Этот протокол исследует двухосные механические свойства репродуктивных органов, разъясляющие вклад гладких мышечных клеток и пассивной матрицы. Этот метод поддерживает геометрию органов и родных гладких мышечных клеток к матричным взаимодействиям, позволяя подвергать орган физиологического диапазона давления и осяных расширений. Изучение двухосной функции органа при физиологически релевантных нагрузках может помочь лучше понять этиологию репродуктивных патологий.
Биаксиально тестирование шейки матки и влагалища дает представление о области здоровья женщин и биомеханики. Аналогичные методы используются для изучения кровеносных сосудов, пищевода и толстой кишки. При работе с новым органом может потребоваться время, чтобы завершить технические детали, такие как, как лучше шва ткани или как определить разгруженную длину.
Чтобы собрать репродуктивную систему у экспериментального животного, поместите мышь на абсорбированную площадку под рассеченным микроскопом и используйте под углом пинцет и ножницы, чтобы поднять кожу вокруг живота. Сделайте первоначальный разрез у основания живота над лобковой кости достаточно мелкой, чтобы не проколоть стенку мышц живота и продолжить разрез выше к грудной клетке и глубоко через мышцы живота. После удаления поверхностного жира и тщательно резки лобкового симфиза, использовать прямые пинцеты, чтобы понять мочевой пузырь, чтобы создать напряжение и использовать тупое вскрытие, чтобы отделить окружающие ткани от влагалища.
Затем вырезать основание репродуктивной системы, чтобы удалить ткани из полости тела. После определения соответствующего размера канюли для собранной системы, смонтировать сторону шейки матки на силу предуцометра часть канкуляционного устройства и смонтировать противоположный конец органа на микрометровой части устройства. Затем затяните оба конца швами.
Чтобы найти выгруженную длину установленной ткани, сначала растяните орган так, чтобы стена не была в напряжении. Для влагалища, наблюдать канавки на стенке влагалища. Для шейки матки, вырезать непосредственно под чернилами точек, расположенных выше и ниже центральной отметки шейки матки.
Используйте калиперы для измерения длины системы от шва до шва и повышения давления системы миографов с нуля до 10 миллиметров ртути в одном миллиметре ртутного приращения. Давление, при котором орган больше не рухнул, может быть определено как самый большой скачок во внешнем диаметре при данном давлении. После записи давления и внешнего диаметра, обратите внимание на эти данные в качестве первой точки, в которой орган не рухнул и обнулить силу.
Чтобы найти экспериментальный растяжение in vivo, отрегулируйте орган к предполагаемой длине in vivo, находясь при выгруженном давлении, и нажмите кнопку, чтобы оценить значения давления по сравнению с значениями силы, начиная от выгруженного давления и до максимального давления. Затем нажмите кнопку "Остановитесь" и сохраните файл. Для предустановки диаметра давления установите давление до нуля миллиметров ртутного столба, длина до экспериментальной длины виво и градиент до 1,5 миллиметра ртути в секунду.
Вы запустите последовательность, которая принимает давление от нуля миллиметров ртути до максимального давления плюс выгруженное давление, удерживайте в течение 30 секунд и возвращается к нулю миллиметров ртути с дополнительным 30-секундным периодом удержания. После повторения этой последовательности в общей сложности пять циклов, нажмите кнопку остановки и сохранить файл. Для предварительного кондиционирования длины силы введите 1/3 максимального давления плюс выгруженное давление как для входного, так и для выходного давления и отрегулируйте орган до минус 2% от длины in vivo.
Нажмите кнопку "Начать и настроить длину до плюс 2%in vivo длины и обратно до минус 2% при скорости 10 микрометра в секунду. Повторите осяное расширение в общей сложности пять циклов, прежде чем нажать стоп и сохранить файл. Для проверки диаметра давления длины in vivo нажмите на старт и отрегулируйте орган по длине in vivo, установите давление до нуля миллиметров ртутного столба и установите градиент до 1,5 миллиметра ртути в секунду.
