JoVE Logo
Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Protokol
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Gua Sha, geleneksel Çin tedavi cilt kazıma, subkutan mikrovasküler kan ekstravazasyon neden olur. Biz, biyoparlaklık görüntüleme protokolü rapor HO-1 Lusiferaz Gua Sha heme upregüle göstermek için transgenik farelerin oksijenaz-1 çoklu organlarda (HO-1).

Özet

Gua Sha, deri, derialtı mikrovasküler kan ekstravazasyonu ve morluklar neden kazıma istihdam, geleneksel bir Çin halk tedavi. Bioluminescent optik görüntüleme için protokol HO-1-

Protokol

  1. Kadın HO-1-lusiferaz transgenik farelerin (4-6 hafta yaş), varışta Taconic Çiftlikler, Inc satın alınabilir, farelerin en az 4 gün konaklama izin için bir hayvan barınağı tesisini yerleştirilir .
  2. Biyoparlaklık görüntüleme için hazırlanması:
    1. HO-1, her bir fare tartılır. Hayvan ağırlığı luciferase dozu hesaplamak için gereklidir.
    2. Epilasyon, hayvan ya da geri karın ve / üzerinde saç çıkarıcı Nair ® uygulamak için bir pamuk takas kullanınız . 5 ila 10 saniye bekliyorum. , Saçları temizlemek için temiz bir pamuk takas kullanın. Temiz kalan saçları temizlemek için distile su bir doku parçası batırın.
    3. Arka plan gürültüsünü azaltmak için bir IVIS 100 istasyonun görüntüleme platformu olmayan bir floresan siyah kağıt (Strathmore Artagain ® siyah kağıt) yerleştirin.
    4. Luciferase (Xenogen Corporation'ın) konsantrasyonu 7.5 mg / ml (steril H 2 O çözünmüş) çözüm hazırlayın. Luciferase dozu 65.5 mg / kg vücut ağırlığı. Böylece, 20 gram fare 0,175 ml luciferase çözüm intraperitoneal gerektirir. Bunu başarmak için, luciferase çözümü (0.175ml) tek bir enjeksiyon hacmi 26-gauge iğne ile bir şırınga önceden yüklenmiş
  3. Gua Sha prosedürü: Gua Sha biyoparlaklık görüntüleme protokolü çalıştırmadan önce sadece bir kez uygulanır. Gua Sha ağrılı olmadığından, fare sakin izofluran kısaca anestezi ihtiyacı var. Gua Sha prosedürü aşağıdaki adımları içerir:
    1. Gua Sha Gua Sha prosedürü sırasında birkaç kez hedef deri bölgelerinde yağlamak için yemeklik yağ veya distile su uygulayın.
    2. Seramik bir çorba kaşığı veya bir plastik kaşık kullanarak nazik ama sağlam kuvvet fare arka arka arkaya saç serbest bölge kazımak.
    3. Kazıma arka deri kırmızı olana kadar devam eder, genellikle 2 ile 3 dakika içinde elde edilen deri altındaki kan ekstravazasyonu bir işaretidir.
  4. HO-1 upregülasyonu birkaç saat içinde yavaş yavaş inşa edilir gibi Biyoparlaklık görüntüleme Gua Sha hemen veya birkaç saat sonra başlamış olabilir. Biyoparlaklık görüntüleme için prosedür:
    1. Izofluran (% 1.5) ve tıbbi dereceli hava karışımı ile dolu bir anestezi indüksiyonu odasında fare anestezisi.
    2. Fare uyuşturulduktan sonra, IVIS 100 optik görüntüleme istasyonu görüntüleme odasına fareyi hareket ettirin. Fare (yukarı karın) supin pozisyonda yerleştirin. Görüntüleme odasının sürekli izofluran,% 1.5 ile demlenir. Görüntüleme platformu 37 ısıtılır ° C fare sıcak tutmak için.
    3. , "Orta binning" görüntüleme edinimi ve maruz kalma süresi 30 saniye olarak ayarlanır ayarlayın. Görüntüleri elde etmek için Başlat. Manüel ya da otomatik olarak görüntü alımı her üç dakikada bir tekrar makineye ayarlayın. Satın alınmasından sonra ilk görüntü, ilgi (ROI) bir bölge, karın, göğüs ve baş alanı kapsayacak şekilde çizilir. Bu yatırım getirisi daha sonra kopyalanmış ve "Yaşayan Görüntü ®", IVIS 100 istasyonu ile birlikte yazılım kullanarak aşağıdaki resimlere yapıştırılır.
    4. Saniyede fotonlar sinyal yoğunluğu ölçülür. Mark sinyal yoğunluğu doruk değere ulaşmak ve görüntüleme fare tepe süre sonra yaklaşık 5 ila 10 dakika devam.
    5. Supin pozisyonda görüntüleme edinimi tamamlandığında, fareyi ters çevirin ve yüzükoyun pozisyonda (yedeklemek) yatıyordu. Hayvan görüntüleme yazılımı "Yaşayan Görüntü ®" kullanımı sırt ve baş alanı kapsayacak şekilde çizilmiş ROI 5 ila 10 dakika devam edin. Supin pozisyonda sonra yüzükoyun pozisyonda görüntüleme seçimi keyfidir. Bir birincil ilgi organlara bağlı olarak, yüzükoyun pozisyonda başlatmak için seçebilirsiniz. Başka bir seçenek görüntünün ayrı deneyler ve yüzüstü yatar pozisyonlarda.
    6. Yüzükoyun pozisyonda görüntüleme satın alma işlemi tamamlandığında, izofluran kapatın ve görüntüleme odasının indüksiyon odasına kurtarmak için fareyi hareket ettirin. Indüksiyon odasına tıbbi sadece hava ve fare genellikle bir dakikadan daha az uyanıyor ile demlenir.
    7. Post-processing için görüntüleme verileri kaydetmek.
    8. Ilk Görüntüleme çalışmadan sonra ilave görüntüleme satın almalar Gua Sha sonra birkaç gün boyunca yapılır. Bir örnek program, 12. saat, 24. saat, 36. saat, 48. saat, 72. saat ve 120 inci saat görüntüleme tekrarlandı ama kesin görüntüleme programı esnek olmasıdır . Ek görüntüleme oturumları ise daha uzun bir izlem gereklidir eklenebilir. Görüntüleme önce, saç büyüdü saç kaldırma işlemi tekrarlayın.
  5. Kontrol grubu için, tüm prosedürü tekrarlayın ancak Gua Sha (adım 3) atlayın. Farelerin aynı grup kontrolü ve Gua Sha, kontrol exp için kullanılıreriment en az bir ay daha sonra tercihen Gua sha işlem öncesi yürütülen ya da olmalıdır.

