Подготовка сфер клеток кожи для 3D мультикультуры

Чтобы начать метод подвешенной капли, нанесите пипеткой 20 микролитров заранее приготовленной суспензии клеток кожи на крышку чашки Петри. Теперь накройте крышку нижней половиной чашки Петри и аккуратно переверните ее, чтобы образовались свисающие капли. Добавьте в чашку Петри стерильную воду, чтобы предотвратить испарение взрослой среды из капель.

Инкубируйте капли в течение 48-72 часов при температуре 37 градусов Цельсия. Далее заполните лунки новой пластины полной питательной средой. С помощью стерильно отрезанных наконечников пипетки перенесите клеточные сферы в лунки многолуночного планшета.

Перед экспериментом инкубируйте перенесенные сферы в течение одного дня в многолуночном планшете при температуре 37 градусов Цельсия. Для метода ограничения клеточной адгезии сначала добавьте 100 микролитров 1% раствора поверхностно-активного вещества в PBS в каждую лунку U-образной нижней пластины. Далее инкубируйте тарелку с раствором при температуре 37 градусов Цельсия в течение 24 часов.

Теперь приготовьте клеточную суспензию в нужной плотности клеток. Выведите из лунок раствор поверхностно-активного вещества, затем засейте по 50 микролитров клеточной суспензии в каждую лунку. Наконец, инкубируйте планшет при температуре 37 градусов Цельсия в течение 24 часов, чтобы достичь клеточных агрегатов.

Сферами, состоящими из 10 000 клеток, было легче манипулировать, так как они были видны в лунках. Более крупные сферы показали меньшую стабильность. Разные типы клеток образовывали сферы разного цвета.

Идеально округлые сферы были склонны терять свою форму во время переноса методом висящей капли. Для уменьшения деформации, приводящей к образованию неповрежденных клеточных агрегатов, требовалось аккуратное обращение. Неаккуратность и неопытность привели к повреждению сферы.