Gravação simultânea de Eletrorretinografia e potenciais evocados visuais em ratos anestesiados

Resumo

This protocol describes simultaneous measurement of electroretinogram and visual evoked potentials in anesthetized rats.

Resumo

The electroretinogram (ERG) and visual evoked potential (VEP) are commonly used to assess the integrity of the visual pathway. The ERG measures the electrical responses of the retina to light stimulation, while the VEP measures the corresponding functional integrity of the visual pathways from the retina to the primary visual cortex following the same light event. The ERG waveform can be broken down into components that reflect responses from different retinal neuronal and glial cell classes. The early components of the VEP waveform represent the integrity of the optic nerve and higher cortical centers. These recordings can be conducted in isolation or together, depending on the application. The methodology described in this paper allows simultaneous assessment of retinal and cortical visual evoked electrophysiology from both eyes and both hemispheres. This is a useful way to more comprehensively assess retinal function and the upstream effects that changes in retinal function can have on visual evoked cortical function.

Introdução

Medição do eletrorretinograma (ERG) e visual potencial evocado (VEP) fornecem avaliações quantitativas úteis da integridade da via visual. O ERG mede as respostas eléctricas do retina para a estimulação pela luz, enquanto o VEP mede a integridade funcional correspondente das vias visuais da retina para o córtex visual primário seguindo o mesmo evento de luz. Este manuscrito descreve um protocolo para a gravação e análise das respostas do ERG e VEP em um modelo de laboratório comumente usado, o rato.

O ERG fornece um índice da integridade funcional de um número de classes principais de células da retina quantificando resposta elétrica bruta da retina para um flash de luz. Uma série coordenada de fluxos iônicos iniciado pelo aparecimento de luz e compensar, produzir mudanças detectáveis ​​na tensão que pode ser medido por meio de eletrodos de superfície colocados fora do olho. A forma de onda resultante representa a combinação de um SEries de componentes bem definidas, diferindo na amplitude, tempo e frequência. Um corpo substancial de investigação tem demonstrado que estes componentes são relativamente bem conservada entre muitos retina de vertebrados e que os componentes podem ser separados uns dos outros. Ao seleccionar criteriosamente as condições de estímulo (stimulus flash, fundo, intervalo interstimulus) e escolher características específicas da forma de onda composta para analisar se pode ter a certeza de voltar uma medida de um grupo específico de células da retina ^1,2. Estas características são a base da utilidade e, portanto, as aplicações difundidas do ERG como uma medida não-invasiva da função retina. Este manuscrito incide sobre a metodologia para a medição do ERG e analisar suas características para retornar informações sobre alguns dos principais classes de células na retina, nomeadamente fotorreceptores (o componente PIII), células bipolares (o componente PII) e células ganglionares da retina (o positivo limiar de resposta escotópica ou pstr).

O VEP proporciona um ensaio da resposta cortical à luz; primeiro proveniente da retina e posteriormente comunicadas em série através do nervo óptico, trato óptico, tálamo (núcleo geniculado lateral, LGN) e radiação óptica para a área do córtex V1 ^3. Em roedores, a maioria (90-95%) de fibras do nervo óptico de cada olho decussate ⁴ e inervam o cérebro médio contralateral. Ao contrário do ERG, é como ainda não é possível atribuir diferentes componentes da VEP às classes de células específicas, ⁵ muda, assim, em qualquer lugar ao longo da via visual pode afetar a forma de onda VEP. No entanto, o VEP é uma medida não-invasivo útil do desempenho visual e integridade da via visual. A VEP, quando usado em conjunto com o ERG, pode proporcionar uma avaliação mais completa do sistema visual (ou seja, a retina / via visual).

registos de ERG e VEP pode ser realizada de forma isolada ou em combinação, dependendo da aplicação. A metodologia descrita neste artigo permite a avaliação simultânea de eletrofisiologia visual evocado retina e cortical de ambos os olhos e ambos os hemisférios em ratos anestesiados. Esta é uma maneira útil para avaliar de forma mais abrangente a função da retina e os efeitos a montante que as mudanças na função da retina pode ter em função cortical evocado visual.

Protocolo

Todos os procedimentos experimentais foram realizados de acordo com o Código australiano de Prática para o Cuidado e Utilização de animais para fins científicos, estabelecido pela National Health and Medical Research Council na Austrália. apuramento de Ética foi obtido a partir da Universidade de Melbourne, Faculdade de Ciências, Comitê de Ética Animal (número de aprovação 0.911.322,1).

