и исключения для отбора участников.
    2. Наберите людей с диагнозом «определенные типы рака толстой кишки» (ректосигмоидный, слепой кишкой, восходящий, поперечный и нисходящий рак толстой кишки, у которых были обнаружены колоректальные опухоли) и получивших информированное согласие.
    3. Исключите людей с другими диагнозами рака или состояниями, которые могут затруднить анализ экспрессии генов. Кроме того, исключите участников с историей переливания крови в течение последних 3 месяцев, историей химиотерапии или лучевой терапии в течение последних 6 месяцев, историей употребления алкоголя или наркотиков, а также историей аутоиммунных заболеваний или воспалительных заболеваний кишечника.
  2. Классифицируйте клинические факторы риска в соответствии с системой стадирования TNM (опухоль, узлы и метастазы), учитывая массу рака, размер опухоли и инвазию в соседние органы23,24.
    1. Разделите различные стадии рака (0-4) на основе имеющихся данных файла патологии.
    2. Сегментируйте скорость роста и прогрессирования опухоли в слоях стенки кишечника (Т-индекс) на четыре отдельные группы (T1-4, T0-TX) и инвазию лимфатических узлов (N-индекс) на четыре группы (N1-3, N0-NX).
  3. Подготовьте контрольную группу со здоровыми особями.
    1. Сопоставьте контрольную группу с группой пациента по возрасту и полу. Соберите подробные демографические данные по каждому участнику, чтобы обеспечить сопоставимость.
  4. Процесс информированного согласия
    1. Подготовьте документы об информированном согласии, объясняющие цель, процедуры и потенциальные риски исследования.
    2. Взаимодействуйте с участниками, предоставляя им достаточно времени, чтобы задать вопросы. Соберите подписанные формы информированного согласия, прежде чем приступать к сбору образцов.

2. Экстракция и очистка РНК

  1. Забор образцов периферической крови
    1. Приобретите коммерчески доступные пробирки с покрытием EDTA, сертифицированные для клинического или лабораторного использования. Проверьте срок годности трубок. Проверьте целостность упаковки тубы.
    2. Попросите участника сидеть удобно. С помощью стерильного шприца наберите 5 мл крови из предлоктевой вены. Убедитесь, что участник расслаблен, а рука вытянута, чтобы обнажить вену. Сразу же переложите образцы крови в подготовленные пробирки, обеспечив минимальное воздействие воздуха.
    3. Поддерживайте температуру образцов при температуре 4 °C во время транспортировки в лабораторию, чтобы сохранить целостность РНК.
  2. Используйте мини-набор для выделения РНК крови в соответствии с инструкциями производителя.
    1. Вкратце, лизируйте эритроциты путем инкубации образца цельной крови с Buffer EL на льду. Центрифуга для гранулирования лейкоцитов и выбросьте надосадочную жидкость. Лизируйте лейкоциты с помощью Buffer RLT и гомогенизируйте лизат с помощью колонки измельчителя.
    2. Добавьте этанол в гомогенизированный лизат и переложите в спиновую колонку. Промойте колонку буфером RW1 и буфером RPE. Элюируйте очищенную РНК путем добавления в колонку воды, не содержащей РНКазы, и центрифугирования.
  3. Оценка количества и качества РНК
    1. Количественная оценка РНК: Используйте спектрофотометр для измерения концентрации и чистоты РНК. Откройте программу на подключенном компьютере. Выберите опцию «Нуклеиновая кислота» в главном меню. Нанесите 1 мкл образца РНК на область образца.
    2. Проверка чистоты и целостности РНК
      ПРИМЕЧАНИЕ: Целостность и распределение по размерам общей РНК, очищенной с помощью мини-набора РНК крови, можно проверить с помощью спектрофотометрии и гель-электрофореза. Рибосомные РНК должны проявляться в виде острых полос или пиков. Видимое отношение 28S рРНК к 18S рРНК должно составлять примерно 2:1. Если рибосомные полосы или пики конкретного образца не являются резкими, а выглядят как мазок в сторону РНК меньшего размера; вполне вероятно, что образец подвергся значительной деградации либо до, либо во время очистки РНК.
      1. Для измерения спектрофотометрии опустите кронштейн устройства и нажмите кнопку Измерить , чтобы получить соотношение A260/A280. Оцените чистоту образца РНК, стремясь к соотношению A260/A280 от 1,8 до 2,0.
      2. Проведите электрофорез в 1% агарозном геле, как описано ниже.
        1. Приготовьте 1% раствор агарозы, нагревая порошок агарозы в буфере ТАЭ до полного растворения. Добавьте бромид этидия в раствор агарозы для достижения конечной концентрации 0,5 мкг/мл. Налейте раствор бромида агарозы и этидия в лоток для литья геля и дайте ему застыть.
          ПРИМЕЧАНИЕ: Бромид этидии представляет собой флуоресцентный краситель, который интеркалируется с РНК для обеспечения визуализации в ультрафиолетовом свете.
        2. Смешайте образцы РНК с загрузочным красителем и осторожно загрузите их в лунки застывшего геля. Запустите гель-электрофорез при напряжении 100 В в течение примерно 30 минут, чтобы разделить фрагменты РНК по размеру. Визуализируйте полосы РНК, поместив гель на УФ-трансиллюминатор или систему визуализации, что вызывает флуоресцирование РНК, окрашенной бромидом этидия.
  4. Хранение экстрагированной РНК
    1. Возьмите образцы извлеченной РНК. Аликвотируйте РНК в стерильные микроцентрифужные пробирки, используя объем 10 мкл на аликвоту. Храните аликвоты РНК при температуре -80 °C или ниже.
  5. Обратная транскрипция РНК в кДНК
    1. Следуйте протоколу комплекта обратной расшифровки. Разморозьте и приготовьте необходимые реактивы на льду и при комнатной температуре.
    2. Проведите реакцию элиминации геномной ДНК, чтобы удалить любое загрязнение геномной ДНК.
    3. Приготовьте мастер-микс для обратной транскрипции на льду, который содержит все компоненты, кроме матричной РНК.
    4. Добавьте матричную РНК с этапа элиминации ДНК в мастер-микс обратной транскрипции. Инкубируйте реакцию обратной транскрипции при 42 °C в течение 15 минут.
    5. Инактивировать фермент обратную транскриптазу путем инкубации при 95 °C в течение 3 минут. Используйте аликвоту готовой кДНК для немедленной ПЦР в реальном времени или храните кДНК при температуре -20 °C для последующего использования.

