Получение стромальных сосудистых фракций, или SVFs, из липоаспиратов требует пищеварения с коллагеназой, что увеличивает риск биологического заражения. Лучший способ получить SVF без коллагеназы должны быть разработаны. Эти методы позволяют нам получить SVF в своей родной внеклеточной матрицы через простой механический процесс.
Демонстрацией процедуры будет Сихан Чэнь, аспирант из нашей лаборатории. После получения образцов жира, передача липоаспиратов в одну 50 миллилитровую трубку, и позволяют собранного жира к равновесию в течение 10 минут. Далее, используйте широкий наконечник пипетки, чтобы вытащить жир из верхнего слоя трубки в новую трубку 50 миллилитров и спина вниз жира центрифугации.
Верхний слой в трубке является жировой фракцией Коулмана. Перенесите верхние 2/3 жира Коулмана в новую 15-миллилитровую трубку. Эта часть считается низким содержанием жира плотности.
Перенесите нижнюю треть жира Коулмана во вторую 15-миллилитровую трубку. Эта часть считается высокой плотности жира. Для получения внеклеточной матрицы стромального сосудистого фракционого геля из обезжиренного с низкой плотностью используйте два 20 миллилитровых шприца, соединенных женским с женским разъемом блокировки люэра с меж смещением 10 миллилитров жира низкой плотности.
Это ключевой шаг к уничтожению адипоцитов. Скорость и время, в течение которого выполняется интерсиринг, способствует качеству конечного продукта. После последней межсвещенной сессии соберите жир путем центрифугации и перенесите верхний слой масла в 15 миллилитровую трубку.
Затем перенесите липкий среднеклеточный матричный стромальный слой геля сосудистой фракции в новую 15-миллилитровую коническую трубку. Для получения внеклеточной матрицы стромального сосудистого фракционого геля из жира высокой плотности добавьте два миллилитров масляной фракции низкой плотности в пять миллилитров образца жира высокой плотности. Интершифт смешанный жир, как попродемонстрировано, пока flocculate наблюдается в эмульсии.
Соберите flocculate центрифугации и отбросить верхний слой масла. Затем соберите липкий средний слой и смешайте эту фракцию с низкой плотностью внеклеточной матрицы стромальной сосудистой фракции образца геля. После обработки жира Коулмана до внеклеточной матрицы стромального сосудистого фракционого геля объем выброшенного масла занимает 80% от конечного объема, и только 20% жировой ткани, сохранившейся под слоем масла, рассматривается как внеклеточный матричный стромальный сосудистый фракционый гель.
Внеклеточный матричный стромальный сосудистый фракционер имеет гладкую жидкостную текстуру, которая позволяет ему проходить через 27-го калибра тонкой иглы. Тем не менее, Coleman жир состоит из интегральной жировой структуры с большими волокнами, которые могут пройти только через 18 калибровочных канюли. На третий день после трансплантации появляется большое количество малоразмерных предадипоцитов с несколькими внутриклеточными липидными каплями, обширной хорошо васкуляризированной соединительной тканью и проникших воспалительных клеток.
Начиная с 15-го дня, количество воспалительных клеток начинает постепенно уменьшаться, и адипоциты начинают созревать. К 90-му дню большая часть васкуляризованной соединительной ткани в трансплантатах была заменена зрелыми адипоцитами. Внеклеточная матрица стромальной сосудистой фракции гель трансплантатов также содержат несколько перилипина положительные адипоциты через три дня после трансплантации, с небольшим размером предадипоцитов, с несколькими внутриклеточных липидных капель начинают появляться на 15-й день.
Каждое поле дня 90 внеклеточной матрицы стромальной сосудистой фракции гель трансплантата разделы проявляют многочисленные перилипина положительные адипоциты и вновь образованных кровеносных сосудов. Цитометрия потока может быть выполнена для определения клеточной популяции в продукте. А сканирование электронной микроскопии может быть выполнено для визуализации микроструктуры продукта.
Этот метод обеспечивает простой метод для хирургов и исследователей, чтобы получить продукт с высокой концентрацией клеток SVF с родными внеклеточных матричных волокон из жировой ткани.