1. Pré-implantação de VEP crônica Eletrodos

Nota: Se os sinais ERG e VEP simultâneos devem ser recolhidos os animais devem ser implantados cirurgicamente com VEP eléctrodos, pelo menos, uma semana antes para sinalizar coleção.

1. Esteriliza-se o banco cirúrgica antes da experimentação com a limpeza com cloro-hexidina (0,5% em 70% de etanol). Autoclave todo o equipamento cirúrgico antes do uso. Cobrir o animal com um campo cirúrgico esterilizado. Garantir que todos os experimentadores usar máscaras cirúrgicas, batas e luvas esterilizadas.
2. Induzir a anestesia com 3-3,5% de isoflurano com O ₂ a um caudal de 3 L / min. manter anesthesia a 1,5% e 2 L / min durante toda a cirurgia. Certifique-se suficiente profundidade da anestesia pela ausência do reflexo pata pitada.
3. Aplicar 1% de carboximetilcelulose de sódio sobre a córnea para evitar a secagem dos olhos.
4. Raspar uma área de 30 mm x 30 milímetros sobre a testa, posterior aos olhos e anterior para os ouvidos.
5. Coloque o animal em uma almofada de calor (37 ° C) para manter a temperatura corporal e estabilizar a cabeça dos animais com um quadro estereotáxico.
6. Desinfectar a área raspada com 10% de iodopovidona três vezes. Evitar o uso de anti-sépticos à base de álcool para a área perto do olho, sendo consistente com o padrão de prática estabelecidos pela Associação dos Tecnólogos cirúrgicos.
7. Faça uma incisão mediana sagital na cabeça com um bisturi e desta especiais de consumo um círculo de diâmetro ~ 20 mm de tecido dérmico para expor o osso craniano.
8. Remover periósteo subjacente por raspagem e secagem com gaze para expor as suturas cranianas coronal e sagital.
9. Nosing uma broca dentária ligado a uma broca, trepan dois orifícios (0,7 mm de diâmetro, a profundidade ~ 1 mm) através do crânio em ambos os hemisférios em coordenadas estereotáxicas: 7 milímetros caudal ao bregma, a 3 mm lateral à linha média.
10. Screw em parafusos de aço inoxidável (diâmetro 0,7 mm, comprimento 3 mm, esterilizado com clorexidina) nos dois orifícios pré-fabricados até uma profundidade de ~ 1 mm (dois milímetros do parafuso exposta) para permitir a ancoragem firme. Este contactos a dura sem danificar o tecido cortical subjacente.
11. Prepare a área cirúrgica para amálgama dental por secagem do osso craniano com gaze, e retrair a pele solta com dois 3-0 suturas em ~ 4 e 8 horas.
12. Espalhe amálgama dental sobre o crânio exposto para proteger os eléctrodos de parafuso (parafusos de aço inoxidável descrito na etapa 1.10) no lugar. Certifique-se de ~ 1,5 mm dos parafusos permanecem expostos para a gravação.
13. Retirar as suturas de retração.
14. Injectar 0,5% por via subcutânea carprofeno (5 mg / kg) para analgesia e soro fisiológico (cloreto de sódio a 0,9%, 10,5 ml) por via subcutânea para a reposição de líquidos.
15. Permitir animal recuperar em gaiolas separadas. Não deixe animais sem vigilância até que tenha recuperado a consciência suficiente para manter decúbito esternal.
16. Não devolva animal para a companhia de outros animais até que ele está totalmente recuperado de uma cirurgia (mínimo de 5 dias).
17. Continue a administrar por via subcutânea 0,5% carprofeno para analgesia (5 mg / kg) uma vez por dia durante 4 dias.
18. Grave ERG e VEP uma semana após a cirurgia.

