Этот протокол использует высокочастотную ультрасонографию для оценки изменений в мочевом пузыре и нижних мочевыводящих путях у мышей. Этот метод позволяет продольное обследование мочевыводящих путей in vivo для анатомических и физиологических измерений и дополняет другие методы измерения мочевого потока. Способность оценивать изменения in vivo voiding в моделях грызунов, которые подытожают аспекты урологических заболеваний человека, может дать представление о прогрессировании заболевания и эффективности лечения.
Начните с подключения зонда с центральной частотой 30 мегагерц к активному порту ультразвуковой системы и предустановки приложения для визуализации брюшной полости. Для оптимального повышения контрастности встряхните соответствующий контрастный агент в вихревом смеситель в течение 45 секунд, чтобы инкапсулировать микропузырьки в растворе. После подтверждения отсутствия ответа на щепотку ноги, поместите анестезировал 24-недельный C57 черный 6 мужской мыши в положении на спине на подогретой платформе и брить волосы из живота.
Удалите оставшиеся волосы с помощью крема для депиля и распоилите ультразвуковой зонд параллельно длинной оси мочевого пузыря. Затем с помощью манипулятора XY, чтобы переместить мышь по мере необходимости, получить длинные и короткие изображения оси мочевого пузыря. Перед визуализацией сделайте разрез средней линии через кожу и брюшную стенку, чтобы разоблачить мочевой пузырь и предварительно заполнить кусок гибкой полиэтиленовой трубки солевым раствором.
Затем соедините шприц, оснащенный иглой 27 калибра, к куску трубки и вставьте иглу в мочевой пузырь. Чтобы подтвердить правильное размещение иглы, привить 10 микролитров солевого раствора в мочевой пузырь. Замените солевой шприц шприцем, содержащим вихревое контрастное вещество, и соберите еще одно B-режимное изображение катетеризованного мочевого пузыря.
Для облегчения измерения диаметра уретры, привить 0,5 миллилитров болюс микропузырьки в течение трех секунд в мочевой пузырь, пока мочеиспускание событие происходит. Чтобы облегчить измерение скорости, исправь угол окна образца Доплера, пока он не будет параллельным потоку мочи и привить второй болюс микропузырьки в мочевой пузырь. Затем соберите 3D изображение полного мочевого пузыря.
Когда все изображения были получены, проследить снаружи до внутренних краев стенки мочевого пузыря и использовать линейный инструмент измерения расстояния для измерения мочевого пузыря. Используйте объемный инструмент, чтобы проследить внутри стен мочевого пузыря, чтобы создать контур. Несколько контуров могут быть созданы через толщину мочевого пузыря для расчета объема мочевого пузыря в режиме 3D приобретения.
Для первого события аннулирования используйте инструмент линейного расстояния для измерения края уретального диаметра до края в точке окна образца скорости Доплера. Для первого события аннулирования используйте интегральный инструмент времени скорости для измерения уретры. Здесь показаны репрезентативные ультразвуковые изображения мышелового пузыря, приобретенные без контрастного агента.
Стена мочевого пузыря является эхогенной и толщина стенки мочевого пузыря может быть измерена с помощью пакета измерения программного обеспечения. Размер мочевого пузыря и форма могут быть оказаны в 3D для определения объема мочевого пузыря. Здесь показано репрезентативное изображение микропузырька, наполненного эхогенным мочевым пузырем.
После низкочастотного ультразвукового всплеска пузырьки разрушаются, и мочевой пузырь становится преходящим эхогенным до того, как пузырьки реформятся, подтверждая структуру мочевого пузыря. Во время мочеиспускания, диаметр уретрального люмена может быть приобретен во время мочеиспускания вместе со скоростью потока мочи, проходящей через эту область уретры. Используя контрастную визуализацию, измерения диаметра могут быть сделаны по всей видимой длине уретры.
Из этих измерений, дальнейшие расчеты могут быть сделаны для оценки мочевого потока и мочевого пузыря соответствия. Правильное активация контрастного агента имеет важное значение для успеха этого протокола. Мы можем реконструировать мочевыводящих путей грызунов с помощью МРТ и микрокомпьютерной томографии, чтобы подтвердить ультразвуковую текутерометрию, а также внедрить новые сложные модели динамики урологического потока и 3D-реконструкции.
Мы начали использовать этот метод для количественного изучения моделей заболеваний нижних мочевыводящих путей, последствий старения и эффективности терапевтического лечения функции мочевыводящих путей.
