Общая цель этой процедуры состоит в том, чтобы отделить фолликулярные клетки и ооциты в фолликулярной яичников зебры. Фолликулярный является основной единицей яичника, который состоит из ооцитов и окружающих фолликулярных клеток. Это широкий инструмент для отделения как фолликулярной клетки, так и внешних отсеков для хорошо исследовательской политики, включая первичный захват фолликулярной клетки и поднимается на экспрессию генов, все насыщения и экстракорпорального оплодотворения.
В последнее время зебрафиш стал мощной моделью Nissan, который изучает контроль уже развития. Здесь мы представляем простой метод, поэтому отделяет фолликулярные клетки и яйцеклетки фолликулярной зебры, которая будет способствовать исследованиям уже развития в Зебрафиш коммерческих, не масса или два отделяет о фолликулярные клетки и все стороны спинов используют пост, который имеет лабиринт, много времени и имел высокий ущерб снаружи. Здесь мы установили простой метод для двух отдельных отсеков, используя или часть стекла Tamela скорость под чистым рифом.
Наша область метро, как снаружи, так и фолликулярные клетки могут быть легко изготовлены путем ввода вытащил стеклянный капилляр. Во-первых, подготовить поэта стеклянной капиллярной. Ударь головку стеклянного капилляра по спиртовой горелке.
Используйте четыре стороны, чтобы растянуть стеклянный капилляр до диаметра рейв-карты. Во-вторых, desect, что переизбрать из взрослых самок рыб, изолировать яичников фолликулов из яичников. Наконец использовать опрошенных стеклянных капилляров отделить фолликулярные клетки и яйцеклетки от фолликулов яичников.
Подготовка стеклянный капилляр, острые контейнеры, достаточно резак, горелки алкоголя, и типсы. Заляй спиртовую горелку, возьми домой стакан капилляра и нагрейте один конец стеклянной капиллярной посуды на огне спиртовой горелки. Используйте типсы, чтобы держать другой конец стеклянной капиллярной, подчеркнуть стеклянный капилляр быстро и мягко.
Положите стеклянные отходы в контейнер с острыми. Используйте достаточно резак Гретч на бассейн со стеклом. Затем разорвать на типсы Аккуратно, чтобы сделать гладкое открытие порта взгляд быстро сжечь конец стеклянной капиллярной на горелку алкоголя несколько раз и руб открытый конец достаточно резак тщательно.
Возьмем, как аквариум из культивируемой системы водоснабжения. И теперь связи взрослых самок, поместив рыбу на ледяной воде, по крайней мере две-пять минут, пока рыба остановить движение Джилл. Вынешь рыбу из ледяной коробки и убери оставшееся тело водяной рыбы полотенцем, помещай рыбу на тарелку секции D с четырьмя наборами.
Рыбы были обезглавлены, обслуживая Spang аккорд, используя свои острые ножницы, чтобы обеспечить смерть. Используйте рассечение ножницами, чтобы сократить следующим образом. Рассекают от Хлои, разрезают на жабры вдоль средней линии живота, вырезают с берега Хлои, вырезают с переднего кончика на спинную сторону.
Аккуратно удаляют кожу и мышцы с одной стороны тела, обнажают внутренние органы и принимают здоровые целые яичники с четырьмя шагами. Яичники были аккуратно помещены сразу в 100 миллиметров в культуре, блюдо контейнер 60%L 50 медианы. Отправлено рассечение микроскопа с передаваемой световой оптикой на основе размера и морфологии фолликулов яичников разных стадий.
Изолировать эти фолликулы яичников вручную с помощью пива соперничают четыре набора. Соберите изолированные фолликулы яичников и поместите их в другое культурное блюдо, содержащее 60%L 50 средних, хорошие изолированные фолликулы яичников будут использоваться для разделения фолликулярных клеток и ооцитов. Затем установите устройство для разделения.
