Выделение одиночных ядер из замороженных тканей млекопитающих для секвенирования одноядерных РНК

Для начала запустите роботизированный диссоциатор. Включите охлаждение, установив ползунок в верхней правой части экрана в положение «Охлаждение» и щелкнув по нему, чтобы начать охлаждение, чтобы ползунок стал оранжевым. Затем убедитесь, что прилагаемые бутылки NSR и NIB содержат достаточное количество жидкости и правильно охлаждены.

Достаньте образцы тканей из морозильной камеры с температурой минус 80 градусов по Цельсию и сразу же поместите их на сухой лед. С помощью предварительно охлажденного скальпеля разрежьте ткань на кусочек весом от 15 до 50 миллиграммов на предварительно охлажденной чашке Петри, или металлической пластине, помещенной на сухой лед. Достаньте из холодильника картридж для выделения ядер и распакуйте его.

Извлеките кофемолку, и нанесите пипеткой 15 микролитров ингибитора РНК на дно картриджа. С помощью пинцета поместите образец ткани на дно картриджа. Затем выберите «Запустить протокол» на приборе и нажмите на опцию «Ядра» в левом верхнем углу.

В меню выберите протокол выделения ядер малого объема, а затем нажмите «Изменить», чтобы убедиться, что скорость разрушения установлена как самая высокая. Затем откройте дверцу прибора. Вставьте картридж в указанное место.

Поверните замок картриджа и вставьте в столик до щелчка красной ручки. Закройте дверцу и нажмите «Далее», чтобы начать экстракцию ядер. Как только прогон будет завершен, извлеките картридж из инструмента, подняв красную ручку и вытащив сценку.

Сразу же поместите картридж на лед.