La sfida per l'immunoistochimica è quella di scegliere le specie di anticorpi monoclonali primari e secondari per evitare la cross-reattività e ottenere una migliore specificità e ripetibilità. La decisione di genere è necessaria per ottimizzare il rapporto di diluizione degli anticorpi. Nel frattempo, un'altra sfida è quella di allineare la localizzazione e le sottostrutture.
L'uso di questo protocollo soddisfa l'evoluzione tecnica della distribuzione di tre sottopopolazioni linfocitarie, come CT tre, CT 3 positiva, TC 8 positiva e CT 20 positiva in base alla conta cellulare e all'espressione proteica nei tessuti conservati, anche il livello di infiltrazione può essere osservato. Nel nostro protocollo, il parametro Anticorpi e gli Anticorpi Fluor secondari derivano da specie diverse alla miscela iso rendendoci un efficiente. Questa misura mostra anche una misura specifica tra anticorpo e antigene.