이 프로토콜은 부드러운 근육 세포와 수동 매트릭스로부터의 기여를 해명하는 생식 기관의 양축 기계적 특성을 조사합니다. 이 기술은 장기 지오메트리와 네이티브 원활근육 세포를 유지하여 장기의 주관을 압력 및 축 확장의 생리적 범위로 허용하는 상호 작용을 허용합니다. 생리학적으로 관련된 하중하에서 장기 양축 기능을 조사하는 것은 생식 병리학의 병인학의 더 나은 이해에 도움이 될 수 있습니다.
자궁 경부와 질을 양축으로 테스트하면 여성의 건강과 생체 역학 분야에 대한 통찰력을 제공합니다. 유사한 방법은 혈관, 식도 및 대형 내장을 연구하기 위해 이용됩니다. 새로운 장기와 함께 작업 할 때, 조직을 가장 잘 봉합하는 방법 또는 언로드 된 길이를 결정하는 방법과 같은 기술적 세부 사항을 마무리하는 데 시간이 걸릴 수 있습니다.
실험동물로부터 생식 계통을 수집하려면 마우스를 해부된 현미경 아래에 흡수 패드에 놓고 각진 핀셋과 가위를 사용하여 복부 주위의 피부를 들어 올립니다. 복부 근육 벽을 뚫지 않을 정도로 얕은 음모 뼈 위의 복부의 기지에서 초기 절개를 하고 갈비뼈를 향해 절개를 계속하고 복부 근육을 통해 깊은 절개를 계속하십시오. 피상지방을 제거하고 음모 심칭을 조심스럽게 절단한 후, 직선 핀셋을 사용하여 방광을 파악하여 긴장을 일으키고 무딘 해부를 사용하여 주변 조직을 질에서 분리하십시오.
그런 다음 생식 시스템의 기초를 잘라 신체 구멍에서 조직을 제거합니다. 수확된 시스템에 적합한 크기 캐뉼라를 결정한 후, 캐뉼레이션 장치의 힘 트랜스듀서 부분에 자궁 경부 측을 장착하고 장치의 마이크로미터 부분에 기관의 반대쪽 끝을 장착한다. 그런 다음 양 끝을 봉합사로 조입니다.
장착 된 조직의 언로드 된 길이를 찾으려면 먼저 오르간을 스트레칭하여 벽이 긴장되지 않도록합니다. 질을 위해 질 벽에 있는 홈을 관찰하십시오. 자궁 경부의 경우 중앙 자궁 경부 마크 위와 아래에있는 잉크 점 바로 아래에 잘라냅니다.
캘리퍼를 사용하여 봉합사에서 봉합사까지 시스템의 길이를 측정하고 근사계 시스템의 압력을 1밀리미터 단위로 0에서 10밀리미터로 증가시면 됩니다. 장기가 더 이상 붕괴되지 않는 압력은 주어진 압력에서 외부 직경에서 가장 큰 점프로 결정될 수 있습니다. 압력과 외부 직경을 기록한 후, 이러한 데이터는 오르간이 붕괴되지 않고 힘이 0이 아니라는 첫 번째 지점으로 기록한다.
생체 내 스트레치에서 실험용 을 찾으려면 언로드 된 압력에서 예상 된 생체 내 길이로 기관을 조정하고 클릭 시작하여 언로드 된 압력에서 최대 압력에 이르기까지 압력 값에 대한 압력 대 힘 값을 평가하기 시작합니다. 그런 다음 중지를 클릭하고 파일을 저장합니다. 압력 직경 사전 컨디셔닝의 경우 압력을 0밀리미터의 수은, 생체 내 길이에 대한 길이, 그라데이션을 초당 1.5밀리미터의 수은으로 설정합니다.
수은의 0 밀리미터에서 최대 압력과 언로드 된 압력으로 압력을 받아 30 초 동안 유지하고 추가 30 초 홀드 기간으로 0 밀리미터의 수은으로 돌아오는 시퀀스를 실행합니다. 총 5주기동안 이 시퀀스를 반복한 후 중지를 클릭하고 파일을 저장합니다. 힘 길이 사전 컨디셔닝의 경우 최대 압력의 1/3과 유입구 및 출구 압력에 대한 언로드 된 압력을 입력하고 오르간을 생체 내 길이의 마이너스 2 %로 조정하십시오.
시작을 클릭하고 길이를 2%로 조정하고 초당 10마이크로미터로 영하 2%로 다시 내려감에 따라 다시 조정합니다. 중지를 클릭하고 파일을 저장하기 전에 총 5주기동안 축 확장을 반복합니다. 생체 내 길이의 압력 직경 테스트를 위해 장기를 생체 내 길이로 시작하고 조정하고 압력을 0밀리미터의 수은으로 설정하고 그라데이션을 초당 1.5 밀리미터의 수은으로 설정합니다.
