Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

İmplant ile ilişkili enfeksiyonu önemli bir klinik komplikasyondur. Bu çalışma, implant ile ilişkili enfeksiyonların önlenmesi için trombosit açısından zengin plazma (PRP) kullanarak bir yaklaşım açıklar, sabit trombosit konsantrasyonu ile PRP hazırlama protokolü sunar ve PRP yeni tespit antimikrobiyal özellikleri ve bu antimikrobiyal özelliklerinin incelenmesi için ilgili protokoller raporları In vitro.

Özet

İmplant ile ilişkili enfeksiyon antibiyotik direnci, hayvanlar ve insanlar arasındaki antibiyotik dirençli bakteri iletim ve enfeksiyonların tedavisinde yüksek maliyeti artan nedeniyle daha fazla ve sağlık sektöründe daha zorlu dünya haline geliyor.

Bu çalışmada, trombosit açısından zengin plazma (PRP) potansiyel antimikrobiyal özellikleri esas implant ile ilişkili enfeksiyonu önlemede etkili olabilir, yeni bir strateji ifşa. Şifa teşvik etmek için onun iyi araştırılan özellikleri nedeniyle, PRP (biyolojik bir ürün) giderek ortopedik ameliyatlar, periodontal ve oral cerrahi, maksillofasiyal cerrahi, plastik cerrahi, spor hekimliği, vb dahil olmak üzere klinik uygulamalar için kullanılır olmuştur

PRP implant ile ilişkili enfeksiyonların önlenmesinde konvansiyonel antibiyotik tedavileri için gelişmiş bir alternatif olabilir. PRP kullanımı geleneksel antibiyotik tedavisi si ile karşılaştırıldığında avantajlı olabilirPRP antibiyotik direnci indüklediği ve PRP antimikrobiyal ve şifa teşvik edici özelliklerine enfeksiyon önleme üzerinde sinerjik bir etkiye sahip olabilir olasılığı düşüktür nce. Biliyorsunuz patojenler ve insan hücreleri implant yüzeyleri için yarış olduğu bilinen ve teşvik şifa PRP özelliklerini böylece enfeksiyon oran azaltarak insan hücresi eki artırabilirsiniz. Buna ek olarak, doğal olarak PRP biyo-uyumlu, güvenli ve bulaşıcı hastalıkların risk içermez.

Bizim araştırma için, yaygın ortopedik enfeksiyonları bulunan ve PRP bu bakterilere karşı in vitro antimikrobiyal özellikleri olup olmadığını incelenerek çeşitli klinik suşların seçtiniz. Biz aynı trombosit konsantrasyonu tüm örnekler için elde edilmesine olanak tanıyan iki santrifüj yaklaşım kullanarak PRP hazırladık. Biz tutarlı antimikrobiyal bulgulara ulaşılmıştır ve PRP Methi gibi bakterilere karşı in vitro antimikrobiyal özellikleri güçlü olduğunu buldukcillin duyarlı ve metisiline dirençli Staphylococcus aureus, Grup A Streptokok, ve Neisseria gonorrhoeae. Bu nedenle, TZP kullanımı enfeksiyonu önlemek ve implant ile ilişkili enfeksiyonların masraflı post-operatif tedavi ihtiyacını azaltmak için potansiyeli olabilir.

Giriş

İmplant ile ilişkili enfeksiyonu önemli bir klinik komplikasyondur. Staphylococcus aureus (S. aureus) implant ile ilişkili enfeksiyonlar en sık izole edilen mikroorganizmalar biridir. Bu implantların yüzeyleri kaplar ve antibiyotiğe dirençli enfeksiyon 1,2 varabiliyor biyofilm üretme kapasitesine sahiptir. Implant ilişkili enfeksiyon tedavisi sık tekrarlanan debridman ve uzun süreli parenteral antibiyotik tedavisi için uzun süreli yatış gerektirir. Antibiyotik dirençli durumlarda, implantın çıkartılması gerekli olabilir. Bakterilerin antibiyotik yükselen direniş aynı zamanda Hastalık Kontrol ve Önleme (CDC) Merkezleri tarafından anılır olmuştur "dünyanın en acil sağlık sorunlarından biridir." Zaman içinde, yeni ve etkili antimikrobiyal tedavilerin geliştirilmesi olmaksızın, çoklu ilaca dirençli patojenler geleneksel antibiyotiklerle tedavi edilemez olacağı mümkündür. Implant ilişkili Önlenmesienfeksiyon önemlidir ve yeni yaklaşımlar profilaktik ajanlar ya da bu gibi enfeksiyonların önlenmesi için gereklidir.