Temsilcisi Sonuçlar:

Gua Sha yanıt HO-1 in vivo upregülasyonu biyoparlaklık görüntüleri Şekil 1 gösterisi. Şekil 2'de grafik aynı fare Gua Sha ile ilgili tüm vücut optik akı (fotonlar / sn), 120 saatten fazla nicel temporal değişiklik gösterir ...

figure-protocol-5239
Şekil 1 Soldan sırasıyla 18 saat, 36 saat ve 120 saat sonrası Gua Sha sağ ön Gua Sha önce aynı fare görünümünde (yatarak), temsili görüntü,. Gua Sha sonra, bir ilerleme, gastrointestinal sistem, genital sistem, karaciğer, böbrekler (arka görünümünde gösterilir), ve diğerleri bölgeleri kapsayacak birden fazla organlarda önemli bir sinyal yoğunluğu artış gözlemlemiştir. Lütfen buraya tıklayın Şekil 1'de bir büyük versiyonu için.

figure-protocol-5872
Şekil 2 Şekil 1 aynı fare Gua Sha, 120 saat boyunca izlenen tüm vücut akı nicel değişim (fotonlar / sn) . Lütfen Şekil 2'de büyük halini görmek için buraya tıklayın .

Tartışmalar

HO-1, heme oksijenaz indüklenebilir formu, Transkripsiyon heme, hidrojen peroksit, UV ışını, hipoksi ve fiziksel stresler de dahil olmak üzere birçok faktör tarafından upregüle. HO-1 biyoparlaklık protokolü gibi tüm vücut görüntülemesi çok organlarda sistemik HO-1 ekspresyonu hızlı bir anlık sağlar. Küçük hayvanlar, biyoparlaklık görüntüleme, yüksek hassasiyet in vivo sistemik gen ekspresyon değişiklikler gerçek zamanlı kantitatif uzunlamasına optik değerlendirme, gösterildiği gibi ...

Açıklamalar

The authors have nothing to disclose.