3. Дизайн праймера для ПЦР в реальном времени

  1. Выбор генов-мишеней и внутреннего контроля
    1. Выберите ген MLH1 в качестве мишени для количественной оценки из-за его связи с раком толстой кишки. Выберите β-актин в качестве внутреннего контроля для нормализации данных экспрессии генов.
  2. Процесс проектирования грунтовки
    1. Запустите программное обеспечение для разработки праймеров и введите последовательность гена MLH1 , полученную из Ensemble или UCSC Genome Browser.
    2. Установите температуру плавления (Tm) для грунтовок в диапазоне 58-60 °C, оптимальное содержание GC на уровне 40%-60% и длину грунтовки в диапазоне 18-24 нуклеотидов.
    3. Введите разработанные последовательности праймеров в базу данных NCBI BLAST для подтверждения специфичности.
      1. Зайдите на сайт BLAST, выберите Nucleotide BLAST. Вставьте последовательности грунтовок в поле поиска и нажмите кнопку BLAST.
      2. Проанализируйте результаты, чтобы убедиться в отсутствии нецелевого усиления. Более подробную информацию см. в таблице 1 .

4. ПЦР в реальном времени

  1. Настройка реакции ПЦР в реальном времени. Более подробную информацию см. в таблице 2 .
    1. Центрифугируйте реагенты при 4 °C в течение 5 мин при 10 000 x g , чтобы собрать содержимое на дне пробирок.
    2. Приготовьте мастер-смесь в соответствии с протоколом коммерческого набора, который включает в себя SYBR Green, буфер, dNTPs, MgCl2 и Taq-полимеразу.
    3. Распределите исходную смесь по маркированным ПЦР-пробиркам, обеспечив постоянство объема для всех образцов.
    4. Добавьте соответствующий объем прямого и обратного праймеров для MLH1 и β-актина в соответствующие пробирки.
    5. Разбавьте образцы РНК до постоянной концентрации 100 нг/л перед обратной транскрипцией и выполните обратную транскрипцию в кДНК с помощью набора для обратной транскрипции.
  2. Усиление и сбор данных
    1. Поместите пробирки для ПЦР в систему ПЦР в режиме реального времени.
    2. Запрограммируйте термоамплификатор с оптимизированными условиями циклирования: 95 °C в течение 20 с для денатурации, 54 °C в течение 30 с для отжига и 72 °C в течение 30 с для растяжения. Более подробную информацию см. в таблице 3 .
    3. Настройте машину на работу в течение 45 циклов.
    4. Отслеживайте реакцию в режиме реального времени на программном интерфейсе системы, наблюдая за кривыми амплификации для каждого образца.
    5. Включите отрицательный контроль без кДНК для проверки на загрязнение. Повторите ПЦР-прогон 3 раза для каждого образца, чтобы убедиться в достоверности данных.
  3. Анализ данных
    1. После завершения циклов используйте программное обеспечение системы для анализа значений порогового цикла (Ct). Экспортируйте значения Ct в программу для работы с электронными таблицами для дальнейшего анализа.
    2. Рассчитать относительную экспрессию генов с помощью метода 2-ΔΔCt 25, нормализовав данные к контролю β-актина.