2. ERG e VEP Recording

1. preparação de coleta de dados
   1. Use um software de computador para acionar simultaneamente estímulo e adquirir dados de ^{2 de} acordo com as configurações recomendadas abaixo.
      1. Amplificar os sinais ³ (ERG: × 1.000, VEP: x10,000) com o ganho ajustado internamente por um pré-amplificador e amplificador isolado, e com ambos os olhos pareados por impedância.
      2. Ajustar a taxa de amostragem para a ERG a 4 kHz através de uma 650ms janela de gravação (2.560 pontos), Para fazer isso, clique na guia de "base de tempo" no software de aquisição de dados (por nome e versão do software Tabela see de Materiais), selecione "2560" para as amostras, e "500 ms" para o tempo que irá retornar uma janela de gravação de 650 ms.
         1. Use o mesmo método para definir a taxa de amostragem para o VEP para 10 kHz durante um período ms 250. Permitir a 10 ms linha de base pré-estímulo para ambos os registos de ERG e VEP. Para fazer isso, clique na aba "Configuração"; selecione "estimulador" para abrir uma nova janela de diálogo; nessa janela, selecione "pulso" da lista de "Mode" para baixo; e defina o valor para "atraso" para "10 ms".
      3. Definir band-pass ERG filtrando a 0,3 - 1.000 Hz (- 3 dB). Isto é feito clicando "Bio amplificador" no software de aquisição de dados. Em seguida, defina o valor para "High Pass" para "0,3 Hz", eo valor para o "low pass" para "1 kHz".
      4. Usando o método acima referido em 2.1.1.3, definir as configurações passa-banda VEP para 0,1 - 100 Hz (- 3 dB), conforme recomendado pela Sociedade Internacional de Eletrofisiologia Visual Clínica (ISCEV) para gravações humana VEP ^6.
2. preparação eletrodo
   1. Costume de fazer os eletrodos ERG ativos / inativos e VEP ativos / inativos, anexando fio de prata ou de um jacaré para um cabo-eletrodo, respectivamente ^2. Comercialmente obter eletrodo terra.
   2. Para os 4 eletrodos feitos por medida, o corte do lado masculino da extensão cabo-eletrodo. Retirar 1 cm, o revestimento de isolamento exterior politetrafluoroetileno com uma lâmina de bisturi assegurando o fio interior não é danificado.
   3. Pré-forma, o ERG eléctrodos inactivos por corte de um comprimento de 70 milímetros de fio de prata (espessura de 0,3 milímetros) e formando um anel ~ 8 mm de diâmetro para rodear o olho de rato. Prepare um círculo uniforme por moldar o loop em um 1 ml ponta da pipeta.
   4. Pré-fashion VEP eletrodos inativos por cortar um comprimento de 70 milímetros de prata e formando uma elipse ~ 8 mm de diâmetro comprimento sábio possa se prender incisivos de ratos.
   5. Pré-forma os eléctrodos activos ERG por corte de um comprimento de 30 mm de fio de prata e que formam um laço pequeno para contactar suavemente a córnea de rato (~ 1-2 mm de diâmetro)
   6. Firmemente unir eletrodos (2 ERG ativo, 2 ERG inativo, 1 VEP inativo) para o cabo-eletrodo por entrelaçando a prata com o fio interno exposto.
   7. Isolar o excesso de metal exposto com fita adesiva para reduzir artefatos fotovoltaicos.
   8. Nos eletrodos inativos ERG furar um pequeno pedaço de prendedor de gancho e loop (~ 5 mm x 20 mm) para a fita adesiva para permitir fixação estável para a alça de roedor pescoço.
   9. Anexar jacaré para o fio interno do eletrodo leva para fazer os eletrodos ativos VEP.
   10. Antes de gravações, galvanizar as superfícies expostas dos fios de prata (isto é, o anel inactivo e ACTIve ponta) com cloreto de usar uma fonte de 9 V DC por 20 s para melhorar a condução do sinal.
       1. Para fazer isso, mergulhar a ponta do fio de prata do eléctrodo ERG (que actua como o ânodo de uma célula primária) em solução salina normal; ligar a outra extremidade do fio deste eléctrodo ao terminal positivo de uma bateria de 9 V.
       2. Conecte outro fio (o cátodo) ao terminal negativo da bateria, e mergulhar a outra extremidade em solução salina também. Desconectar após 20 segundos e observar a ponta da tira do fio eléctrodo ERG a ser revestido uniformemente na cor branca.
          Nota: Preparar novos eletrodos ERG para cada sessão experimental (~ até 8 horas) para garantir a permeabilidade do revestimento de cloreto.
3. preparação animal
   1. Dark-se adaptar os animais durante a noite (≥ 8 horas) antes da gravação em uma luz quarto apertado. Certifique-se de adaptação ao escuro máxima desligando luzes da sala, fechando todas as portas e persianas. Minimizar o vazamento de luz, colocando materiais à prova de luz ao redorjunções de portas / janelas e telas de computador colocação fora cortinas pretas grossas.
   2. Realizar preparação animal em um quarto escuro com a ajuda de dim vermelho light-emitting diode (LED; 17,4 cd.m ^-2, λ _max = 600 nm) para sustentar a sensibilidade rod.
