Большинство растений в природе, вероятно, взаимосвязаны симбиотических корнеплодов грибов называется mycorrhizal грибов. В этом методе четко рассматривается, как общие сети микорризала влияют на взаимодействие растений и последующие экологические последствия. С помощью этого метода, мы можем явно изучить роль общих сетей mycorrhizal, позволяя всем растениям быть колонизированы грибами, в отличие от исключения грибов, что приводит к плохо растущих растений.
Чтобы начать модифицировать коммерческие трубчатые контейнеры для рассады с гибким пластиком, используйте буровой пресс и удерживайте контейнер у забора на буровом прессе, и остановитесь с коротким дюбелем, который помещается внутри контейнера, чтобы помочь удержать его на месте во время бурения. Затем просверлите два отверстия, одно над другим, по бокам контейнера, так что отверстия находятся на высоте около одного сантиметра друг от друга. Вырезать оставшийся тонкий кусок пластика между отверстиями, чтобы сделать один удлиненный отверстие, около двух сантиметров в ширину, и пять сантиметров в длину.
Повторите резки этих удлиненных отверстий на противоположной стороне контейнера. Чтобы покрыть слоты нейлоновой сеткой, разрежьте 40 микрометровую поровую сетку на столько же 9,5 сантиметра на 8,5 сантиметра, сколько и контейнеров. Затем, используя высоко прочность промышленного горячего клея, закрепите нейлоновую сетку внешне на контейнеры, чтобы покрыть оба отверстия, с некоторым небольшим перекрытием в ткани.
Нанесите горячий клей вокруг отверстий на контейнер, и вдоль длинных краев на нейлоновой сетке, и свернуть контейнер на нейлоновой сетки, и гидрофобной мембраны, при использовании, чтобы избежать сжигания пальцев. Добавьте слой клея вдоль края ткани, где края сетки перекрываются, и нажмите край на некоторый картон, чтобы прочно запечатать его. После того, как клей остынет, используйте гибкую ленту, чтобы прикрепить верхние и нижние концы ткани к контейнеру, чтобы предотвратить свободные края и разрыв.
Используя ту же ленту, накройте небольшие отверстия по бокам конического конца каждого контейнера, чтобы предотвратить рост корня из контейнера в остальную часть горшка. Поместите стеклянный мрамор на дно каждого контейнера, чтобы предотвратить потерю почвы, обеспечивая при этом дренаж, а затем собрать горшки, как описано в рукописи. Используйте твердые, неизмененные контейнеры для контрольной обработки, которая не предполагает какого-либо потенциала для CMN, чтобы сформировать между растениями.
Добавить AM грибок inoculum в почву, равномерно смешивая 1,2 сантиметра длиной нарезанные корневые кусочки тщательно с почвой. Выберите желаемую почву, смешанную с бесплодным кремнеземом или стеклянными бусинами, чтобы уменьшить концентрацию минеральных питательных веществ, доступных растениям. Распоить заполненные контейнеры в ранее построенной просверленной пене в горшках.
Чтобы сделать бедную питательными веществами смесь кремнеземного песка адекватного дренажа, смешайте песок среднего размера частиц с мелким песком размера частиц в цементном смеситель. Заполните интерстициальное пространство с помощью этой смеси с помощью воронки, чтобы помочь в заполнении небольших пространств. Далее, пересадка предварительной обработки, или так называемых растений медсестры, желаемого вида в каждый контейнер для поддержания AM грибов, которые будут распространяться среди контейнеров и создать общие сети mycorrhizal.
Выращивайте растения в течение двух-трех месяцев при примерно 24 градусах по Цельсию в теплице, чтобы позволить создание CMN. Sew экспериментальных растений путем посева в контейнеры. Подождите, пока все контейнеры проросли саженцы, прежде чем удалить предварительной обработки растений медсестры, путем отсечения их побеги.
