Este protocolo utiliza ultrassonografia de alta frequência para avaliar as mudanças na bexiga e no trato urinário inferior em camundongos. Esta técnica permite um exame longitudinal do trato urinário in vivo para medições anatômicas e fisiológicas e é complementar a outras técnicas para medir o fluxo urinário. A capacidade de avaliar in vivo anulando mudanças em modelos de roedores que recapitulam aspectos de doenças urológicas humanas pode fornecer insights sobre a progressão da doença e a eficácia do tratamento.
Comece conectando uma sonda com uma frequência central de 30 mega-hertz à porta ativa do sistema de ultrassom e presetting a aplicação à imagem abdominal. Para um melhor aprimoramento de contraste, agite um agente de contraste apropriado em um misturador de vórtice por 45 segundos para encapsular as microbolhas na solução. Depois de confirmar a falta de resposta ao aperto do dedo do pé, coloque um rato c57 preto 6 macho de 24 semanas de idade anestesiado na posição supina em uma plataforma aquecida e raspe o cabelo do abdômen.
Remova qualquer cabelo restante com creme depilatório e posicione a sonda de ultrassom paralelamente ao longo eixo da bexiga. Em seguida, usando o manipulador XY para mover o mouse conforme necessário, obtenha imagens de eixo longo e curto da bexiga. Antes da imagem, faça uma incisão midline através da pele e da parede abdominal para expor a bexiga e pré-encher um pedaço de tubo flexível de polietileno com soro fisiológico.
Em seguida, conecte uma seringa equipada com uma agulha calibre 27 ao pedaço de tubo e insira a agulha na bexiga. Para confirmar a colocação correta da agulha, insira 10 microlitres de soro fisiológico na bexiga. Substitua a seringa salina por uma seringa contendo o agente de contraste vórtice e colete outra imagem em modo B da bexiga cateterizada.
Para facilitar a medição do diâmetro da uretra, incutir um bolus de 0,5 mililitro de microbolhas durante um período de três segundos na bexiga até que ocorra um evento de urinação. Para facilitar a medição da velocidade, corrija o ângulo da janela da amostra do Doppler até que seja paralelo ao fluxo de urina e insira um segundo bolus de microbolhas na bexiga. Em seguida, colete uma imagem 3D da bexiga cheia.
Quando todas as imagens tiverem sido obtidas, rastreie as bordas externas até as bordas internas da parede da bexiga e use a ferramenta de medição de distância linear para medir a bexiga. Use a ferramenta volumosa para rastrear o interior das paredes da bexiga para criar um contorno. Vários contornos podem então ser gerados através da espessura da bexiga para calcular o volume da bexiga no modo de aquisição 3D.
Para o primeiro evento de anulação, use a ferramenta de distância linear para medir a borda do diâmetro uretral até a borda no ponto da janela de amostra de velocidade Doppler. Para o primeiro evento de anulação, use a ferramenta integral de tempo de velocidade para medir a velocidade uretral. Aqui, são mostradas imagens representativas de ultrassom de uma bexiga de rato adquirida sem agente de contraste.
A parede da bexiga é ecogênica e a espessura da parede da bexiga pode ser medida usando um pacote de medição de software. Um tamanho e forma da bexiga podem ser renderizados em 3D para determinar o volume da bexiga. Aqui, uma imagem representativa de uma bexiga ecogênica cheia de microbolhas é mostrada.
Após a explosão ultrassônica de baixa frequência, as bolhas são destruídas e a bexiga torna-se transitoriamente ecogênica antes que as bolhas se reformem confirmando a estrutura como a bexiga. Durante um evento de urinação, o diâmetro do lúmen uretral pode ser adquirido durante a urinação, juntamente com a velocidade de fluxo da urina que passa por aquela região da uretra. Utilizando imagens de contraste, as medidas de diâmetro podem ser feitas em toda a extensão visível da uretra.
A partir dessas medições, mais cálculos podem ser feitos para avaliar o fluxo urinário e a conformidade com a bexiga. Ativar o agente de contraste corretamente é essencial para o sucesso deste protocolo. Podemos reconstruir os tratos urinários roedores com ressonância magnética e tomografia microcomputada para confirmar ametria de fluxo de ultrassom, bem como introduzir novos modelos complexos de dinâmica de fluxo urológico e reconstrução 3D.
Começamos a usar essa técnica para examinar quantitativamente modelos de doença do trato urinário inferior, os efeitos do envelhecimento e a eficácia dos tratamentos terapêuticos na função urinária.
