Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы о механизмах заживления коло-колонических анастомозов, и может обеспечить модель для снижения уровня анастомотических утечек и их потенциально разрушительных последствий. Наша методика предлагает относительно простой и воспроизводимый метод выполнения коло-колонического или коло-ректального анатомоза в животной модели с аналогичными клиническими показателями утечек для пациентов. Начните с обеспечения конечностей обезболивающей мыши на хирургическую поверхность, и дезинфекции подвергаются живот с хлоргексидином.
Далее поместите стерильную драпировку над животным, и сделать разрез кожи вдоль средней линии нижней части живота к xiphoid. Используйте типсы, чтобы поднять середину брюшной стенки, и заботиться, чтобы не повредить внутрибрюшные структуры наклона длины средней линии брюшной фасции. Когда кишечник подвергаются, найти cecum и тонкой кишки, и повернуть левую сторону внутренности medially подвергать нисходящей и сигмоидной толстой кишки.
Затем накройте внутренности влажной стерильной марлей. Пальто тупой кончик зонда с смазкой желе, и тщательно заранее зонд в прямую кишку, чтобы помочь идентификации нисходящей сигмоидной толстой кишки. После того, как толстая кишка была выявлена, частично снять зонд, и использовать атрауматические миппы, чтобы мягко понять сигмоид толстой кишки превосходит тазового входе.
Используя острые микро ножницы, сделать разрез вдоль сигмоидной толстой кишки, перпендикулярно ткани кишечника, и расширение от 80 до 90% по всей ширине толстой кишки. Если мезентерический кровеносный сосуд поврежден в ходе висцерального вращения или колотомии, осторожно нанесите давление на зрение травмы на срок до двух минут. Для ремонта сигмоидной колотомии, используйте castroviejo иглы водителя и пять-шесть простых прервал восемь O неаспасываемых полипропиленовых стежков для ремонта колостомии.
Выполнение анатомоза на границе мезентерии и работа ваш путь на двусторонней основе к анти-мезентерии границы помогает обеспечить патент и не стеноз астомоз. По мере того как ремонт продолжается, предварительный trans-anal, тупой зонд вскрытия кончика для того чтобы span ремонт прежде чем начальные швы помещены для того чтобы помочь предотвратить слишком узкий ремонт, и уменьшить тарифы анастомотической stricture. Когда все швы были помещены, используйте 10 миллилитров шприц заполнены прогретым стерильным солевым раствором для орошения живота несколько раз.
Во время окончательного орошения заполнить живот стерильным солевым раствором, и тщательно заранее смазанной, 18 гейдж ангиокатетер в прямую кишку, чтобы надуть толстой кишки с 5 до одного кубического сантиметра воздуха, для выявления утечек в асатомоз. Затем поместите дополнительный шов для ремонта, и надуть толстой кишки снова, чтобы убедиться, что Есть нет утечек. Сдуть толстой кишки с ангиокатетером перед удалением, и осторожно вернуть медиализованные внутренности в нормальное анатомиическое положение.
Используйте четыре O абсорбируемые плетеные швы, чтобы закрыть разрез брюшной полости, с бегущим швом вдоль мышечного слоя брюшной стенки, начиная с верхней части разреза, и заканчивая в нижней части разреза. Затем используйте четыре O монофиламент шов, чтобы закрыть кожу, и контролировать мышь, пока он полностью оправился от анестезии. В соответствующей экспериментальной точке конца, стерилизовать живот с хлоргексидином и 70%этанола, и использовать острые ножницы, чтобы повторно наклонить оригинальный разрез средней линии.
Используйте ножницы, чтобы нарезать мышечный слой, и тщательно выполнять левый медиальный висцерального вращения подвергать отремонтированы сигмоидной толстой кишки. Определите прицел ремонта, найдя хвосты полипропиленового шва, используемого для ремонта. Аккуратно и прямо вскрыть любой кишечник к кишечнику спайки от вида ремонта, заботясь, чтобы не нарушить анатомоз.
Используйте маркировку пера, чтобы демаркировать антаймсэнтерической границы толстой кишки, до удаления сегмента толстой кишки. Далее, используйте ножницы, чтобы поперечно трансектировать через нисходящую толстую кишку, один сантиметр от пары, до одного сантиметра дистального от вида анатомоза. Послеоперационные ткани, как правило, чрезвычайно хрупкие и хирургические петли, а также мягкое и тщательное обращение с тканями, помогают обеспечить против нарушения хирургического анатомоза.
Используйте тонкие ножницы, чтобы резко вскрыть толстой кишки от прилагается мезентерии вдоль задней границы толстой кишки, чтобы удалить сигмоидный сегмент. И вырезать по длине мезентерической границы в продольной моды, чтобы создать прямоугольный участок толстой кишки из ранее удалены цилиндрической образца. И сделать продольный разрез по длине толстой кишки, напротив маркировки.
Затем исправить, imbed, и сократить образец ткани по мере необходимости для гистологии и / или иммуностимунинга. Гистологический анализ, через семь дней после травмы, показывает фиброзной реакции исцеления, при посредничестве гладкой мышцы альфа актин положительные миофибробласты. При попытке этой процедуры, важно помнить, чтобы выполнить тест на удушье с анатомозом погружен под нормальный солевой раствор, чтобы подтвердить проходимость анатомоза, и обеспечить, чтобы не утечка присутствует.
Эта процедура может быть выполнена на генетически модифицированных, или патогенных мышей с нарушениями заживления ран, таких как диабетические или иммуно подавленных мышей, чтобы ответить на дополнительные вопросы о факторах, которые способствуют анатомотической утечки. После этой процедуры, иммуногистохимия и клеточной культуры могут быть выполнены из анатомотической ткани собраны в определенные моменты времени после операции, чтобы обеспечить лучшее понимание клеток, участвующих, и их роль в процессе анастомотических исцеления. Не забывайте, что работа с Isoflurane может быть чрезвычайно опасной, и что меры предосторожности, такие как использование фильтрации углерода и вентиляции капюшоны всегда должны быть приняты при выполнении этой процедуры.