   3. Anestesiar ratos por injecção de cetamina / xilazina (60: 5 mg / kg) por via intramuscular. Confirmar suficiente profundidade de anestesia pela ausência de um reflexo da pata pitada.
   4. Para manter a sedação, administrar uma dose adicional de anestesia (50% da dose inicial), após 50 minutos, se necessário.
   5. Para anestesia tópica adicional aplicar uma gota de 0,5% proxymetacaine para cada olho, e piscará o excesso de fluido.
   6. Para a dilatação da pupila aplicar uma gota de tropicamida 0,5% para cada olho, em seguida, secar o excesso de líquido.
4. ERG e VEP posicionamento dos eletrodos
   1. Coloque o animal na plataforma de ERG em frente da bacia Ganzfeld situado na gaiola de Faraday. Evite usar uma almofada de aquecimento eléctrico, uma vez que cum introduzir ruído eléctrico para as gravações eletrofisiológicas. Nota: A plataforma está ligado a uma plataforma de água aquecida circulado para manter a temperatura corporal.
   2. Seguro animal a plataforma com uma tira de fecho de gancho e laço colocado com firmeza, mas não firmemente em torno da nuca.
   3. Gancho o eletrodo VEP inativa ao redor incisivos inferiores do rato anestesiado.
   4. Posicione os eletrodos inativos ERG cercando o anel escleral não-invasiva em torno do equador do olho. Estabilizar esta anexando eléctrodos à tira de fecho de gancho e laço em torno da nuca. Repita o procedimento para o olho contralateral.
   5. Apertem VEP eletrodos ativos, anexando garras jacaré para parafusos de aço inoxidável pré-implantados no crânio.
   6. Colocar uma pequena gota de 1% de carboximetilcelulose de sódio em córnea antes da colocação do eléctrodo activo ERG para melhorar a qualidade do sinal. Nota: O fluido viscose também ajuda a manter a hidratação da córnea ao longo da experimentação a mini-mizar a formação de tipo dessecação de catarata em roedores ^7.
   7. Colocar uma pequena gota de 1% de carboximetilcelulose de sódio sobre os incisivos inferiores para melhorar o contacto do eléctrodo de VEP inactiva e, assim, a qualidade do sinal.
   8. Posicione os eletrodos ativos ERG para tocar levemente a superfície da córnea central utilizando um micromanipulador presa a um braço estereotáxico custom-built.
   9. Insira 2 - 5 mm de comprimento da agulha de eléctrodo de chão (aço inoxidável) subcutaneamente na cauda.
   10. Se necessário secar o excesso de fluido da pálpebra inferior antes de gravar para melhorar a qualidade do sinal.
   11. Deslize plataforma mais perto da bacia de Ganzfeld assegurando os olhos do animal alinhar com a abertura da taça para permitir uma iluminação uniforme de ambas as retinas (veja passo 2.4.1).
   12. Feche a gaiola de Faraday para reduzir ruídos estranhos.
5. Coleção de dados
   1. Use um teste-flash dim (- 0,52 log cd.sm ^-2) para avaliar se placem eletrodoent é satisfatória ^2. Sob condições de controlo isto resultaria em uma amplitude do ERG ~ de 800 mV e uma variabilidade inter-ocular que não seja maior do que 10%. Se eletrodos de reposição necessárias.
   2. Após o ensaio de-flash permitir aos animais dark-se adaptar para 10 min em completa escuridão antes da gravação.
   3. flashes presentes de estímulos de luz usando uma tigela Ganzfeld enquanto coleta ERG e VEP sinaliza simultaneamente durante um-janela de tempo ~ 500 ms. Progresso de dimmer para mais claro os níveis de luz, a fim de manter escuro-adaptação suficiente para formas de onda específicos.
   4. Recolhe sinais a uma variedade de energias luminosas para eliciar STR, b-ondas e uma forma de onda / onda b do ERG. Média de mais sinais nos níveis dimmer luz (20 repetições) e menos nas energias mais brilhante luminosos (1 repetição). Gradualmente aumentar o intervalo inter-estímulo 1-180 seg de dimmest para o nível de luz mais brilhante. Ver Tabela 1 para um exemplo de protocolo.
   5. para isotarde os bastonetes e cones respostas ERG, utilizar um paradigma-flash emparelhado ^8. Iniciado quatro flashes em 1,52 log cd.sm ^-2 com um intervalo de 500 ms inter-estímulo ² in-between. Subtrair digitalmente a forma de onda cone ^(3º ou ^4º flash) da forma de onda mista (1 flash de ^st) para obter a resposta de bastonetes putativo.
   6. Para gravar sinais VEP, média de 20 repetições para as energias mais brilhante luminosos (ou seja, - 0,52-1,52 log cd.sm ^-2, 5 seg intervalo inter-estímulo). Observe que o primeiro flash nesta seqüência retorna a resposta de adaptação ao escuro convencional ERG.
   7. Permitir 1-3 min para readaptação depois (20) varre VEP antes do mais brilhante próximo passo do ERG, dependendo da energia luminosa.
   8. Após a conclusão da recolha de dados, sacrificar o animal anestesiado com injecção intracardíaca de pentobarbital de sódio (325 mg / ml, 3 ml).

