Метод облегчает измерение подтверждения белка и белковых взаимодействий. Буферный состав, чистота выборки и требования к концентрации белка являются гибкими, что позволяет методу решения сложных структурных проблем. Этот метод позволяет сдавить образцы в самых разнообразных буферных системах.
Используя наш метод дозиметрии, исследователи могут контролировать, насколько хорошо их реакции маркировки работают в режиме реального времени. Одним из применений этой технологии является разработка лекарств, поскольку она позволяет исследователям тестировать различные формулировки препарата и то, как они влияют на структуру белка. Подготовить оптическую скамейку FPOP.
Сначала включите лазер и установите лазер на внешний триггер, постоянную энергию и отсутствие замены газа. Когда лазер нагревается установить лазерную энергию на пульс от 80 до 120 миллиграммов на пульс и использовать бутан факел мягко сжигать полиимид кодирования капилляров на месте, на котором рядный дозиметр будет читать абсорбирующий сигнал на 265 нанометров после лазерного воздействия. Используйте без ворса протрите и метанол, чтобы аккуратно вытереть мусор из капилляра и поместить очищенный капилляр через лучевой путь лазера и в рядный дозиметр.
Нажмите на рычаг в верхней части inline дозиметра, чтобы открыть шарнир и удалить магнитные держатели. Поместите капилляр в машинный паз рядного дозиметра с помощью магнитных держателей, чтобы сохранить капилляр на месте и закрыть дозиметровый шарнир над капиллярным нажатием шарнира до тех пор, пока рычаг не запирается на месте. Нажмите кнопку запуска вспышки в программном обеспечении дозиметрии, чтобы начать стрельбу excimer лазера и установить заданную скорость повторения между 10 до 20 Герц в программном обеспечении дозиметрии с лазерной стрельбы двигаться моторизованной стадии через диапазон движения, гарантируя, что луч остается сосредоточенным на диафрагме и что силуэт капилляров можно наблюдать во всем.
Затем промыть капилляр с водой на 20 микролитров в минуту, по крайней мере одну минуту и нажмите стартовые данные плюс автоматический ноль в дозиметр программного обеспечения до нуля дозиметра в воду до начала сбора данных. Для выполнения эксперимента FPOP добавьте два микролитера перекиси водорода в 18 микролитров раствора FPOP и используйте пипетку, чтобы аккуратно смешать раствор, быстро соберите раствор на дне трубки центрифугой и немедленно используйте газовый жесткий шприц для загрузки раствора в шприц-насос. Нажмите стартовый насос и запустите данные в программном обеспечении дозиметра, чтобы начать поток на насосе шприца при соответствующей скорости потока и использовать стационарный дозиметр для мониторинга показаний аденина в режиме реального времени до тех пор, пока абсорбентный сигнал на 265 нанометров не стабилизирует сбор образца в контейнере для отходов.
Чтобы начать стрельбу лазером в заданной скорости повторения конце энергии нажмите кнопку запуска вспышки в программном обеспечении дозиметра и использовать стационарный дозиметр для мониторинга чтения аденина в режиме реального времени. Разница в абсорбансе на 265 нанометров с лазером и лазером на будет дельта абсорбентов на 265 нанометров чтения. Для обеспечения того, чтобы сопоставимые гидроксиловы радикалы доступны для реакции с белками в различных образцах.
Сравните дельта-абсорбенты на 265 нанометров чтения, полученные с inline дозиметра с желанием дельта абсорбентов на 265 нанометров чтения, полученные из предыдущих экспериментов или элементов управления. Если показания на нужном уровне собирают образец сразу после лазера или излучения в буфере затухления. Чтобы компенсировать эффективную радикальную дозу, чтобы уравнять показания поглощения изменить концентрацию перекиси водорода, изменить лазерную энергию на пульс или изменить фокусную плоскость фокусировки объектива, чтобы увеличить лазерную беглость.
Чтобы сделать более 10 милли абсорбянт изменения в дельта абсорбентов чтения римейк образца с более или менее перекиси водорода и повторного запуска образца, как попродемонстрировано. Чтобы внести небольшое изменение в показания абсорбирования в режиме реального времени, используйте 50-миллиметровую моторизованную ступень, чтобы отрегулировать положение фокусировки объектива, чтобы отрегулировать фокусную плоскость луча инцидента. Для измерения эффективного количества гидроксилового радикала, присутствуют в образце после лазерного излучения монитор аденин дельта абсорбентов на 265 нанометров в режиме реального времени с помощью inline УФ капиллярный детектор с помощью моторизованной стадии для регулировки положения объектива до дельты абсорбентов на 265 нанометров чтения равна желаемому чтению.
Сравнение тяжелого цепного пептидного следа биоаналога адилумумаба в фосфатном буфере и после нагрева при 55 градусах По Цельсию в течение одного часа показывает, что указанные пептидные области демонстрируют значительную защиту от растворителей при нагревании белка для формирования агрегатов. Использование рядного дозиметра в режиме реального времени для мониторинга разницы в адениных абсорбентах до и после лазера или излучения указывает на то, что сопоставимое изменение уровня адениных абсорбентов наблюдается в буфере МПС по сравнению с фосфатным буфером. В то время как среднее окисление пептидов ниже при наличии буфера МЭЗ по сравнению с фосфатным буфером.
Однако, как лазерная флюенс увеличивается, чтобы иметь равный аденин дозиметрия ответ средние значения окисления пептида почти то же самое после буфера FPOP и MES и фосфатного буфера. Как дозиметрия чтения зависит от концентрации перекиси лазерного гриппа, а также радикальные мусорщика. Позаботьтесь о том, чтобы дозиметрия ответила между выборочных опросов близко друг к другу.
Сайт направленного мутагенеза часто используется для зондирования сайтов, охраняемых в FPOP. Это позволяет исследователям определить, связаны ли изменения с Алистером. Этот метод облегчает сравнение белков в различных буферах или формулировках, что позволяет исследователям определить влияние различных добавок на подтверждение белка.
