Приготовление и поддержание смешанной культуры глии, полученной из мозга неонатальных мышей

Для начала измельчите изолированные мозги на кусочки размером примерно один квадратный миллиметр с помощью стерильного одноразового лезвия скальпеля. Аккуратно переложите измельченные мозги в новую стерильную 50 миллилитровую трубку. Добавьте в измельченный мозг концентрацию 0,25% трипсина.

Инкубируйте ткань на водяной бане при температуре 37 градусов Цельсия в течение 20 минут. Добавьте пять миллилитров полной среды для культуры глии, чтобы нейтрализовать трипсин, и аккуратно перемешайте тканевую суспензию с помощью пипетки объемом 10 миллилитров. Осторожно сцедите клеточную суспензию через клеточное ситечко.

Затем извлеките поршень из стерильного одномиллилитрового шприца и измельчите ткань в сетку с помощью поршня. Добавьте равные объемы клеточной суспензии, содержащей один-два мозга с питательной средой для глии, в каждую колбу, в результате чего конечный объем составит 15 миллилитров. Разреженные клетки и чрезмерное количество клеточного мусора наблюдались в первый день.

К четвертому дню были сгенерированы адгезивные астроциты. Конфлюентные клетки с типичной морфологией астроцитов наблюдались на восьмой день культивирования.