Чтобы установить процедуры CMN, оставьте некоторые контейнеры не перемещены в течение всего эксперимента. Чтобы физически разорвать гифа, простирающуюся между модифицированными контейнерами, поверните некоторые контейнеры еженедельно, убедившись, что сделать это через одно полное вращение, чтобы избежать непреднамеренного изменения наземных взаимодействий. Сразу же после вращения, сильно поливать все горшки, чтобы восстановить контакт между интерстициальным субстратом и сторонами контейнеров.
Замачивание всех горшков водой после разрыва общих сетей mycorrhizal имеет решающее значение для восстановления контакта между контейнером и интерстициальным субстратом, поэтому предотвращение непреднамеренного аэрации контейнеров. Удобрять соседние растения 0,5%азотом 15 обогащенной нитратом калия и хлоридом аммония. Удобрять целевого человека азотом 14 удобрений одинаковой концентрации.
Повторное рандомизации позиций горшков в течение эксперимента, по крайней мере ежемесячно. Измерьте рост еженедельно путем измерять самую длинную длину листьев, контролировать когда рост начинает замедлять, убеждаться собрать прежде чем заводы станут связанными корня. Для сбора урожая, клип все надземные ткани, и место отдельных растений в конверты помечены с их лечения, горшок, и положение.
Затем высушите надземные ткани при температуре 60 градусов по Цельсию в принудительной печи для сушки воздуха, до постоянного веса, а затем измерьте сухой вес каждой растительной ткани. Дайте почве высохнуть за два-три дня до снятия контейнеров и сбора корней. После сбора урожая аккуратно отмахивайте как можно больше почвы от корневых систем.
Вымойте корни на сито с размером 250 микрон поры, чтобы избежать потери корня. После того, как корни высохнут, взвесь всю корневую систему. Клип корневой системы случайным образом, и поместите фрагменты в 50%этанола.
Повторно взвесить оставшуюся корневую систему и хранить ее в маркированную бумажную оболочку, чтобы высохнуть при 60 градусах по Цельсию для оценки сухого веса. При выращивании Andropogon gerardii Vitman в эксперименте целевого завода, разрыв или предотвращение CMNs уменьшился целевой надземный сухой вес, предполагая, что нетронутыми CMNs способствовали росту растений. Растения с отрезанным CMNs и не CMNs ответили аналогичным образом на их лечения.
Конкуренция, в которой рост одного человека подавляет рост другого соседнего человека, была обнаружена в нетронутой лечения CMN, но не в разорванной или нет лечения CMN. Тщательное сравнение различных концентраций минеральных питательных листьев листьев, по сравнению с растительными размерами только концентрации марганца, были положительно связаны с целевым растением надземных сухих весов, во всех лечения. Целевая ткань растений была оценена на азот 15 в тканях листьев по сравнению с размером растения, после добавления азота 15 этикетки только для соседей контейнеров.
Целевые растения с нетронутыми CMNs имели более высокие концентрации азота 15, по сравнению с обеими другими обработками. Intact CMNs имели сильно положительный, значительно различный наклон количества азота, от того из отрезанной обработки CMNs, предлагая что большие заводы получили больше азота от CMNs достигая в соседние контейнеры, чем малые индивидуалы цели. В полевом эксперименте с использованием вращаемых ядер из трубы ПВХ экстрарадический мицелий за пределами труб мало повлиял на рост мыльного поля в течение 13-месячного эксперимента.
Однако, разрывая его путем вращения труб, снижение концентрации флорарного азота, фосфора и меди, существенно показано хлоротических растений. Поверните контейнеры в том же направлении, что ткань приклеена к каждому контейнеру, чтобы избежать разрыва ткани, и поверните на 360 градусов, чтобы уменьшить наземные изменения растений. Эта процедура может быть использована в поле с модифицированными трубами ПВХ, заполненными стерильной почвой, чтобы изучить роль экстрарадического мицелия в колонизации корней, и его влияние на поглощение питательных веществ.
Этот метод позволяет сравнивать растения с общими сетями микорритов, с микорхизальами, которые не связаны сетями, а не с мелкими растениями без микорритов, как это чаще всего делается.
