Ce protocole utilise l’échographie à haute fréquence pour évaluer les changements dans la vessie et les voies urinaires inférieures chez la souris. Cette technique permet un examen longitudinal de l’appareil urinaire in vivo pour les mesures anatomiques et physiologiques et est complémentaire à d’autres techniques de mesure du flux urinaire. La capacité d’évaluer les changements in vivo annulant dans les modèles de rongeurs qui récapitulent des aspects des maladies urologiques humaines peut fournir un aperçu de la progression de la maladie et l’efficacité du traitement.
Commencez par connecter une sonde à une fréquence centrale de 30 mégahertz au port actif du système d’échographie et précompensez l’application à l’imagerie abdominale. Pour une amélioration optimale du contraste, secouez un agent de contraste approprié dans un mélangeur vortex pendant 45 secondes pour encapsuler les microbubbles en solution. Après avoir confirmé un manque de réponse au pincement des orteils, placez une souris mâle noire C57 noire de 24 semaines anesthésiée dans la position supine sur une plate-forme chauffée et rasez les cheveux de l’abdomen.
Retirez les cheveux restants avec de la crème depilatory et placez la sonde à ultrasons parallèle à l’axe long de la vessie. Ensuite, en utilisant le manipulateur XY pour déplacer la souris si nécessaire, obtenir des images de l’axe long et court de la vessie. Avant l’imagerie, faire une incision médiane à travers la peau et la paroi abdominale pour exposer la vessie et pré-remplir un morceau de tube de polyéthylène flexible avec salin.
Connectez ensuite une seringue munie d’une aiguille de calibre 27 au morceau de tube et insérez l’aiguille dans la vessie. Pour confirmer le placement correct de l’aiguille, inculquez 10 microlitres de solution saline dans la vessie. Remplacez la seringue saline par une seringue contenant l’agent de contraste vortexé et recueillez une autre image en mode B de la vessie cathétérisée.
Pour faciliter la mesure du diamètre de l’urètre, instiller un bolus de 0,5 millilitre de microbobubbles sur une période de trois secondes dans la vessie jusqu’à ce qu’un événement de miction se produise. Pour faciliter la mesure de la vitesse, corrigez l’angle de la fenêtre de l’échantillon Doppler jusqu’à ce qu’il soit parallèle à l’écoulement de l’urine et inculquez un deuxième bolus de microbubbles dans la vessie. Ensuite, recueillir une image 3D de la vessie pleine.
Lorsque toutes les images ont été obtenues, tracez l’extérieur jusqu’aux bords intérieurs de la paroi vésicale et utilisez l’outil de mesure linéaire de la distance pour mesurer la vessie. Utilisez l’outil volumétrique pour tracer l’intérieur des parois de la vessie pour créer un contour. Plusieurs contours peuvent ensuite être générés par l’épaisseur de la vessie pour calculer le volume de la vessie en mode d’acquisition 3D.
Pour le premier événement d’annulation, utilisez l’outil de distance linéaire pour mesurer le bord du diamètre urétral pour border au point de la fenêtre de l’échantillon de vitesse Doppler. Pour le premier événement d’annulation, utilisez l’outil intégral de temps de vitesse pour mesurer la vitesse urétrale. Ici, des images échographiques représentatives d’une vessie de souris acquises sans agent de contraste sont montrées.
La paroi vésicale est échogénique et l’épaisseur de la paroi de la vessie peut être mesurée à l’aide d’un logiciel de mesure. La taille et la forme de la vessie peuvent être rendues en 3D pour déterminer le volume de la vessie. Ici, une image représentative d’une vessie échogénique remplie de microbubble est montrée.
Après l’éclatement ultrasonique de basse fréquence, les bulles sont détruites et la vessie devient transitoirement échogénique avant que les bulles ne se reforment confirmant la structure comme vessie. Au cours d’un événement de miction, le diamètre du lumen urétral peut être acquis pendant la miction avec la vitesse d’écoulement de l’urine passant par cette région de l’urètre. À l’aide de l’imagerie par contraste, des mesures de diamètre peuvent être effectuées sur toute la longueur visible de l’urètre.
À partir de ces mesures, d’autres calculs peuvent être effectués pour évaluer le débit urinaire et la conformité de la vessie. L’activation correcte de l’agent de contraste est essentielle au succès de ce protocole. Nous pouvons reconstruire des voies urinaires de rongeur avec MRI et tomographie microcomputed pour confirmer la flowmetry d’ultrason aussi bien qu’introduire de nouveaux modèles complexes de dynamique urologique de flux et de reconstruction 3D.
Nous avons commencé à utiliser cette technique pour examiner quantitativement les modèles de la maladie des voies urinaires inférieures, les effets du vieillissement, et l’efficacité des traitements thérapeutiques sur la fonction urinaire.