Увеличьте давление с нуля миллиметров ртути до максимального давления, прежде чем довести давление до нуля миллиметров ртути с 20-секундного периода удержания. Затем повторите тест в течение пяти циклов, прежде чем остановить систему и сохранить данные. Для силового испытания длины 1/3 максимального давления плюс выгруженного давления установите давление до 1/3 максимального давления плюс выгруженное давление и отрегулируйте орган до минус 2% от длины in vivo.
После нажатия начала, растянуть орган до плюс 2% от длины in vivo и обратно до минус 2% от длины in vivo со скоростью 10 микрометров в секунду. Затем повторите тест в общей сложности три цикла, прежде чем остановить систему и сохранить данные. После последнего теста удалите среду тестирования KRB и вымойте орган средой KRB, свободной от кальция.
После мытья инкубировать орган свежим раствором KRB без кальция, дополнили двумя миллимолярными EGTA в течение 30 минут, прежде чем заменить раствор для лечения свежим без кальция KRB. По завершении базального тонального испытания, для предварительной кондиционирования диаметра давления, нажмите кнопку запуска и установите давление до нуля миллиметров ртути, длина, как предполагаемая длина виво, и градиент до 1,5 миллиметра ртути в секунду. Начните работать последовательность, которая принимает давление от нуля миллиметров ртути до максимального давления и обратно до нуля миллиметров ртути.
Повторите этот процесс через пять циклов с 30-секундной времени удержания. Для предварительной кондиционирования длины силы отрегулируйте орган до длины in vivo и вручную введите выгруженное давление для обоих давлений. Нажмите на старт и установите градиент до 1,5 миллиметра ртутного столба и давление до 1/3 от максимума.
Растянуть орган до плюс 2%и обратно до минус 2%растянуть на 10 микрометров в секунду и повторить цикл в общей сложности пять раз. Для испытания диаметра давления, с органом на минус 2% от экспериментально определенной длины in vivo и давления на нулевом миллиметре ртути, щелкните старт и увеличьте давление от zero миллиметров ртути к максимальному давлению и назад к zero миллиметрам ртути. Держите ноль миллиметров ртутного шага в течение 20 секунд и повторите цикл пять раз.
Для проверки длины силы установите давление до номинального давления и отрегулируйте орган до минус 2% от длины in vivo. Растянуть орган до плюс 2% от длины in vivo и обратно до минус 2% от длины in vivo со скоростью 10 микрометров в секунду. После трех циклов сохраните данные и повторите испытание длины силы для 1/3 максимального давления, 2/3 максимального давления и при максимальном давлении.
Для успешного анализа механических свойств женских репродуктивных органов необходимо высаживать рога матки во влагалище без каких-либо дефектов. В зависимости от типа органа, размер канюлы будет меняться. Каннуляция должна быть выполнена таким образом, чтобы орган не может двигаться во время эксперимента, но без повреждения стенки органа во время процедуры.
Система миографа давления может быть использована для мониторинга различных аспектов органа, поскольку он проходит механическое тестирование и ультразвуковая система может быть использована для измерения толщины органов в разгруженном состоянии с и без базального тона. После механического тестирования тангентный модули может быть рассчитан для окружного и осяного направлений. Как базального тонального тестирования, так и пассивного тестирования дают ключевые механические свойства репродуктивного тракта с и без контрактильного вклада гладких мышечных клеток.
Масштабирование между органами требует нескольких корректировок протоколов, как шейка матки и влагалище опыт различных нагрузок in vivo. Это ключ к быстрому проведению вскрытия для поддержания жизнеспособности гладких мышечных клеток, но тщательно, чтобы не проколоть нужный орган. Открытие угловых экспериментов, измеряя остаточный штамм органа, может проводиться после механических процедур тестирования, а также различных гистологических и биохимических анализов.
После его разработки и исследования гладких мышечных клеток базального вклада, этот метод также позволяет оценить гладкую мышцу репродуктивной системы максимальной контрактильной реакции при физиологически релевантных нагрузок.