5. Иммуногистохимия и генетические анализы

  1. Проведите иммуногистохимическую обработку срезов тканей для корреляции экспрессии белка MLH1 с уровнями экспрессии генов.
    1. Подготовьте тканевые слайды и нанесите антитела против MLH1.
    2. Используйте HRP-конъюгированное вторичное антитело и набор субстрата DAB (3,3'-диаминобензидин). Разработайте слайды в соответствии с инструкциями к набору и проанализируйте их с помощью светового микроскопа.
  2. Проведите специфичную для метилирования ПЦР и микросателлитное тестирование нестабильности для дифференциации синдрома Линча и спорадического КРР.
    1. Используйте коммерческий набор для экстракции ДНК. Следуйте протоколу набора как для крови, так и для опухолевых тканей.
    2. Обрабатывайте ДНК с помощью набора для преобразования бисульфита. Используйте специфичные для метилирования праймеры, предназначенные для промоторной области MLH1. Проводите ПЦР в соответствии с протоколом набора.
    3. Запустите гель-электрофорез на продуктах ПЦР для визуализации статуса метилирования.
    4. Для тестирования микросателлитной нестабильности (MSI) проводится капиллярный электрофорез с использованием генетического анализатора. Сравнивайте длину микросателлитов, анализируя флуоресцентно меченные ПЦР-продукты.

6. Статистический анализ

  1. Используйте коммерческое программное обеспечение для статистического анализа для анализа данных.
    1. Откройте программное обеспечение и создайте новый набор данных для экспрессии генов и демографических данных.
    2. Введите относительные значения экспрессии генов и соответствующие демографические данные в набор данных.
    3. Используйте тест Колмогорова-Смирнова для оценки нормальности данных.
      1. Выберите «Анализ» в верхнем меню, выберите « Непараметрические тесты», а затем «Устаревшие диалоговые окна».
      2. Нажмите на тест Колмогорова-Смирнова и введите переменную для экспрессии генов. Выполните тест и интерпретируйте выходные данные на предмет значимости нормальности распределения.
    4. Проведение Т-тестов для сравнения экспрессии гена MLH1 между пациентами и контрольной группами.
      1. Выберите «Анализ», затем «Сравнить средние» и выберите «Тест на независимые выборки».
      2. Назначьте принадлежность к группе (пациент или контрольная группа) в качестве групповой переменной, а экспрессию генов — в качестве тестовой переменной. Запустите тест и интерпретируйте двусторонний уровень значимости.
    5. Рассчитайте кратные изменения экспрессии генов с помощью метода 2-ΔΔCt 25.

Результаты

В этом исследовании 36 пациентов с раком толстой кишки были обследованы на экспрессию гена MLH1 в периферической крови и его связь с раком толстой кишки. Анализ демографических переменных показал, что 15 пациентов (41,6%) были женщинами, а 21 пациент (58,4%) – мужчинами. Сре?...

Обсуждение

Данное исследование было проведено с целью изучения экспрессии гена MLH1 . В данном исследовании было показано, что уровень экспрессии гена MLH1 был снижен у больных людей по сравнению со здоровыми людьми. На основании исследований изменения складок было показа...

Раскрытие информации

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Благодарности

Мы хотели бы выразить нашу благодарность и признательность всем, кто помог нам завершить эту исследовательскую работу.

