Наш протокол использует местное администрирование естественного ингибирующего нейромедиатора ГАМК с помощью очень нового устройства, которое может предложить новое решение в лечении эпилептических припадков. Микроаэрофильной ионный насос позволяет нам иметь очень точный контроль над точно, когда и где мы поставляем наркотики. Точно резьбовая электрофоретическая доставка может быть изменена для лечения других неврологических заболеваний.
Еще одним преимуществом этого метода доставки наркотиков является то, что есть очень незначительное увеличение давления в розетке доставки наркотиков, потому что нет жидкости, которая на самом деле доставляется. Скорее, это просто молекулы наркотиков сами. Поскольку тесная локализация зондов будет представлять наибольшую проблему, очень желательно проверить их углы выравнивания и позиционирования с манекен зондов в стереотаксисе кадра.
Начните с фиксации головы обезболивающей мыши в стереотаксисной раме и с помощью 30 калибровочных игл для инъекций местного анальгетики подкожно в запланированном месте разреза. Через пять минут используйте скальпель, чтобы сделать разрез средней линии в черепе. И использовать тонкие миппы, чтобы аккуратно втягивать кожу.
Зажим кожи с бульдогом Serofine зажимы. И очистите обив поверхность черепа от фасции. Используя зубную дрель с тонкой, круглой 0,4-миллиметровой буровой бит, просверлите отверстие в черепе над мозжечок, пока дура не будет видна.
Поместите землю винт в отверстие и использовать точность отвертки, чтобы повернуть винт, пока он не достигнет верхней части мозжечка. Используя стереотаксисную раму, измерьте стереотаксис координаты для желаемой области мозга и используйте сверло, установленное на быстрой скорости, чтобы разбавить область черепа диаметром примерно от одного до двух миллиметров, о целевой области, пока не останется тонкая, хорошо отполированная прозрачная костная мембрана. Затем используйте на заказ крючковатый кончик иглы, чтобы удалить дуру и добавить каплю солевого раствора в результате отверстие.
Для многоканаканной вставки кремниевого зонда поместите зонд на стереотаксисную руку, прикрепленную к магнитному держателю, и поместите руку рядом со стереотаксисной рамой. Установите стереотаксисные руки в небольшой 20-градусный передний-задний угол, чтобы оставить достаточно места для позиционирования двух других имплантатов. И подключите зонд к головной сцене и к первому винту.
Используйте микрон-точную стереотаксисную руку, чтобы медленно опустить кремниевый зонд в гиппокамп и инициировать программное обеспечение для записи электрических нейронных сигналов при перемещении многоканального кремниевого зонда из верхней части коры до тех пор, пока не будет достигнуто целевое спиновое положение. Затем одновременно записыв локальный полевой потенциальный сигнал от слоев коры головного мозга и гиппокампа во время проникновения на экран компьютера и используйте волновую активность в пирамидальных слоях гиппокампа в записанном локальном полевом потенциале в качестве маркера целевой зоны. Для заполнения микрофлюидного ионового насоса подключите трубки к входу насоса и заполните зонд раствором 0,05 молярной ГАМК.
Удалите трубки, и закрыть вход с парафиновой пленкой упаковки и убедитесь, что микрофлюидный ионный насос крепится надежно к держателю. Позаботьтесь при монтаже держателя к руке микроманипулятора перед подключением электрического приводит к блоку измерения источника. С стереотаксисом руку на 20-градусный медио-боковой угол, опустите насос медленно с осяными движениями как можно ближе к зонду, как это возможно, не давая насос изгиб, пока насос не достигнет спиновой координаты отрицательных 1200 микрометров от корковой поверхности.
В рамках подготовки к индукции захвата, удалить металлическую иглу концентратор 10-микролитровый шприц и исправить borosilicate микропипет на кончик шприца. Поместите концентратор над кончиком микропайпета и распо поместите шприц под углом 20 градусов боковой медиаль. Используйте автоматизированный микроинъекции насос для загрузки от 500 до 1000 нанолитров 50 миллимолярный полный аминопиридин в искусственной спинномозговой жидкости в шприц и снизить стекло микропипют до спинсовалентной координатной позиции.
Введи 250 нанолитров раствора в мозг и инициировать запись в программном обеспечении. Затем следите за экраном и ждите первого межиктального всплеска, прежде чем применять один вольт между источником и целью в течение 100 секунд и одну секунду в течение 30 циклов, чтобы доставить решение ГАМК. Точная локализация имплантатов помогает в записи гиппокампа местных полевых потенциалов, вызывая небольшие изъятия гиппокампа, и доставки ГАМК в начале захвата.
Кроме того, локализация имплантатов может быть проверена после каждого эксперимента по пост-специальной гистологии. Здесь, пример того, когда захват, как события могут быть остановлены с доставкой ГАМК по роману нейронального зонда, включая микрофлюидный зонд показано. Когда четыре аминопиридин был введен в большую площадь или на верхней части коры головного мозга, эпилептические припадки стали обобщенными, так что доставленный ГАМК не смог изменить степень эпилептических припадков.
Примечательно, что доставка ионов натрия не существенно повлияла на четыре аминопиридин-индуцированной активности. Таким образом, этот протокол может быть полезен для любой стереотаксисной хирургии, которая включает в себя имплантацию нескольких хрупких зондов. С помощью микрофлюидного ионового насоса, другие виды в заряженных молекул может быть введен для лечения не только эпилепсии, но и других неврологических заболеваний.
Электрофоретическая доставка в тканях, межгосударственных представляет собой новый подход в целом доставки видов в любой мягкой ткани. Позаботьтесь об особом уходе при применении 4AP, так как это токсин и вызывает эпилепсию.