Trombosit zengin plazma (TZP), kemik ve kemik grefti iyileşmesi 3-5 ile yardımcı olabilir 30'dan fazla büyüme faktörleri içeren otolog kan konsantrasyonu. Kemik rejenerasyonu ve yumuşak doku olgunlaşmasını artırmak için PRP uygulama giderek çünkü trombositler tarafından yayımlanan çeşitli büyüme faktörleri, yüksek konsantrasyonu kliniklerinde rapor edilmiştir.

PRP Çeşitli özellikleri PRP de antimikrobiyal özellikleri 6-9 olabileceğini gösteriyor. PRP trombosit çok sayıda, lökositlerin yüksek bir konsantrasyonda (bakterilere ve mantarlara karşı host defense etkilere sahip olabilir), ve birden fazla antimikrobiyal peptitler 7,8,10 içerir. Kardiyak cerrahi hastalarında büyük bir kohort bir çalışmada, bu ortaya çıktı bu yaranın kapanması anlaml sırasında TZP-jel intraoperatif kullanımınıicantly yüzeyel ve derin sternum enfeksiyonu 11 insidansı azalmıştır. Bu nedenlerle ve gözlemler için, PRP, onun iyi çalışılmış şifa arttırıcı özellikleri yanında, antimikrobiyal özelliklere sahip olduğu varsayıldı. Enfeksiyonu önlemek için TZP kullanmanın potansiyel avantajları şunlardır: (i) PRP konvansiyonel antibiyotik tedavilere kıyasla direnç indükleme olasılığı düşüktür. PRP şifa destekleyici özellikleri patojenler ve insan hücreleri implant yüzeyleri 12 yarış olarak böylece enfeksiyon oran azaltarak bakteriyel eki önlemek için sızdırmazlık sağlayabilir, (ii) PRP de enfeksiyon önleme üzerinde sinerjik bir etkiye sahip olabilir iyileşmesine katkıda özelliklere sahiptir , 13. (Iii) PRP doğal biyouyumlu ve güvenli ve bulaşıcı hastalıkların riski içermez.

Bizim uzun vadeli hedefi implant ile ilişkili enfeksiyonu önlemek için yeni bir yaklaşım olarak PRP kullanmaktırons. Bu çalışmanın amacı, in vitro antimikrobiyal özelliklerde PRP incelemek için, bir iki defa santrifüj yaklaşım kullanılarak PRP hazırlamak için, ve bu gibi antimikrobiyal özelliklerini değerlendirmek için protokoller tanımlanmasıdır.

Protokol

1. Hazırlanması ve PRP Etkinleştirme

1.1 Kan beraberlik

  1. Izofluran inhalasyonu (indüksiyon için O 2% 2 ve idamesi için% 1) ile tavşan uyuştur.
  2. 20 ml'lik bir enjektöre 2 ml 0.129 M tri-sodyum sitrat (bir anticoagulent çözüm) çizin. Tri-sodyum sitrat solüsyonu 50 ml damıtılmış H2O içinde 1.897 g tri-sodyum sitrat çözücü ve bir 0.22 um filtre ile steril filtre edilerek hazırlanır.
  3. % 70 etanol kullanılarak tavşan kulak sterilize.
  4. Bir kelebek iğne (25 g) ile şırınga aracılığıyla bağlı tavşan kulak damarından (örneğin, 5 ml) ile kan çizin.
  5. Nazik çalkalama ile tri-sodyum sitrat çözeltisi ile kan karıştırılır. Kan ve tri-sodyum sitrat çözeltisi hacmi oranı 09:01 olduğu.

1,2 TZP hazırlama (Şekil 1)

  1. 50 ml plastik santrifüj tüpüne antikoagüle kan aktarın. 10 ul bir alikotu atınhemocytometry kullanarak bazal trombosit sayısını belirlemek için kan.
  2. Bir rotor ile bir santrifüj içinde oda sıcaklığında 10 dakika (RT) için 300 x g'da kan santrifüjleyin. Düşük hızlanma ve fren hızı (Şekil 1) ayarlayın.
  3. Santrifüjlemeden sonra, kan üç tabakaya ayrılmıştır. Alt tabaka esas olarak kırmızı kan hücreleri, orta tabaka (genellikle "buffy coat" olarak anılacaktır) konsantre trombosit ve lökositlerin oluşur ve üst tabaka esas olarak kan sıvı bileşeni olan plazma, ve trombosit (almaktadır Şekil 1). Bir hücre kültürü kaputu santrifüj tüpüne dikkatle taşınması; katmanları rahatsız etmeyin. Bir 1 ml plastik pipet kullanarak 15 ml plastik tüp içine plazma tüm, buffy coat ve 2-3 mm kalınlığında kırmızı kan hücre tabakası aktarın.
  4. RT 15 dakika boyunca 3.000 xg'de aktarılan örnek ikinci kez santrifüjleyin. Üst tabaka (süpernatant) trombosit ile zayıf plazmanın (PPP), bir kabul edilird, yeni bir tüpe aktarılmıştır.
  5. PPP 2.0 x 10 6 trombosit / ul (hemocytometry tarafından belirlenen) elde etmek için kullanılıyorsa, geri kalan kan örneği içinde, trombosit toplama ayarlayarak PRP elde edilir.

