Мультиплексное циклическое флуоресцентное иммуногистохимическое окрашивание срезов раковой ткани

Для начала приобретите заранее подготовленные слайды, содержащие срезы раковых тканей. Приготовьте рабочую смесь первичных антител. Добавьте комплекс антител на предметное стекло и инкубируйте в течение одного часа при комнатной температуре.

Затем промойте предметное стекло три раза 0,1% Tween PBS в течение пяти минут. Приготовьте смесь флуоресцентных вторичных антител. Добавьте его по каплям на предметное стекло и выдержите при комнатной температуре в течение одного часа.

Затем проводят второй раунд первичной инкубации антител при комнатной температуре в течение одного часа. Промойте предметное стекло три раза 0,1% Tween PBS в течение пяти минут каждый. И с помощью фильтровальной бумаги удалите лишнюю воду с периметра салфетки.

Точно так же проведите второй раунд вторичной инкубации антител и промывки, как было показано ранее. Теперь добавьте в ткань реагент марганцовки. Через одну минуту промойте его проточной водой в течение пяти минут.

Выполняют обезвоживание с увеличением концентрации спирта. Наконец, добавьте DAPI, чтобы полностью покрыть срез ткани, и поместите покровный лист для мультиспектральной визуализации. Мультиплексная иммунофлуоресцентная визуализация показала наличие CD 3 положительных, CD 8 положительных, CD 20 положительных клеток в ткани метастазов рака легкого.