Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.
Kanıt yoktur birikmektedir, bu iskemik ön (PC) - beyne olmayan bir zarar iskemik meydan okuma - bir sonraki zarar iskemik hasara geçici bir koruma bahşeder. Biz C57Bl6 / J farelerde geçici fokal serebral iskemi (orta serebral arter tıkanıklığı, MCAO neden olduğu) için erken iskemik tolerans (IT) ikna etmek için bir ön hazırlık uyarıcı olarak ikili karotis arter tıkanıklığı (BCCAO) kurdu.
Kanıt yoktur birikmektedir, bu iskemik ön - beyne olmayan bir zarar iskemik meydan okuma - bir sonraki zarar iskemik hasara geçici bir koruma bahşeder. Biz C57Bl6 / J farelerde geçici fokal serebral iskemi için erken iskemik toleransı ikna etmek için bir ön hazırlık uyarıcı olarak ikili karotis arter tıkanıklığı kurduk. Bu videoda, bu çalışma için kullanılan metodolojiyi ortaya koyacak.
İskemik inme, yüksek mortalite ve büyük bir sosyo-ekonomik yükü 1 ile bir hastalıktır. Son yıllarda boyunca yoğun deneysel ve klinik bilimsel çabalarına rağmen, akut iskemik inme hastaları için tedavi seçenekleri 2 çok sınırlı kalır. Bunun aksine, gelişmiş ülkelerde yaşlı insanların yüzdesi artması önemli ölçüde önümüzdeki yıllarda 3 iskemik inme hastalarının insidansı ve prevalansı artacaktır. Bu nedenle, iskemik inmeli hastalarda yeni tedavi stratejileri için acil bir ihtiyaç vardır.
Bir yaklaşım bir zararlı uyaran ile başa çıkmak için beyin endojen adaptasyon mekanizmaları daha fazla anlayış kazandırmaktır. Bu, beyin türevli nöro da iskemik ön (PC) veya iskemik tolerans (IT) olarak bilinen ve beyne uygulanabilir olmayan bir zarar zararlı uyaran geçici bir direnç neden olan bir olgu, açıklamaktadırBir sonraki zararlı İşemi 4'e karşı. BT erken, PC sonra birkaç saat dakika içinde ortaya çıkar ve 4 meydana birkaç saat bir gecikme ihtiyacı olan, IT gecikmiş: BT iki farklı zaman pencere ortaya çıkar.
Şimdiye kadar, beyin BT araştırma BT gecikmeli odaklanmıştır. Daha az BT erken mekanizmaları tarafından bilinir. Bu çalışmanın amacı, yeterli bilgisayar uyarıcı olarak, BT gecikmiş endüklemek için kurulmuş bir uyarıcı teşvik etmektir ikili karotis arter tıkanıklığı (BCCAO) kurmaktır geçici fokal serebral iskemi (orta serebral arter tıkanıklığı ile oluşturulan, MCAO) BT erken C57Bl6 içinde / J fareler.
Her iki cerrahi işlemler sırasında (BCCAO ve MCAO), lazer Doppler flowmetre (LDF) tarafından serebral kan akımının izleme (CBF) yapıldı.
BCCAO anestezi ve kendiliğinden solunum farelerinde gerçekleştirilmiştir. Her iki karotis arter (CCA) maruz bırakıldıve 60 saniye boyunca tıkanır takılmasından sonraki 5 dakika izledi. Bu BCCAO / reperfüzyon dizisi iki kez tekrarlandı. Ameliyattan sonra, fare hızla iyileşti ve işlevsel bozulma belirtisi gösterdi. BCCAO protokol beyinde gecikmiş hücre ölümü neden yoktu yukarıda tarif, ekarte etmek için, biz bir de BCCAO sonra 72 saat boyama bir TdT-aracılı dUTP-biotin nick sonuna etiketleme (TUNEL) (veya sahte cerrahi) yapılan ayrı bir grup.
MCAO 5-7 kemirgenlerde fokal serebral iskemi indüksiyon için yaygın olarak kurulmuş bir modeldir. Cerrahi işlemler standart operasyon prosedürleri (SOP) 8 kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Sol CCA açığa sonra, silikon kaplı monofilament böylece anterior serebral arter (ACA) kadar Willis poligonu içine internal karotid arter (ICA) ile gelişmiş ve distal CCA, orta serebral arter kökeni (içine tanıtıldı MCA) zaman belirli bir süre için kapatıldı. Bu çalışmada,genellikle striatal ve kortikal beyin alanları içeren MCA topraklarında bir iskemik lezyon neden MCAO içinde kullanılan 45 dakika,.
Çalışmamızda, erken BT PC uyarıcı olarak BCCAO kullanarak zamansal profilini analiz. Bizim veri BCCAO ve MCAO arasındaki en uygun zaman gecikmesi BT 30 dk erken ikna etmek olduğunu, belirtti.
Bu videoda, ikimiz de cerrahi işlemler, yani BCCAO ve MCAO bir gösteri verecektir.
Bu makalede açıklanan tüm işlemler Landesamt für Gesundheit und Soziales, Berlin, Almanya kurallara ve yönetmeliklere uygun olarak yapıldı.
Ön cerrahi işlemler
1. Mono iplik hazırlanması
Yorum: İdeal olarak, sadece sterilize ya da en azından dezenfekte monofillerden cerrahi alanda kısırlık sağlamak için kullanılmalıdır. Monofillerden kalitesini 9 kötüleştirebilir çünkü Uygulamada, el yapımı monofilament sterilizasyon ve dezenfeksiyon çok zordur. Bu nedenle, bunun yerine ticari olarak temin edilebilen steril monofilamentler kullanmak tercih olabilir.
2. Cerrahi Aletler ve Hayvanlar hazırlanması
Cerrahi işlemler
3. LDF Probe ve LDF İzleme Konumlandırma
Yorum: çevresinde fareyi döndürürken, fiberoptik prob bu kafatası kırılır bu önlemek için dikkatle bükülmüş olmalıdır.
4. İkili Ortak Karotis Arter Tıkanıklığı
5. Orta Serebral Arter Tıkanıklığı
Yorum: kaudal yönde doğru döner hangi tespit edilmesi başka bir arter vardır. Bu değişken CCA çatallanma veya pr gelen ya kaynaklanan oksipital arter,ECA'nın oximal kısmı (Şekil 4).
6. BCCAO Sham Cerrahi
BCCAO sahte prosedürleri için, fareler gerçek BCCAO PC prosedür süresince anestezi vardı, tükürük bezleri harekete geçirildi ve CCA en maruz bırakıldı. Bu karotid arter veya vagal sinirler doğrudan manipülasyon sahte işlem sırasında kaçınılması çok önemlidir. CCA İşlemler endotel veya arteriyel lümen içinde yerel tromboz neden gelen vazoaktif bileşiklerin bir sürümü neden olabilir ki, onun endotel tabakası zarar verebilir. Bunun bir sonucu olarak, tromboembolik olaylar sahte ameliyat sonrası ortaya çıkabilir. Bu th önemli bir karıştırıcı faktör olacaktıre prosedürü. Öte yandan, vagal sinir manipülasyon önemli kardiyak aritmi ve hatta geri dönüşü olmayan kardiyak arrest oluşması için potansiyeline sahip parasempatik sinir sistemi, geçici veya kalıcı fonksiyon bozukluğuna yol açabilir. Bu nedenle, bu BCCAO sırasında vagus sinir herhangi bir manipülasyon önlemek için çok önemlidir.
Post-cerrahi
7. Hacim Ölçümü enfarkt
Infarkt boyutları değerlendirilmesi için, fareler MCAO sonra 72 saat hayatta. Daha sonra hayvanlar derin anestezi vardı, beyinleri çıkarıldı, infarkt hacim ölçümleri için hematoksilen (Papanicolau en protokolünü kullanarak) ile, metilbutan ek bileşenini dondurulmuş kesitli ve lekeli. Beyin bölümlerinde, bir görüntü analiz cihazı (MCID çekirdek 7.0 Rev.2.0, GE Healthcare Niagara Inc) kullanılarak belirlendi ve Lin ve arkadaşlarının yöntemine göre ödem için düzeltilir 600 mikron-aralıkları ve infarkt hacmi toplanmıştır. 7,11 destek.