압력을 0밀리미터에서 최대 압력으로 증가한 후 20초 홀드 기간동안 압력을 0밀리미터의 수은으로 되돌려 보도록 합니다. 그런 다음 시스템을 중지하고 데이터를 저장하기 전에 5 주기 동안 테스트를 반복합니다. 최대 압력의 1/3의 힘 길이 테스트와 언로드 된 압력의 압력은 최대 압력의 1/3과 언로드 된 압력과 언로드 된 압력을 설정하고 오르간을 생체 내 길이의 마이너스 2 %로 조정합니다.
시작을 클릭한 후, 장기를 10 마이크로미터의 비율로 생체 내 길이의 2%를 플러스하고 생체 내 길이의 마이너스 2%로 늘이십시오. 그런 다음 시스템을 중지하고 데이터를 저장하기 전에 총 세 주기동안 테스트를 반복합니다. 마지막 시험 후, KRB 테스트 매체를 제거하고 칼슘이없는 KRB 배지로 장기를 세척하십시오.
세척 후, 신선한 칼슘없는 KRB 용액으로 장기를 30 분 동안 보충한 신선한 칼슘없는 KRB 용액을 배양한 후 치료 용액을 신선한 칼슘없는 KRB로 대체하십시오. 기저 톤 테스트가 완료되면 압력 직경 사전 컨디셔닝을 위해 압력을 0밀리미터의 수은, 생체 내 길이로 추정되는 길이, 그라데이션을 초당 1.5밀리미터로 설정합니다. 수은의 0 밀리미터에서 최대 압력으로 압력을 가하고 수은의 0 밀리미터로 다시 걸리는 시퀀스를 실행하십시오.
30초 홀드 시간으로 5주기를 통해 이 프로세스를 반복합니다. 힘 길이 사전 컨디셔닝의 경우, 생체 내 길이로 기관을 조정하고 두 압력에 대해 언로드된 압력을 수동으로 입력합니다. 그라데이션을 시작과 1.5밀리미터의 수은으로 설정하고 압력을 최대 1/3으로 설정합니다.
장기를 2%까지 늘린 후 초당 10마이크로미터에서 마이너스 2%로 다시 내려가고 총 5회 동안 주기를 반복합니다. 압력 직경 테스트의 경우, 생체 내 길이와 0밀리미터의 수은압력에서 실험적으로 결정된 기관의 마이너스 2%를 사용하여, 수은의 0밀리미터에서 최대 압력으로 압력을 시작하고 증가시키고 수은의 0밀리미터로 증가시면 됩니다. 0밀리미터의 수은 단계를 20초 동안 길게 잡고 사이클을 5번 반복합니다.
힘 길이 테스트의 경우, 압력을 명목적 압력으로 설정하고 생체 내 길이의 마이너스 2 %로 기관을 조정합니다. 장기를 생체 내 길이의 2%까지 늘려 초당 10 마이크로미터의 비율로 생체 내 길이의 마이너스 2%로 되돌려 보간한다. 총 3사이클 후에 데이터를 저장하고 최대 압력의 1/3, 최대 압력의 2/3 및 최대 압력에 대한 힘 길이 테스트를 반복합니다.
여성 생식 기관의 기계적 특성에 대한 성공적인 분석을 위해, 어떤 결함없이 질에 자궁 뿔을 축출하는 것이 필수적이다. 장기 유형에 따라 캐뉼라 크기가 다릅니다. 수식은 장기가 실험 도중 움직일 수 없습니다 그러나 절차 도중 기관의 벽을 손상하지 않도록 수행되어야 합니다.
압력 근사계 시스템은 기계적 테스트를 거치면서 장기의 다양한 측면을 모니터링하는 데 사용할 수 있으며 초음파 시스템은 기저 톤유무드 상태에서 장기의 두께를 측정하는 데 사용될 수 있다. 기계적 테스트 후, 접선 계골계는 둘레 및 축 방향에 대해 계산될 수 있다. 기저 톤 테스트와 수동 테스트 모두 부드러운 근육 세포의 수축 기여없이 생식 기관의 주요 기계적 특성을 산출합니다.
자궁 경부와 질이 생체 내다른 부하를 경험하기 때문에 장기 사이의 확장은 프로토콜에 대한 몇 가지 조정이 필요합니다. 그것은 부드러운 근육 세포의 생존력을 유지 하지만 신중 하 게 원하는 장기를 펑크 하지 해 부를 수행 하는 열쇠. 장기의 잔류 균주를 측정하는 개방 각 실험은 다양한 조직학적 및 생화학적 분석을 비롯한 기계적 테스트 절차뿐만 아니라 기계적 테스트 절차 후에 수행될 수 있다.
원활한 근육 세포 기저 기여의 개발 및 조사 후,이 기술은 또한 생리학적으로 관련 부하에서 생식 시스템의 부드러운 근육 최대 수축 반응을 평가 할 수 있습니다.
