Водоструйные инъекции активных компонентов, таких как жидкости, наночастицы, микрочастицы, инкапсулированные лекарства или даже живые клетки, могут применяться гораздо точнее по сравнению с инъекциями игл в различные ткани. Минимально инвазивные подходы требуют точной локализации препарата в заранее определенных слоях целевой ткани путем предварительного выбора давления инъекций. В настоящее время мы фокусируемся на клеточной терапии недержания мочи.
Однако эта методика уже была распространена на регенерацию инфицированной мышечной ткани после тяжелых инфарктов. В настоящее время методика может применяться только опытными исследователями или лицензированными врачами в доклинических исследованиях. Он не предназначен для использования в обычных лабораторных процедурах, поскольку он разработан для будущих клинических целей.
Для начала поместите уретру со соединительным мочевым пузырем, рассеченным от взрослой самки ландрасовой свиньи, на губку, которая имитирует эластичность нижнего тазового дна. Затем с помощью мочевого пузыря определяют ориентацию мочеиспускательного канала. Это возможно благодаря локализации мочеточника и трех связок, которые фиксируют мочевой пузырь в брюшной и тазовой полости.
После правильной ориентации уретры разрезайте ее продольно на спинной стороне с помощью катетера. После корректировки плотности клеток стромальных клеток, полученных из жировой ткани свиней, до 2,4 раз 10 до шестых клеток на миллилитр, маркируют клетки зеленым флуоресцентным мембранным проницаемым живым клеточным пятном, затем аспирируют клеточную суспензию шприцем и применяют цитоскопическую инъекционную иглу Уильямса. Затем либо удерживайте иглу над двумя миллилитрами питательной среды в 15-миллилитровой центрифугирующей трубке, либо вставьте иглу в открытую ткань уретры.
В обоих случаях вручную вводят 250 микролитров клеточной суспензии. Клетки, вводимые в трупную уретру из инъекционного купола. Соберите клетки, введенные в среду непосредственно путем центрифугирования.
Для клеток, введенных в трупную уретру, аспирируйте их из купола инъекции с помощью иглы 18 калибра, нанесенной на шприц. Перенесите аспирированные ячейки в центрифугированную трубку и гранулируйте их центрифугированием. Повторно суспендировать обе клеточные гранулы в четырех миллилитрах питательной среды.
Чтобы определить выход и жизнеспособность клеток, тщательно смешайте 20 клеточных суспензий с 20 микролитрами трипан-синего цвета. Затем заполните по 10 микролитров этой смеси в каждой камере гемоцитометра. Под микроскопом подсчитайте клетки во всех четырех угловых квадратах.
Подсчитайте незапятнанные белые клетки как жизнеспособные клетки, а синие окрашенные клетки как мертвые клетки, а затем рассчитайте количество клеток на миллилитр. Для инъекций с помощью струи воды отрегулируйте плотность стромальных клеток, полученных из жировой ткани свиней, в шесть раз от 10 до шестой клетки на миллилитр. Маркировка их, как было показано ранее, и заполнение клеточной суспензии в дозирующий блок безигольчатого гидроабразивного устройства.
Затем либо удерживайте инъекционную сопло вскоре над двумя миллилитрами питательной среды в 15-миллилитровой центрифугирующей трубке или вскоре над открытой тканью уретры. В обоих случаях вводят 100 микролитров клеточной суспензии. Используйте высокое давление для проникновения в ткани, а затем фазу низкого давления для инъекций клеток.
Клетки, вводимые в трупную уретру, образуют инъекционный купол. Собирайте клетки, вводимые в среду непосредственно путем центрифугирования. Для клеток, вводимых в трупную уретру, аспирируйте их из инъекционного купола.
Перенесите аспирированные ячейки в центрифугированную трубку и гранулируйте их с помощью центрифугирования, как показано ранее. После центрифугирования повторно суспендируют обе гранулы в четырех миллилитрах питательной среды. Семена клеток, извлекаемых после инъекций в тканевую культуру посуды с плотностью от пяти раз 10 до пятой клетки на чашку.
После трехчасовой инкубации при 37 градусах Цельсия и непосредственно перед измерением AFM замените питательную среду тремя миллилитрами среды L-15 Лейбовица без L-глутамина. Чтобы измерить эластичность отдельных клеток, визуально идентифицируйте одну клетку и ориентируйтесь на нее. Затем поместите компьютерную мышь в середину клетки и, чтобы повысить точность измерений, расположите наконечник AFM непосредственно над ядром клетки.
Далее сосредоточьтесь на консольном устройстве и переместите его на компьютерную мышь. Затем начните измерение с пробега и отмерьте не менее 50 ячеек. Используется параметр заданного значения, полученный при калибровке консольного аппарата и трижды измеряется одна ячейка.
Жизнеспособность клеток, доставленных через иглу Уильямса, была выше, чем инъекции водометом с использованием настроек E60-10. Биомеханическая оценка инъекций в улавливающей жидкости показала, что инъекции иглы Уильямса не показали существенной разницы в модулях упругости по сравнению с контрольной группой, в то время как инъекции струи воды значительно уменьшали клеточные модули упругости на 40-50% Аналогичным образом, в образцах трупной ткани уретры инъекции иглы Уильямса не дали существенной разницы в клеточных модулях упругости по сравнению с контрольной группой. Однако значительное снижение на 51% наблюдалось после водоструйных инъекций.
Нужно только убедиться, что инъекции иглы не полностью проникают в ткань, которая наносит травму. С водометом нужно только поместить устройство в правильное положение в области впрыска, в то время как остальное автоматически делается самим устройством. Поскольку водоструйное устройство было разработано для соответствия и установки в эндоскопические устройства, вы можете использовать водоструйные приложения для любого участка в организме, который может быть достигнут с помощью этих цистоскопических или эндоскопических технологий для регенерации тканей и выполнения восстановительных работ.