Teşekkürler

K. Wong, STC Wong Fonksiyonel ve Moleküler Görüntüleme Merkezi, Brigham ve Kadın hastaneye gelen fon tarafından desteklenen
K. Wong, STC Wong Biyoteknoloji ve Bilişim, Methodist Hastanesi Araştırma Enstitüsü, Weill Cornell Medical College Merkezi tarafından desteklenmektedir.
KK Kwong, I. Chen, JQ Ren Athinoula A. Martinos Merkezi Biyomedikal Görüntüleme, Massachusetts Genel Hastanesi fon tarafından desteklenmektedir.
Lenuta Kloetzer Braden Kuo nöroenterik Araştırma Merkezi, Massachusetts Genel Hastanesi fon tarafından desteklenen
Yazarlar Dr teşekkür. S. Zeng ve Optik Imaging Lab, Brigham ve Kadın Hastanesi, teknik yardım için X. Xu.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
LuciferinCaliper Life SciencesP/N 122796Previously Xenogen
IVIS 100Caliper Life SciencesPreviously Xenogen

Referanslar

  1. Zhang, W. Selection of potential therapeutics based on in vivo spatiotemporal transcription patterns of heme oxygenase-1. J Mol Med. 80, 655-6564 (2002).
  2. Zhang, W. Rapid in vivo functional analysis of transgenes in mice using whole body imaging of luciferase expression. Transgenic Res. 10, 423-434 (2001).
  3. Contag, C. H., Stevenson, D. K. In vivo patterns of heme oxygenase-1 transcription. J Perinatol. 21, 119-1124 (2001).
  4. Nielsen, A., Knoblauch, N. T., Dobos, G. J., Michalsen, A., Kaptchuk, T. J. The effect of Gua Sha treatment on the microcirculation of surface tissue: a pilot study in healthy subjects. Explore (NY). 3, 456-466 (2007).
  5. Schwickert, M. E., Saha, F. J., Braun, M., Dobos, G. J. Gua Sha for migraine in inpatient withdrawal therapy of headache due to medication overuse. Forsch Komplementmed. 14, 297-300 (2007).
  6. Tsai, P. S., Lee, P. H., Wang, M. Y. Demographics, training, and practice patterns of practitioners of folk medicine in Taiwan: a survey of the Taipei metropolitan area. J Altern Complement Med. 14, 1243-1248 (2008).
  7. Nielsen, A. Gua sha research and the language of integrative medicine. J Bodyw Mov Ther. 13, 63-72 (2009).
  8. Contag, C. H. Visualizing gene expression in living mammals using a bioluminescent reporter. Photochem Photobiol. 66, 523-531 (1997).
  9. Cui, K., Xu, X., Zhao, H., Wong, S. T. A quantitative study of factors affecting in vivo bioluminescence imaging. Luminescence. 23, 292-295 (2008).
  10. Shibahara, S., Yoshida, T., Kikuchi, G. Mechanism of increase of heme oxygenase activity induced by hemin in cultured pig alveolar macrophages. Arch Biochem Biophys. 197, 607-617 (1979).
  11. Lee, P. J. Hypoxia-inducible factor-1 mediates transcriptional activation of the heme oxygenase-1 gene in response to hypoxia. J Biol Chem. 272, 5375-5381 (1997).
  12. Maines, M. D. The heme oxygenase system: a regulator of second messenger gases. Annu Rev Pharmacol Toxicol. 37, 517-554 (1997).
  13. Wunder, C., Potter, R. F. The heme oxygenase system: its role in liver inflammation. Curr Drug Targets Cardiovasc Haematol Disord. 3, 199-208 (2003).
  14. Hoekstra, K. A., Godin, D. V., Cheng, K. M. Protective role of heme oxygenase in the blood vessel wall during atherogenesis. Biochem Cell Biol. 82, 351-359 (2004).
  15. Yang, N. C., Lu, L. H., Kao, Y. H., Chau, L. Y. Heme oxygenase-1 attenuates interleukin-1beta-induced nitric oxide synthase expression in vascular smooth muscle cells. J Biomed Sci. 11, 799-809 (2004).
  16. Morse, D., Choi, A. M. Heme oxygenase-1: from bench to bedside. Am J Respir Crit Care Med. 172, 660-670 (2005).
  17. Ryter, S. W. Protective functions of heme oxygenase-1 and carbon monoxide in the respiratory system. Antioxid Redox Signal. 9, 2157-2173 (2007).
  18. Wilson, K., Yu, J., Lee, A., Wu, J. C. In vitro and in vivo bioluminescence reporter gene imaging of human embryonic stem cells. J Vis Exp. , (2008).
  19. Calabrese, V. Vitagenes, dietary antioxidants and neuroprotection in neurodegenerative diseases. Front Biosci. 14, 376-397 (2009).
  20. Contag, P. R., Olomu, I. N., Stevenson, D. K., Contag, C. H. Bioluminescent indicators in living mammals. Nat Med. 4, 245-247 (1998).

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

T pSay 30Gua Shakan ekstravazasyonur klerhem oksijenaz 1gen ekspresyonusistem biyolojisik k hayvan molek ler g r nt lemeoptik ve bioluminesans g r nt lemeHO 1 lusiferaz transgenik farelerin Halk tedavisi

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır