Транскрипция РНК-аптамера из конденсатов РНК-шаблонов C-звезды

Для начала промойте конденсаты РНК-шаблонов C-звезды, дав раствору извлеченных конденсатов отстояться не менее пяти минут. Затем, во время пипетирования от верхнего уровня жидкости, чтобы свести к минимуму удаление конденсата, экстрагируйте примерно половину объема надосадочной жидкости. Добавьте тот же объем 0,3 моляра натрия хлорида в трис-ЭДТА, чтобы заменить удаленный надосадочный агент, и перемешайте с помощью пипетирования.

Повторите цикл удаления надосадочной жидкости и замены буфера в общей сложности в течение трех циклов. Для транскрипционной смеси Т7 приготовьте стоковый раствор 10 миллимолярного DFHBI в диметилсульфоксиде. Затем разбавьте аликвоту до конечной концентрации 600 микромоляров, используя свободную воду из РНКазы и ДНКазы.

Разморозьте компоненты набора для транскрипции на льду. Затем с помощью стерильных наконечников для пипеток нанесите отображаемые компоненты в автоклавную микроцентрифужную пробирку при комнатной температуре. Аккуратно перемешайте раствор с помощью пипетирования и сразу используйте его для синтеза транскрипта РНК.

Для этого пипетка нагнетает 3,3 микролитра промытых конденсатов, приготовленных из шаблонов РНК C-звезд, в камеру, пригодную для микроскопической визуализации. И добавляем общий объем свежеприготовленной транскрипционной смеси. Получайте микроскопические изображения в течение 18 часов, начиная сразу после добавления транскрипционной смеси в конденсаты.

Для транскрипции РНК-аптамеров успешный результат был подтвержден увеличением флуоресценции флоригена с течением времени с помощью микроскопии.