Forma de Onda	A energia da luz estímulo (cd.sm log -2)	Número de repetições	intervalo interstimulus (seg)
STR	-6,24	20	2
STR	-5,93	20	2
STR	-5.6	20	2
STR	-5,33	20	2
Rod b-ondas	-4,99	10	2
Rod b-ondas	-4,55	10	2
Rod b-ondas	-4,06	5	5
Rod b-ondas	-3,51	5	5
Rod b-ondas	-3,03	1	15
Rod b-ondas	-2.6	1	15
Rod b-ondas	-1,98	1	15
a- Mixed / b-ondas	-1.38	1	30
a- Mixed / b-ondas	-0,94	1	30
Flash 1: média de 20 /-ondas b a- misto: VEP	-0,52	20	5
			(90 segundos antes do próximo)
Flash 1: média de 20 /-ondas b a- misto: VEP	0,04	20	5
			(120 segundos antes do próximo)
Flash 1: média de 20 /-ondas b a- misto: VEP	0.58	20	5
			(180 seg antes do próximo)
Flash 1: média de 20 /-ondas b a- misto: VEP	1.2	20	5
			(180 seg antes do próximo)
Flash 1: média de 20 /-ondas b a- misto: VEP	1,52	20	5
			(180 seg antes do próximo)
Cone a- / b-ondas	1,52	4	0,5

Tabela 1. ERG e VEP Protocolo de gravação usando uma variedade de estímulo Energia. Apresentações de estímulo progresso de dim (superior) para (inferior) flashes luminosos, com suficiente intervalo inter-estímulos para garantir a adaptação escuro. No final do protocolo, a repetição de quatro pisca com curto intervalo de tempo é apresentada para induzir a resposta mediada cone.

3. Análise do ERG formas de onda

Nota: a análise do ERG e VEP foi descrito em pormenor anteriormente ^3,9,10 A.seções a seguir fornecem uma visão geral.