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
Agarose Gel Electrophoresis EquipmentBio-RadMini-Sub Cell GT SystemsUsed to check RNA quality
Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)Sigma-AldrichE9884Used as an anticoagulant for blood samples
NanoDropThermoFisher ScientificND-2000Spectrophotometer used to determine RNA purity
Real-time PCR MachineApplied BiosystemsA34322Used for RT-PCR reactions
RNA Extraction KitIntron Biotechnology Co#Cat 17061Used for RNA extraction from blood samples
SYBR Green PCR KitThermo Fisher Scientific4309155Reagents used for RT-PCR experiments

Ссылки

  1. Favoriti, P., et al. Worldwide burden of colorectal cancer: a review. Updates Surg. 68 (1), 7-11 (2016).
  2. Lotfollahzadeh, S., Recio-Boiles, A., Cagir, B. Colon cancer. StatPearls. , (2024).
  3. Rawla, P., Sunkara, T., Barsouk, A. Epidemiology of colorectal cancer: incidence, mortality, survival, and risk factors. Prz Gastroenterol. 14 (2), 89-103 (2019).
  4. Woischke, C., Michl, M., Neumann, J. Molecular pathology of colorectal cancer. Pathologie. 44 (5), 279-286 (2023).
  5. Lachit, K., Vinita, P. Study of mismatch repair protein expression by using immunohistochemistry in various carcinomas with special reference to colorectal adenocarcinomas-at a tertiary referral laboratory in India. Asian Pacific J Cancer Biol. 7 (4), 341-347 (2022).
  6. Cerretelli, G., Ager, A., Arends, M. J., Frayling, I. M. Molecular pathology of Lynch syndrome. J Pathol. 250 (5), 518-531 (2020).
  7. Tiwari, A. K., Roy, H. K., Lynch, H. T. Lynch syndrome in the 21st century: clinical perspectives. QJM. 109 (3), 151-158 (2016).
  8. Hinrichsen, I., et al. Reduced migration of MLH1 deficient colon cancer cells depends on SPTAN1. Mol Cancer. 13 (1), 1-12 (2014).
  9. Nissar, B., Shah, I. A., ul Afshan, F., Ganai, B. A. A decade in unravelling the etiology of gastric carcinogenesis in Kashmir, India - A high risk region. Gene Rep. 21 (1), 100832 (2020).
  10. Reyes, G. X., Schmidt, T. T., Kolodner, R. D., Hombauer, H. New insights into the mechanism of DNA mismatch repair. Chromosoma. 124 (4), 443-462 (2015).
  11. Rogacheva, M. V., et al. Mlh1-Mlh3, a meiotic crossover and DNA mismatch repair factor, is a Msh2-Msh3-stimulated endonuclease. J Biol Chem. 289 (9), 5664-5673 (2014).
  12. Martin, S. A. The DNA mismatch repair pathway. DNA Repair Cancer Ther. , 151-177 (2016).
  13. Fukuhara, S., et al. DNA mismatch repair gene MLH1 induces apoptosis in prostate cancer cells. Oncotarget. 5 (22), 11297-11307 (2014).
  14. Boland, C. R., Goel, A., Patel, S. G. The genetic and epigenetic landscape of early-onset colorectal cancer. Colorectal Cancer. 9 (3), (2020).
  15. Özdemir, Z., et al. Uncommon variants detected via hereditary cancer panel and suggestions for genetic counseling. Mutat Res. 827, 111831 (2023).
  16. Sinicrope, F. A. Lynch syndrome-associated colorectal cancer. New Engl J Med. 379 (8), 764-773 (2018).
  17. Westwood, A., et al. Additional loss of MSH2 and MSH6 expression in sporadic deficient mismatch repair colorectal cancer due to MLH1 promoter hypermethylation. J Clin Pathol. 72 (6), 443-447 (2019).
  18. Chung, C. Predictive and prognostic biomarkers with therapeutic targets in colorectal cancer: A 2021 update on current development, evidence, and recommendation. J Oncol Pharm Pract. 28 (4), 850-869 (2022).
  19. Yu, H., et al. The mRNA level of MLH1 in peripheral blood is a biomarker for the diagnosis of hereditary nonpolyposis colorectal cancer. Am J Cancer Res. 6 (5), 1135-1140 (2016).
  20. Kasprzak, A. Prognostic biomarkers of cell proliferation in colorectal cancer (CRC): From immunohistochemistry to molecular biology techniques. Cancers. 15 (18), 4570 (2023).
  21. Tao, W., Xie, Y. Study on relationship between NILH1 gene 415 locus G→G mutation and sporadic colorectal cancer in Chinese patients. Chinese J Exp Surg. 26 (6), 752-754 (2009).
  22. Martinez, E. C., Zevallos-Delgado, C., Joseph, M. Analysis of the genetic expression of colon cancer genetic biomarkers on inflammatory bowel disease on blood and biopsy samples. Genomics Gene Func. 164, S49 (2023).
