Imagerie par bioluminescence de l'hème oxygénase-1 Régulation à la hausse dans la procédure de Gua Sha

Résumé

Gua Sha, traditionnelle chinoise grattant la peau thérapeutiques, les causes extravasation sous-cutanée de sang microvasculaires. Nous rapportons un protocole d'imagerie par bioluminescence de HO-1- Luciférase Souris transgéniques pour démontrer que Gua Sha régule l'hème oxygénase-1 (HO-1) dans de multiples organes.

Résumé

Gua Sha est une thérapie folklorique traditionnelle chinoise qui emploie la peau gratter pour provoquer extravasation sous-cutanée de sang microvasculaires et des contusions. Le protocole d'imagerie optique bioluminescents de HO-1-

Protocole

1. Femme HO-1-luciférase souris transgéniques (âge de 4-6 semaines) peuvent être achetés auprès de Taconic Farms, Inc À leur arrivée, les souris sont placées dans un établissement de logement des animaux pendant au moins 4 jours pour permettre l'hébergement.
2. Préparation pour l'imagerie par bioluminescence:
   1. Peser chaque souris HO-1. Poids de l'animal est nécessaire pour calculer le dosage de la luciférine.
   2. Épilation: Utiliser un coton pour appliquer les cheveux remover Nair ® sur l'abdomen et / ou au dos de l'animal. Attendre 5 à 10 secondes. Utilisez un coton propre pour essuyer les cheveux. Tremper un morceau de tissu dans de l'eau distillée pour nettoyer les cheveux restants.
   3. Placez un papier non fluorescent noir (Strathmore Artagain ® papier noir) sur la plate-forme d'imagerie IVIS d'un poste de 100 pour réduire le bruit de fond.
   4. Préparer luciférine (de Xenogen Corporation) solution à la concentration de 7,5 mg / ml (dissous dans H ₂ O stérile). La dose de luciférine est de 65,5 mg / kg. Ainsi, une souris de 20 grammes nécessite une injection intrapéritonéale de 0,175 ml luciférine solution. Pour y parvenir, un volume simple injection de luciférine solution (0.175ml) est préchargé d'une seringue avec une aiguille de calibre 26
3. Gua Sha procédure: Gua Sha est appliqué une seule fois avant l'exécution du protocole d'imagerie par bioluminescence. Depuis Gua Sha n'est pas douloureuse, la souris a seulement besoin d'être brièvement anesthésiés par l'isoflurane à rester calme. Gua Sha procédure comprend les étapes suivantes:
   1. Appliquer l'huile de cuisson ou de l'eau distillée pour lubrifier les zones ciblées par la peau Gua Sha à quelques reprises durant la procédure de Gua Sha.
   2. Répétitive grattez la région sans poils du dos de la souris en vigueur douce mais ferme à l'aide d'une cuillère à soupe en céramique ou une cuillère en plastique.
   3. Le raclage se poursuit jusqu'à ce que la peau du dos devient rouge, qui est un signe d'extravasation du sang sous-cutané, habituellement obtenue dans les 2 à 3 minutes.
4. L'imagerie par bioluminescence peut être lancé immédiatement ou plusieurs heures après que Gua Sha HO-1 régulation à la hausse se construit lentement au fil de quelques heures. La procédure pour l'imagerie par bioluminescence est la suivante:
   1. Anesthésier la souris dans une chambre de l'induction anesthésique rempli d'un mélange d'air de grade isoflurane (1,5%) et médicales.
   2. Une fois que la souris est anesthésiée, déplacez la souris à la chambre d'imagerie IVIS sur la station de 100 imagerie optique. Placez la souris en position couchée (abdomen vers le haut). La chambre de l'imagerie est continuellement infusé avec 1,5% d'isoflurane. La plate-forme d'imagerie est chauffé à 37 ° C pour garder la souris au chaud.
   3. Régler l'acquisition d'imagerie à «binning moyen» et le temps d'exposition mis à 30 secondes. Commencez à acquérir des images. Régler la machine à répéter l'acquisition d'imagerie toutes les trois minutes, soit manuellement ou automatiquement. Après l'acquisition de la première image, une région d'intérêt (ROI) est établi pour couvrir les abdominaux, la poitrine, et de la tête. Cette ROI est ensuite copié et collé à l'aide d'images suivantes "image vivante ®", le logiciel qui accompagne le IVIS 100 stations.
   4. L'intensité du signal est mesurée en photons par seconde. Temps de Mark pour l'intensité du signal pour atteindre sa valeur maximale et de garder à l'imagerie de la souris pendant environ 5 à 10 minutes après l'heure de pointe.
   5. Lorsque l'acquisition d'imagerie à la position couchée est fait, retournez la souris et déposez-le dans la position couchée (sauvegarder). Continuer d'imagerie de l'animal pendant 5 à 10 minutes avec le ROI désormais établi pour couvrir le dos et la zone de tête dans l'utilisation de "l'image vivante ®" du logiciel. Le choix de l'imagerie de la position couchée après la position couchée est arbitraire. On peut choisir de commencer par la position couchée, selon les principaux organes de l'intérêt. Une autre option est à l'image de la position couchée et sujettes à des expériences distinctes.
   6. Lorsque l'acquisition d'imagerie à la position couchée est terminée, éteignez l'isoflurane et déplacer la souris de la chambre de l'imagerie de la chambre de l'induction de récupérer. La chambre de l'induction est désormais imprégné de l'air médical uniquement et la souris se réveille souvent en moins d'une minute.
   7. Sauvegarder les données d'imagerie pour le post-traitement.
   8. Après l'étude d'imagerie initiale, des acquisitions d'imagerie complémentaires sont effectués pendant plusieurs jours après Gua Sha. Un exemple d'horaire est répété imagerie à l'heure 12 ^ème, 24 ^ème heure, 36 ^ème heure, 48 ^ème heure, 72 heures ^ème et 120 ^ème heure, mais le moment exact de l'horaire d'imagerie est flexible. Séances d'imagerie supplémentaires peuvent être ajoutés si un suivi plus long est nécessaire. Avant d'imagerie, répétez la procédure d'épiler si les cheveux ont repoussé.
5. Pour le groupe de contrôle, répéter toute la procédure mais sauter Gua Sha (étape 3). Si le même groupe de souris est utilisé à la fois pour le contrôle et Gua Sha, l'exp de contrôleeriment devrait être effectuée de préférence avant la procédure de Gua Sha ou au moins un mois après.

Les résultats représentatifs:

Les images de bioluminescence dans la figure 1 montre de régulation à la hausse in vivo de HO-1 en réponse à Gua Sha. Le graphique de la figure 2 montre l'évolution temporelle quantitative de plus de 120 heures dans le flux optique (photons / sec) de tout le corps de la même souris liées à Gua Sha ...

Figure 1. De gauche à droite, des images représentatives de la vue de face (décubitus dorsal) de la même souris, avant Gua Sha, à 18 heures, 36 heures et 120 heures après Gua Sha, respectivement. Après Gua Sha, on observe les progrès de l'augmentation de l'intensité du signal significatif dans plusieurs organes qui englobent les régions du tractus gastro-intestinal, le tractus génital, le foie, les reins (de la vue arrière, non représenté), et d'autres. S'il vous plaît cliquez ici pour une version agrandie de la figure 1.

Figure 2. Changement quantitatif des flux (photons / sec) de l'ensemble du corps suivi de plus de 120 heures suivant Gua Sha dans la même souris de la figure 1. S'il vous plaît cliquez ici pour voir une version agrandie de la figure 2.

Discussion

La transcription de HO-1, une forme inductible de l'hème oxygénase, est stimulée par de nombreux facteurs, y compris l'hème, le peroxyde d'hydrogène, irradiation UV, l'hypoxie, et contraintes physiques. L'imagerie du corps entier comme le rapport HO-1 du protocole bioluminescence fournit un aperçu rapide de HO-1 systémique d'expression dans de multiples organes. Dans les petits animaux, l'imagerie par bioluminescence permet à haute sensibilité in vivo en temps réel d'évaluation...

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
Luciferin	Caliper Life Sciences	P/N 122796	Previously Xenogen
IVIS 100	Caliper Life Sciences		Previously Xenogen