Используйте пластиковую трубку диаметром 30 сантиметров. Один конец соединен с одноми миллилитровым наконечником пипетки с фильтром. Другой конец связан с 200 микролитровый наконечник пипетки.
Под disecting микроскопом, используйте рот для того чтобы контролировать поток воздуха для того чтобы позволить неисправное идет двигать к бассеину с стеклянным капилляром после этого дует глупость идет вне от стеклянного капилляра. В ходе этого процесса фолликулярные клетки и ооциты фолликулов яичников могут быть разделены. Это процесс разделения зрелого сценического фолликула.
В процессе вдыхания слой фолликулярной клетки отделяется от яйцеклетки, делает после выдувания фолликулярную клетку и Ооцит может быть отделен. Это полный фолликул наземной стадии. Мы видим, что слой фолликулярной клетки отделяется от яйцеклетки.
Этот метод также может быть применен на ранней стадии фолликулов яичников. Это фолликул на средней стадии Latella Genesis. Это фолликул на ранней стадии Вателла Генезис.
Это фолликул на стадии предварительного Ваталлы Бытия. На этой картинке можно увидеть процесс разделения. Панель 1 показывает нетронутыми фолликула на полной выросли стадии панели.
Панель 2 показывает angulation этого фолликула в вытягиваное стеклянное капиллярное. Панель 3 показывает фолликулярный был выдувается из вытащил стекла капилляров. Панель 4 указывает на успешное разделение F оголглых Oocyte и фолликулярной клетки.
Даже этот метод, разделение фолликулярной клетки в Oocyte может быть выполнено на разных стадиях фолликулов. Исследуйте ли фолликулярные клетки были отделены от нетронутых фолликулов. Intact фолликула и отделяется Oocyte от различных стадий фолликулов от стадии BV до стадии FG были окрашены с DAPI.
Ядро фолликулярных клеток может быть окрашено DAPI. Синий сигнал DAPI наблюдался в нетронутых фолликулах, но не оголглых ооцитах на этих различных фолликулах стадии. Чтобы еще больше подтвердить четкое разделение, нетронутые фолликулы и разделенные ооциты потрошились в гистологические секции.
DAPI заявив результаты показали, что фолликулярные клетки были четко удалены и оголглые ооциты. Используя этот метод, оголенные ооциты, отделенные от полностью выращенных сценических фолликулов, были обнаружены для спонтанного созревания яйцеклеток. без какого-либо лечения после четырехчасовой инкубации.
После активации водой, эти созревают Oocytes может пройти полное расширение хориона. Этот результат указывает на низкий урон Ооцита с помощью этого метода. Таким образом, эта горчица может быть использована для получения оголенного яйцеклетки для изучения созревает рацион рыбы зебры.
Фолликулярный слой материала для фолликулов может быть удален капиллярной стеклянной трубкой. Они могут быть оплодотворены и переданы в стадии вылупления. Результаты показывают, что этот метод может быть использован для экстракорпорального оплодотворения в рыбе Зебра.
Мы описываем здесь новый метод для быстрого и легкого отделения фолликулярной клетки и яйцеклетки от фолликулов яичников рыбы зебры. Этот метод имеет ряд существенных преимуществ, отмененных методологий. Основная из них заключается в значительном увеличении простоты разделения, поскольку требуется только одно и внешнее манипулирование.
Повышенная легкость разделения увеличивает доступность этого метода для тех исследователей, не квалифицированных в микропересмешивании. Во-вторых, этот метод может быть использован для разделения фолликулярной клетки и яйцеклетки фолликулов яичников и ранних стадиях развития, в том числе П.В., EBV MV этапе, такое разделение не может быть выполнено на ранней стадии фолликула с использованием текущих методологий. В-третьих, этот новый метод приводит к меньшему повреждению ооцитов.
Огодные ооциты, разделенные этим методом, могут проходить созревание яйцеклеток и могут быть оплодотворены. Кроме того, этот метод может быть применен и в других рыб.