8. Katılım Kriterleri
Biz üç BCCAO bölüm her sırasında fazla% 90 oranında bir LDF-ölçülen CBF azalma vardı sadece hayvanlar dahil. İdeal olarak, LDF izleme BCCAO sırasında her iki serebral hemisferde yapılmalıdır. Uygulanabilirliği için, sadece daha sonra MCAO tabi olacak sol hemisfer, LDF izleme yapılmaktadır. Bu yaklaşım, 6,12 daha önce tarif edilmiştir. Her BCCAO bölüm sonra reperfüzyon (bazal değerlere yani dönüş) tam olması gerekirdi. Süresi fareler anestezi altında tutuldu zaman azaltılması nedeniyle, MCAO ameliyat sırasında CBF takip etmedi. Ancak hayvanların ayrı bir grup ile bir pilot çalışmada, MCAO ameliyat sırasında LDF tarafından CBF izlenir. Farelerin Bu grupta, sürekli CCA tıkanıklığı önce başlangıca göre% 90 CBF bir azalma ölçülmüştür. Buna ek olarak, monofilamentlerin CBF çıkarılmasından sonra ilgili>% 90 geri kazanılabilirCCA tıkanıklığı sonra bazal değerleri. Bu LDF kriterleri tutarlı infarkt hacimleri 7 edebiyat ve sonucu kurulmuştur. Biz sadece en az MCAO sonra anestezi kurtarma sonra 1 bir Bederson skoru hayvanlar dahil. Ayrıca, MCAO ve sonra 72 saat için hayatta sadece hayvanların kafa içi kanama belirtisi alındı gösterdi.
Her iki CCA adlı (Şekil 1) tıkalı zaman bizim BCCAO protokolü (>% 90) acil ve derin CBF indirimleri sonuçlandı. CCA yeniden açılması LDF (Şekil 1) ile takip olarak reperfüzyon tamamlamak için yol var. PC sonra, hayvanlar fonksiyonel özürlülük belirtisi gösterdi. Ayrıca, mortalite yoktu. TUNEL boyama hayvan ayrı bir grup içinde BCCAO sonra 72 saat yapılan BCCAO (veriler gösterilmemiştir) sonra beyinde gecikmiş hücre ölümü belirtisi gösterdi.
Bizim çalışmamızda, BCCAO üç dizileri, her bir dakika süren ve beş dakika boyunca reperfüzyon ile, daha erken teşvik etmek için yeterli bir iskemik bilgisayar uyarıcı olduğunu göstermiştir.
Ayrıca, kullanılan ön hazırlık protokolü kayda değer bir postoperatif morbidite ile güvenli ve küçük invazif bir yöntem, beyin apoptoz ve mortalite belirtisi olduğunu göstermiştir. Birkaç farklı ön koşullandırma protokol daha önce 6-7,12 tarif edilmiştir. D...
Biz ifşa hiçbir şey yok.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Name of the instrument | Company | Catalogue number/model | |
Binocular surgical microscope | Zeiss | Stemi 2000 C | |
Light source for microscope | Zeiss | SteREO CL 1500 ECO | |
Heating pad with rectal probe | FST | 21061-10 | |
Stereotactic frame | David Kopf | Model 930 | |
Scissors | FST | 91460-11 | |
Dumont forceps #5 | FST | 11251-10 | |
Dumont forceps #7 | FST | 11271-30 | |
Mircovascular clamp | FST | 00398-02 | |
Clamp applicator | FST | 00072-14 | |
Springscissors | FST | 15372-62 | |
Needle holder | FST | 12010-14 | |
Needles | Feuerstein, Suprama | BER 562-20 | |
5-0 silk suture | Feuerstein, Suprama | ||
7-0 silk suture | Feuerstein,Suprama | ||
8-0 silk suture | Feuerstein, Suprama |
Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi
Izin talebiThis article has been published
Video Coming Soon
JoVE Hakkında
Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır