El protocolo general describe los procedimientos quirúrgicos fácilmente realizados para extraer el apéndice conocido como parche caecal en ratones. El modelo de apendicectomía murina se puede utilizar para estudiar las funciones biológicas del apéndice en la patogénesis de la enfermedad gastrointestinal humana. El apéndice humano es un órgano discutible.
Estudios recientes han sugerido que el apéndice juega un papel importante en el mantenimiento de la salud intestinal. Para estudiar la función biológica del apéndice, la generación de un modelo animal de apendicectomía asociada a la enfermedad es fundamental. En este protocolo, describiremos un simple y seguro pasos quirúrgicos para extraer el apéndice, conocido como parche caecal en ratones.
Para garantizar el éxito de este modelo, hay tres pasos clave como verá en el siguiente vídeo. Primero, localice el cecum de los ratones antes de la cirugía. Segundo, hacer una pequeña incisión en el abdomen.
Tercero, desinfectar y cerrar el muñón de cecum. La primera parte, la apendicectomía de ratones. Preparar instrumentos quirúrgicos estériles y soluciones de limpieza antes de la cirugía.
Anestesice y asegure el ratón en una plataforma en posición supina colocando cuatro tiras de cinta adhesiva médica a través de las extremidades para evitar el movimiento postural durante la cirugía. Toque suavemente todo el abdomen del ratón para encontrar la sensación de protuberancia. Cubra la cortina y desinfecte el área afeitada del abdomen del ratón lo más ancha posible usando dos veces de entoiodina.
Haga una incisión longitudinal que va de 0,5 centímetros a un centímetro en la línea media del abdomen. De acuerdo con la ubicación predeterminada del cecum, busque el caecum y exteriorícelo suavemente durante aproximadamente un centímetro de largo para identificar el parche caecal. Utilice una solución salina fisiológica precalentó y estéril para hidratar el intestino.
Para prevenir posibles complicaciones de sangrado e infección postoperatoria, ligar los vasos sanguíneos mesentéricos del cecum usando el 8-0 Sutura. Hidratar el cecum con la solución salina. Marque la región de resección usando la sutura 4-0 con bucle abierto cerca del ápice del cecum en el colon proximal.
Corte el parche cecal debajo de la resección marcada usando micro-tijeras y limpie el contenido calcáreo residual con hisopos de algodón medicinal. Desinfectar el muñón de cecum con entoiodina. Cierre el muñón con sutura en marcha utilizando el 8-0 Sutura.
Retire con cuidado el lazo de rosca 4-0, utilizado anteriormente para marcar la resección en el muñón de cecum. Esterilice la posición suturada usando entoiodina. Rehidratar la zona de corte con la solución salina.
Cierre la capa de musculatura con sutura corriente usando 8-0 hilo de sutura. Cierre las capas de la piel con suturas interrumpidas con rosca de sutura 4-0. Desinfectar el corte quirúrgico dos veces con entoiodina.
Luego, retire el yodo usando 75%alcohol médico. Gire suavemente el ratón hacia atrás. Inyectar por vía subcutánea 0,1 miligramos por kilogramo de peso corporal de buprenorfina y 0,4 mililitros de solución salina fisiológica.
Y apoya el ratón en la almohadilla de calor, hasta que vuelva a la conciencia. Vuelva a colocar el ratón en la jaula estéril y vigile de cerca el ratón para detectar los signos de dolor durante tres días después de la cirugía para asegurar su recuperación. La segunda parte:Inducción del cáncer colorrectal asociado a la colitis con azoximetano, AOM, y Sulfato de sodio Dextran, DSS, siete días después de la apendicectomía.
Descongelar una alícuota de AOM y diluirla a 1 miligramo por mililitro usando 0.9% de solución salina normal. Todo el proceso de preparación se lleva a cabo en la campana de humos. Disolver cuatro gramos de polvo DSS en 200 mililitros de agua autoclave para preparar 2%DSS.
Cada jaula contiene cinco ratones. Realizar una inyección intraperitoneal de AOM con 0,01 mililitros por gramo por ratón basándose en su peso. Sustituya el agua autoclavada por 2%DSS durante cinco días.
Los ratones serán alimentados con agua autoclavada durante dos ciclos adicionales. La tercera parte:Resultados. Los resultados de flujo y ELISA indican la eliminación exitosa del parche caecal.
Este procedimiento puede contribuir a la reducción significativa de las células plasmáticas específicas de IgA, un cambio obvio de IgA secretor en el intestino grueso, en comparación con 3%DSS, que tiene una alta tasa de mortalidad y un cambio de peso significativo debido a heces sangrantes graves, prolapso de ano y abcess abdominal. El 2%DSS es adecuado para todo el proceso por su alta tasa de supervivencia a casi 80%y un cambio de peso razonable en grupos falsos y de apendicectomía. Como se muestra en estas imágenes, hemos inducido con éxito los tumores colorrectales asociados a la colitis.
En las imágenes de tinción H&E, la flecha negra indica úlcera mucosa, la punta de flecha indica adenocarcinoma y una flecha blanca indica la infiltración de neutrófilos entre las glándulas. Se pueden observar diferentes etapas del adenocarcinoma tanto en grupos falsos como de apendicectomía. Este modelo de apendicectomía murina rentable se puede utilizar para responder a algunas preguntas importantes tales como: ¿cuál es el papel del apéndice en la regulación de las bacterias intestinales y cómo participa en la respuesta inmune en el tejido linfoide asociado al intestino.
Recuerde, para evitar el daño en la adhesión del intestino, la ubicación previa del cecum y la pequeña incisión de la piel son importantes. Además, usamos el 2%DSS para inducir colitis. Pero una mayor concentración de DSS se puede utilizar para otras cepas de ratones.