1. sinais de exportação em formato de tempo de tensão digital a um software de planilha para análise de dados.
2. função photoreceptoral Rod
   1. Modelar o bordo de ataque da onda de um PIII com uma gaussiana retardada (Equação 1) ^11.
      PIII (i, t) = Rm _PIII ∙ [1 - exp (- i ∙ S (t - t _d) ^2)] para t> t _d (Equação 1)
   2. Otimizar o ajuste sobre um conjunto de duas energias mais brilhante luminosos ^12,13 (ou seja, cd.sm 1,22 e 1,52 log ^-2).
   3. Modelo de até 90% da amplitude da onda a evitar intrusões pós-receptoral ^14.
      Nota: O modelo retorna a amplitude saturada (Rm _PIII, mV), sensibilidade (S, m ² .cd ^-1 .s ^-3) e de atraso (t _d, ms) da resposta photoreceptoral.
3. Rod funct célula bipolaríon
   1. subtrair digitalmente o modelo PIII (ver acima) a partir das formas de onda mistos para retornar o PII misturado com potenciais oscilatórios sobrepostas.
   2. Para extrair o PII haste do PII mista, digitalmente subtrair a resposta de cones ^(3º ou ^4º flash a 1,52 log cd.sm ^-2) do PII mista (1 flash de ^st em cd.sm 1,52 log ^-2).
   3. Em seguida, aplique um filtro passa-baixa para a forma de onda (46,9 Hz, -3 dB, a janela de Blackman) para remover potenciais oscilatórios. A forma de onda restante é a vara resposta PII ^10.
   4. Extrair a haste PII pico de amplitude e traçar-lo contra todas as intensidades de estímulo (abaixo de -2 PII log cd.sm ^-2 e haste isolado a 1,52 log cd.sm ^{-2) 10.}
   5. Modelar esses dados através de uma função hiperbólica (Equação 2), que fornece uma medida da integridade celular da retina interna.
      V _(i) = V _max (i ⁿ / (i ⁿK + ⁿ⁾⁾ (Equação 2)
      Nota: Esta equação retorna resposta PII máxima (V _max, mV), 1 / sensibilidade e a inclinação da função (n) ¹⁵ (k, cd.sm-2 log).
4. função da célula bipolar Cone
   Nota: Como a resposta cone é tomada em um único intensidade (1,52 log cd.sm ^-2) a amplitude e tempo são sintonizados neste nível de luz.
   1. Extraia cone máxima resposta PII ^2,16.
   2. Extraia tempo implícita ao qual esta resposta máxima corresponde ^2,16.
5. a função das células ganglionares
   1. À medida que a STR é um sinal pequeno, aplicar um filtro passa-baixa com 50 Hz notch a forma de onda para eliminar a alta frequência e ruído de linha (46,9 Hz, -3 dB, a janela de Blackman).
   2. Extraia resposta pstr máximo ^3,17.
   3. Extraia tempo implícita ao qual esta resposta máxima corresponde ^3,17.

4. Analise de VEP formas de onda

1. Extrair componentes máximas e mínimas do VEP (P1, N1 e P2). Para mais detalhes ver referências ^3,6.
2. Amplitudes Express como amplitudes vale e pico de seu pico anterior ou calha (P1N1 e N1P2) ^3,6.
3. Extraia o tempo implícito _(ele) para que isto corresponde resposta máxima _{(P1-lo, N1-lo, P2-lo)} ^3,6.

Resultados

O ERG uma onda (> -1,38 log cd.sm ^-2), b-ondas (> - 4,99 log cd.sm ^-2) STRs (<- 4,99 log cd.sm ^-2) e os PEVs (> - 0,52 cd.sm log ^-2) foram gravadas simultaneamente (Figura 1 e 3). No flashes muito fraca, a STR positivo (pstr) é visto em cerca de 110 milissegundos após o flash, e uma STR negativo (NSTR) a cerca de 220 ​​ms (Figuras 1 e 2). Um ERG com um grande da onda b, picos entre 50 a 100 ms...

Discussão

O ERG e VEP são medidas objetivas da função visual da retina eo córtex, respectivamente. A vantagem de gravação simultânea é que uma visão mais abrangente de toda a via visual é oferecida. Especificamente, as informações complementares na sua avaliação simultânea poderia fornecer uma definição mais clara do local da lesão na via visual (por exemplo, para distúrbios com sobreposição ERG ainda distinta VEP manifestações ^18, quando neuropatia óptica pode co-existir com atrofia ce...

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
Alligator clip	generic brand	HM3022	Stainless steel 26 mm clip for connecting VEP screw electrodes to cables
Bioamplifier	ADInstruments	ML 135	For amplifying ERG and VEP signals
Carboxymethylcellulose sodium 1.0%	Allergan	CAS 0009000-11-7	Viscous fluid for improving signal quality of the active ERG electrode
Carprofen 0.5%	Pfizer Animal Health Group	CAS 53716-49-7	Proprietary name: Rimadyl injectable (50 mg/mL). For post-surgery analgesia, diluted to 0.5% (5 mg/mL) in normal saline
Chlorhexadine 0.5%	Orion Laboratories	27411, 80085	For disinfecting surgical instruments
Circulating water bath	Lauda-Königshoffen	MGW Lauda	For maintaining body temperature of the anesthetized animal during surgery and electrophysiological recordings
Dental amalgam	DeguDent GmbH	64020024	For encasing the electrode-skull assembly to make it more robust
Dental burr	Storz Instruments, Bausch and Lomb	#E0824A	A miniature drill head of ~0.7mm diameter for making a small hole in the skull over each hemisphere to implant VEP screws
Drill	Bosch	Dremel 300 series	An automatic drill for trepanning
Electrode lead	Grass Telefactor	F-E2-30	Platinum cables for connecting silver wire electrodes to the amplifier
Faraday Cage	custom-made		Ensures light proof to maintain dark adaptation. Encloses the Ganzfeld setup to improve signal to noise ratio
Gauze swabs	Multigate Medical Products Pty Ltd	57-100B	For drying the surgical incision and exposed skull surface during surgery
Ganzfeld integrating sphere	Photometric Solutions International		Custom designed light stimulator: 36 mm diameter, 13 cm aperture size
Velcro	VELCRO Australia Pty Ltd	VELCRO Brand Reusable Wrap	Hook-and-loop fastener to secure the electrodes and the animal on the recording platform
Isoflurane 99.9%	Abbott Australasia Pty Ltd	CAS 26675-46-7	Proprietary Name: Isoflo(TM) Inhalation anaaesthetic. Pharmaceutical-grade inhalation anesthetic mixed with oxygen gas for VEP electrode implant surgery
Ketamine	Troy Laboratories	Ilium Ketamil	Proprietary name: Ketamil Injection, Brand: Ilium. Pharmaceutical-grade anesthetic for electrophysiological recording
Luxeon LEDs	Phillips Lighting Co.		For light stimulation twenty 5 watt and one 1 watt LEDs.
Micromanipulator	Harvard Apparatus	BS4 50-2625	Holds the ERG active electrode during recordings
Needle electrode	Grass Telefactor	F-E2-30	Subcutaneously inserted in the tail to serve as the ground electrode for both the ERG and VEP
Phenylephrine 2.5% minims	Bausch and Lomb	CAS 61-76-7	Instilled with Tropicamide to achieve maximal dilation for ERG recording
Povidone iodine 10%	Sanofi-Aventis	CAS 25655-41-8	Proprietory name: Betadine, Antiseptic to prepare the shaved skin for surgery 10%, 500 mL
Powerlab data acquisition system	ADInstruments	ML 785	Controls the LEDs
Proxymetacaine 0.5%	Alcon Laboratories	CAS 5875-06-9	For corneal anaesthesia during ERG recordings
Saline solution	Gelflex		Non-injectable, for electroplating silver wire electrodes
Scope Software	ADInstruments	version 3.7.6	Simultaneously triggers the stimulus via the Powerlab system and collects data
Silver (fine round wire)	A&E metal	0.3 mm	Used to make active and inactive ERG electrodes, and the inactive VEP electrode
Stainless streel screws	MicroFasterners		0.7 mm shaft diameter, 3 mm in length to be implanted over the primary visual cortex and serve as the active VEP electrodes
Stereotaxic frame	David Kopf	Model 900	A small animal stereotaxic instrument for locating the primary visual cortices according to Paxinos & Watson's 2007 rat brain atlas coordinates
Surgical blade	Swann-Morton Ltd.	0206	For incising the area of skin overlaying the primary visual cortex to implant the VEP electrodes
Suture	Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co.,Ltd		3-0 silk braided suture non-absorbable, for skin retraction during VEP electrode implantation surgery
Tobramycine eye ointment 0.3%	Alcon Laboratories	CAS 32986-56-4	Proprietary name: Tobrex. Prophylactic antibiotic ointment applied around the skin wound after surgery
Tropicamide 0.5%	Alcon Laboratories	CAS 1508-75-4	Proprietary name: 0.5% Mydriacyl eye drop, Instilled to achieve mydriasis for ERG recording
Xylazine	Troy Laboratories	Ilium Xylazil-100	Pharmaceutical-grade anesthetic for electrophysiological recording
Pipette tip	Eppendorf Pty Ltd	0030 073.169	Eppendorf epTIPS 100 - 5000 mL, for custom-made electrodes
Microsoft Office Excel	Microsoft	version 2010	spreadsheet software for data analysis
Lethabarb Euthanazia Injection	Virbac (Australia) Pty Ltd	LETHA450	325 mg/mL pentobarbital sodium for rapid euthanazia