Трансплантация сердца у мышей является ценной моделью для изучения аллоиммунной реакции Здесь мы представляем новую хирургическую технику гетеротопной абдоминальной трансплантации сердца у мышей. При традиционной трансплантации сердца мыши донорская аорта и реципиентная брюшная аорта анастомозируются. Легочная артерия анастомозируется к реципиенту нижней полой вены.
В этой новой мышиной трансплантации сердца. Донорская аорта анастомозируется к брюшной аорте реципиента, а донорская внутриторакальная нижняя полая вена анастомозируется к реципиенту нижней полой вене. Теперь приступаем к экспериментальной демонстрации.
После того, как мышь положите в коробку для ингаляции изофлурана и анестезии, взвесьте мышь. В соответствии с весом мыши, для введения внутрибрюшинной инъекции кетамина ксилазина ацепромацина для обезболивания мыши. Зафиксируйте и продезинфицируйте мышь на операционном столе, когда анестезия воздействовала.
Разрезать кожу от шеи до нижней части живота. Разрезают мышцы брюшной стенки и аккуратно удаляют внутренние органы влево. Далее обнажают нижнюю полую вену.
Медленно ввести 0,4 миллилитра раствора гепарина в нижнюю полую вену и подождать одну минуту, прежде чем вытащить иглу. Вытащите иглу и отрежьте ножницами как нижнюю полую вену, так и брюшную аорту, чтобы ускорить экссангинацию. Откройте грудную полость, выполнив U-образный разрез.
Полностью обнажить сердце, легкие и все кровеносные сосуды грудной клетки. Обнажают грудную аорту. Отрежьте половину просвета.
Вставьте оросительную трубку в отверстие грудной аорты. Перережьте легочную вену, чтобы облегчить орошение и дренаж. Вводят не менее двух миллиметров четырехградудного раствора HTK.
Сердце полностью перестает биться до тех пор, пока отток легочной вен не будет полностью очищен. Вытащите оросительную трубку и отсоедте грудину. Удалите тимус.
Слегка снимите жир вокруг дуги аорты. Обнажите и обжмуйте ствол легочной артерии швом 10 нулей. Отделите факт и соединительную ткань, прикрепленную на внутритораковую нижнюю полую вену Обнажают и обжигают верхнюю полую вену семью нулевым швом и разрезают ее за перевязкой.
Сделайте семь нулевых швов вокруг основания сердца под дугой аорты. Нижняя полая вена и обе ушные раковины, затем сжимают ветви легочной артерии и венозные сосуды легких. Переопределите дугу аорты как можно более дистально, но убедитесь, что у вас есть один прозрачный просвет без отверстий боковых ветвей.
Легочные сосуды под лигатурой и внутриторакозной нижней полой веной возле диафрагмы. Теперь удалите сердце из грудной клетки. Поместите сердце эксплантированного донора в 4-градусный холодный раствор HDK и временно сохранить.
Обязательно не продлевать время холодной ишемии дольше 60 минут. Теперь приступаем к демонстрации работы рецептора. Начальные этапы операции аналогичны тем, которые ранее были показаны для мыши-донора, включая анестезию и стерилизацию.
Кожа живота разрезана поперечно. После рассечения кишечника накройте органы брюшной полости влажной марлей с использованием физиологического раствора. Обнажите нижнюю полую вену и брюшную аорту и освободите их от окружающей жировой ткани.
При необходимости перекрывает или электрокаутеризует боковые ветви сосудов под почечные сосуды. Вставить первые микро гемостатические щипцы справа в верхнюю часть мозга и аорту под почечными сосудами. Вставляют второй микро гемостатический щипц справа в нижнюю часть мозга и аорту.
Существует более одного сантиметра как для аорты, так и для венозного пространства для анастомоза между двумя гемостатическими щипцами. Сделайте разрез в аорте, немного ближе к нижнему зажиму, чем к верхнему зажиму. Кроме того, вы можете использовать иглу 30G, чтобы сделать небольшое отверстие и открыть его микро ножницами.
Поместите сердце в брюшную полость. Аорта в зрении и полая вена на другой стороне и покрывают ее небольшой мокрой марлевой подушечкой. Адаптируйте и сшивайте донорскую аорту к аорте реципиента, начиная с каудально.
Сделайте узел и приступайте бегущим швом к верхней части этого разреза, примерно на четыре-пять швов. Затем переверните сердце вправо, снова накройте его и продолжайте шов с левой стороны до достижения каудального конца и завязывайте его. Используйте микронарезами, чтобы вырезать круглое отверстие на брюшной нижней полой вене реципиента, которое должно иметь тот же размер, что и внутриторакальный просвет нижней полой вены донора.
Разрез должен располагаться краниально к планируемому анастомозу аорты. Сделайте разрез вен больше, чем разрез аорты. Промывка внутритораковой нижней полой вены донора.
Пришить донору внутритораковую нижнюю полую вену к реципиенту полую вену, начиная с каудально. Завяжите узел и выполните бегущий шов до тех пор, пока не будет достигнута верхняя часть разреза. Наложим пять швов и продолжим шов слева.
Наконец, завяжите узел в хвостовом углу и аккуратно затяните. Будьте осторожны, чтобы не тянуть слишком туго. Укладывают небольшие части гемостатической губки вокруг вен и анастомоза аорты.
Снимите сначала нижние, а затем верхние микрохмостатические зажимы и промойте брюшную полость теплым 0,9% хлоридом натрия. Уберите гемостатическую губку. Наблюдайте за сердцебиением пересаженное сердце.
Если все будет правильно, сердце снова начнет сокращаться. Поместите кишечник обратно в брюшную полость и закройте ее четырьмя нулевым швами. Обеспечьте теплую и богатую кислородом среду для восстановления пересаженного мышей.
В нашей предыдущей исследовательской работе мы сообщали о сравнении в целом 40 случаев полой вены с полой веной по сравнению с 40 случаями традиционной процедуры анастомоза легочной артерии с полой веной. Время операции при анастомозе сосудов в группе от полой вены к полой вене было значительно короче по сравнению с обычной группой легочной артерии к полой вене. Хирургическая методика гетеротопной абдоминальной трансплантации сердца у мышей представляет собой стандартную модель для исследований в области трансплантационной иммунологии.
Этот новый метод реконструкции кровотока, представленный здесь, облегчает трансплантацию брюшного сердца у мышей. И это называется сопутствующим с уменьшением теплой ишемии и временем перебития привитого сердца, тем самым улучшая показатель успешности этой модели.