  23. Rahiminejad, S., Maurya, M. R., Mukund, K., Subramaniam, S. Modular and mechanistic changes across stages of colorectal cancer. BMC cancer. 22 (1), 436 (2022).
  24. Alrushaid, N., Khan, F. A., Al-Suhaimi, E., Elaissari, A. Progress and perspectives in colon cancer pathology, diagnosis, and treatments. Diseases. 11 (4), 148 (2023).
  25. Rao, X., Huang, X., Zhou, Z., Lin, X. An improvement of the 2ˆ(-delta delta CT) method for quantitative real-time polymerase chain reaction data analysis. Biostat Bioinfo Biomath. 3 (3), 71-85 (2013).
  26. Jurescu, A., et al. Colorectal carcinomas: Searching for new histological parameters associated with lymph node metastases. Medicina. 59 (10), 1761 (2023).
  27. Sawicki, T., et al. A review of colorectal cancer in terms of epidemiology, risk factors, development, symptoms and diagnosis. Cancers. 13 (9), 2025 (2021).
  28. Cardoso, R., et al. Overall and stage-specific survival of patients with screen-detected colorectal cancer in European countries: A population-based study in 9 countries. Lancet Reg Health Eur. 21 (1), 100458 (2022).
  29. Dekker, E., Tanis, P. J., Vleugels, J. L. A., Kasi, P. M., Wallace, M. B. Colorectal cancer. Lancet. 394 (10207), 1467-1480 (2019).
  30. Hull, M. A., Rees, C. J., Sharp, L., Koo, S. A risk-stratified approach to colorectal cancer prevention and diagnosis. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 17 (12), 773-780 (2020).
  31. Hossain, M. S., et al. Colorectal cancer: A review of carcinogenesis, global epidemiology, current challenges, risk factors, preventive and treatment strategies. Cancers. 14 (7), 1732 (2022).
  32. Guyot D'Asnières De Salins, A., et al. Discordance between immunochemistry of mismatch repair proteins and molecular testing of microsatellite instability in colorectal cancer. ESMO open. 6 (3), 100120 (2021).
  33. Chen, W., Swanson, B. J., Frankel, W. L. Molecular genetics of microsatellite-unstable colorectal cancer for pathologists. Diagn Pathol. 12 (1), 24 (2017).
  34. Li, J., et al. Role of MLH1 methylation in esophageal cancer carcinogenesis and its clinical significance. Onco Targets Ther. 11 (1), 651-663 (2018).
  35. Iyer, R. R., Pluciennik, A. DNA mismatch repair and its role in Huntington's disease. J Huntingtons Dis. 10 (1), 75-94 (2021).
  36. Rebuzzi, F., Ulivi, P., Tedaldi, G. Genetic predisposition to colorectal cancer: How many and which genes to test. Int J Mol Sci. 24 (3), 2137 (2023).
  37. Guo, L., Yu, Z., Li, Q., Liang, X., Yang, L. Correlation of MLH1 and MSH2 levels with clinicopathologic characteristics in colorectal cancer. Am J Transl Res. 15 (2), 1107-1116 (2023).
  38. Liu, Y., Yang, C., Li, W., Zhang, S., Li, L. Analysis of association of MLH1 and PMS2 gene expression with clinicopathological features in elderly patients with colorectal cancer. Chinese J Geriatrics. 1 (12), 927-930 (2020).
  39. Salem, M. E., et al. Molecular analyses of left- and right-sided tumors in adolescents and young adults with colorectal cancer. Oncologist. 25 (5), 404-413 (2020).
  40. Goshayeshi, L., et al. Prevalence and clinicopathological characteristics of mismatch repair-deficient colorectal carcinoma in early onset cases as compared with late-onset cases: a retrospective cross-sectional study in Northeastern Iran. BMJ open. 8 (8), e023102 (2018).
  41. Zaborowski, A. M., et al. Clinicopathological features and oncological outcomes of patients with young-onset rectal cancer. Br J Surg. 107 (5), 606-612 (2020).
  42. Paredes, S. R., Chan, C., Rickard, M. Immunohistochemistry in screening for heritable colorectal cancer: what to do with an abnormal result. ANZ J Surg. 90 (5), 702-707 (2020).
  43. Anvari, A. H., Ganji, S. M., Movahhed, T. K. Cellular MLH1 gene expression and pathologic factors in Iranian patients with colorectal cancer. Qom Univ Med Sci J. 14 (8), 62-70 (2020).
  44. Sahin, I. H., et al. Analysis of age, tumor-sidedness, and mismatch repair (MMR) genes with response to immune checkpoint inhibitors (ICIs) in MMR-deficient (dMMR) colorectal cancer (CRC) patients (pts): A multi-institutional study. J Clinl Oncol. 37 (15), e15029 (2019).

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

MLH1CDNA

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены