Общий протокол описывает легко выполняемые хирургические процедуры удаления аппендикса, известного как кекальный пластырь у мышей. Модель аппендэктомии мурина может быть использована для изучения биологических ролей аппендикса при патогенезах желудочно-кишечных заболеваний человека. Человеческий аппендикс является спорным органом.
Недавние исследования показали, что приложение играет важную роль в поддержании здоровья кишечника. Для изучения биологической функции аппендикса крайне важно создать связанную с болезнью модель аппендэктомии животных. В этом протоколе мы опишем простые и безопасные хирургические шаги по удалению аппендикса, известного как кекальный пластырь у мышей.
Для обеспечения успеха этой модели, Есть три ключевых шага, как вы увидите в следующем видео. Во-первых, найти caecum мышей до операции. Во-вторых, сделать небольшой разрез в брюшной полости.
В-третьих, дезинфицировать и закрыть пень caecum. Первая часть, аппендэктомия мышей. Подготовка стерильных хирургических инструментов и чистящих средств перед операцией.
Анестезировать и обеспечить мышь на платформе в положении на спине, поместив четыре полосы медицинской клейкой лентой через конечности, чтобы предотвратить постуральное движение во время операции. Аккуратно коснитесь всего живота мыши, чтобы найти ощущение удара. Обложка драпировки и дезинфицировать бритую область живота мыши как можно более широко, используя два раза энтоиодина.
Сделайте продольный разрез в диапазоне от 0,5 сантиметра до одного сантиметра в средней линии живота. В соответствии с предопределенным расположением caecum, искать caecum и осторожно экстерьера его примерно на один сантиметр длиной, чтобы определить caecal патч. Используйте предварительно разогретый и стерильный физиологический солевой раствор для увлажнения кишечника.
Для предотвращения потенциальных осложнений послеоперационного кровотечения и инфекции, ligate мезентерических кровеносных сосудов caecum с помощью 8-0 Шов. Гидрат caecum с солевым раствором. Отметьте область ресекции с помощью шов 4-0 с открытой петлей вблизи вершины кекума в проксимальной толстой кишке.
Отрежьте кекальный патч ниже отмеченной ресекции с помощью микро-ножниц и уничтожить остаточный caecal содержание с медицинской ватные тампоны. Дезинфицировать пень caecum с энтоиодином. Закрыть пень с работает шов с помощью 8-0 Шов.
Аккуратно удалите петлю потока 4-0, ранее используемую для маркировки ресекции на пне caecum. Стерилизовать заулное положение с помощью энтоиодина. Увлажнить режущей области с солевым раствором.
Закройте слой мускулатуры бегущим швом с помощью 8-0 шовная нить. Закройте слои кожи с помощью прерванных швов с 4-0 шовной нитью. Дезинфицировать хирургический разрез дважды энтоиодином.
Затем удалите йод с помощью 75%медицинского спирта. Аккуратно переверните мышь назад. Подкожно вводят 0,1 миллиграмма на килограмм массы бупренорфина и 0,4 миллилитров физиологического солевого раствора.
И покоим мышь на тепловой площадке, пока она не вернется в сознание. Положите мышь обратно в стерильную клетку, и внимательно следить за мышью для признаков боли в течение трех дней после операции, чтобы обеспечить его восстановление. Вторая часть: Индукция колит-ассоциированного колоректального рака с азоксиметаном, AOM, и Декстран Сульфат натрия, DSS, семь дней после аппендэктомии.
Оттепель один aliquot AOM и разбавить его до 1 миллиграмма на миллилитр с помощью 0,9% нормального солевого раствора. Весь процесс подготовки осуществляется в дымовой капот. Растворите четыре грамма порошка DSS в 200 миллилитров autoclaved раствор воды для подготовки 2%DSS.
Каждая клетка содержит пять мышей. Сделайте внутриперитонеальную инъекцию AOM с 0,01 миллилитра на грамм на мышь, основываясь на его весе. Замените автоматическую воду на 2%DSS в течение пяти дней.
Мышей будут кормить автоклавной водой в течение дополнительных двух циклов. Третья часть:Результаты. Результаты Flow и ELISA свидетельствуют об успешном удалении патча caecal.
Эта процедура может способствовать значительному сокращению IgA-специфических плазменных клеток, очевидное изменение секреторий IgA в толстой кишки, по сравнению с 3%DSS, который имеет высокий уровень смертности и значительное изменение веса из-за тяжелой кровавый стул, анус пролапс, и брюшной abcess. 2%DSS подходит для всего процесса для его высокой выживаемости почти до 80% и разумное изменение веса как в фиктивных и аппендэктомии групп. Как показано на этих изображениях, мы успешно индуцированных колит связанных колоректальных опухолей.
На изображениях окрашивания Н И Э черная стрелка указывает на слизистую язву, наконечник стрелы указывает на аденокарциному, а белая стрелка указывает на инфильтрацию нейтрофила между железами. Различные стадии аденокарциномы можно увидеть как в фиктивных, так и в аппендицитных группах. Эта экономически эффективная модель аппендэктомии Murine может быть использована для ответа на некоторые важные вопросы, такие как: какова роль приложения в регуляции кишечных бактерий и как он участвует в иммунном ответе в кишечнике связанных лимфоидной ткани.
Помните, что, чтобы избежать повреждений в адгезии кишечника, предварительное расположение caecum и небольшой разрез кожи имеют важное значение. Кроме того, мы использовали 2%DSS, чтобы вызвать колит. Но более высокая концентрация DSS может быть использована для других штаммов мышей.
