Приготовление клеточной суспензии из адгезивных клеточных культур кожи

Для начала удалите соответствующую среду из колб с культурами, содержащих кератиноциты, фибробласты и меланоциты. Аккуратно промойте клетки пятью-10 миллилитрами PBS. Теперь добавьте в колбу от 0,5 до двух миллилитров раствора Трипсин-ЭДТА, в зависимости от ее размера.

Инкубируйте колбу при температуре 37 градусов Цельсия. Используйте микроскоп для контроля отрыва клеток от поверхности. Суспендируйте отделенные клетки в двойном объеме нейтрализатора трипсина, чтобы деактивировать трипсин.

Затем переложите суспензию в 15-миллилитровую трубку. Теперь пипеткой наберите около 20 микролитров суспензии клеток кожи в 1,5-миллилитровую пробирку. С помощью гемоцитометра подсчитайте клетки Далее центрифугируйте пробирку при 300 г в течение пяти минут при комнатной температуре.

Затем пипеткой выведите большую часть надосадочной жидкости и повторно суспендируйте клеточную гранулу в небольшом количестве оставшейся жидкости. Добавьте равный объем свежей среды к ресуспендированным клеткам. В отдельной 15-миллилитровой пробирке приготовьте клеточную суспензию.

Первичные клетки кератиноцитов, меланоцитов, фибробластов и тучных клеток показали свою типичную морфологию при выращивании в соответствующих средах.