1,3 TZP aktivasyon

  1. 1000 IU / ml çalışma konsantrasyonu için 5 ml% 10 kalsiyum klorür ile 5000 IU Sığır trombini eriterek PRP etkinleştirme çözeltisi hazırlayın.
  2. PRP ve PPP için aktivasyon çözümü ekleyin ve sürekli PRP ve PPP-jeller oluşturmak için pipetleme çözüm karıştırmak. PRP veya PPP için aktivasyon çözelti hacmi oranı 1:4 olduğunu.

2. Öldür Eğrisi Assay kullanma TZP vitro Antimikrobiyal Testi (Şekil 2) olarak

  1. Steril bir inokülasyon döngü kullanarak, S. çeşitli koloniler ekleyin plastik bir tüp içinde Mueller Hinton broth (MHB) 5 ml içine gecede plaka kültüründen aureus. Girdap kısaca ve daha sonra 37 2 saat için örnek inkübe ° C Sonraki, Bakteri ortamın optik yoğunluk bir spektrofotometre kullanılarak belirlendi ve ~ 1 'e eşit bir optik yoğunluk' e ayarlandı x 10 8 CFU / önceden belirlenmiş standart bir eğri esas ml.
  2. 1 x 10 6 CFU / mL elde etmek ve buz üzerinde mikroorganizma yerleştirmek için PBS kullanarak 100x seyreltme yapın.
  3. Kurma ve steril, tek kullanımlık 5 ml yuvarlak tabanlı polistiren tüpler etiket, ve her bir tüp içinde 2 ml değerindeki bir son hacim için Tablo 1 'de, aşağıdaki gruplar içindeki hazırlanır.
  4. Etkinleştirme (jel oluşumu) için trombin çözeltisi ile muamele edildi polistiren tüpler için ilk PRP, PPP veya PBS, ekleyin. Daha sonra, MHB ekleyin ve sonra S. aureus, mikroorganizma (1 x 10 6 CFU / ml), 1 x 10 5 CFU / ml 'lik nihai konsantrasyon elde edildi.
  5. ° C 150 rpm'de orbital ajitasyon ile 37 inkübe edin.
  6. Önceden belirlenmiş zaman noktalarında (örneğin 0, 1 ve 2 saat) At, tekrar pipetleme (Bu yoluyla her tüp çözümleri mixbakteri TZP jelden içinde sıkışıp olabilir beri adım) önemlidir. , Örnek 10 ul al steril% 0.9 salin ile seri seyreltin ve Triptik Soy Agar (TSA,% 5 koyun kanı ile) CFU sayımı için plaka üzerine her seyreltme 100 ul kısım Pipeti.
  7. 37 gecede Kültür agar plakaları ° C, daha sonra saymak ve plaka koloniler kaydedin. Konu x-ekseni ve CFU / y-ekseni üzerinde ml zaman (saat) bir ölçek üzerinde logarithimic veriler.

Sonuçlar

PRP tekrarlanabilir bir kez santrifüj yaklaşım (Şekil 1) kullanılarak hazırlanmıştır. PRP metisiline dirençli S. karşı in vitro antimikrobiyal özellikleri (CFU kadar 100 kat azalma) güçlü sunmak bulundu aureus (MRSA) (Şekil 3), dünya çapında yaygın olan hastanelerde 14 bulunur. Benzer şekilde, TZP metisiline duyarlı S. karşı güçlü antimikrobiyal özellikleri vardır aureus (MSSA), Grup A Str...

Tartışmalar

Trombosit zengin plazma giderek şifa destekleyici özellikleri 15-17 nedeniyle klinik uygulamalar için kullanılır olmuştur. Bu çalışmada, TZP enfeksiyonun önlenmesi için yeni bir yaklaşım olarak sunuldu. PRP MRSA, MSSA, Grup A Streptokok, ve Neisseria gonorrhoeae karşı güçlü antimikrobiyal özelliklere sahip olduğu bulunmuştur. Konvansiyonel antibiyotik tedavilere kıyasla PRP önemli avantajları, enfeksiyonun önlenmesi için şunlardır: (1) Cari antibiyotik tedavileri ...

Açıklamalar

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarının olmadığını beyan ederim.

Teşekkürler

Yazarlar Therwa Hamza, John E. Tidwell, Nina Clovis, ve deneysel yardım ve redaksiyon için Suzanne Smith Suzanne Smith teşekkürler. Yazarlar ayrıca, onun desteği ve Mikrobiyoloji, İmmünoloji ve West Virginia Üniversitesi'nde Hücre Biyoloji Bölümü biyolojik güvenlik laboratuar kullanımı için bakteriyel klinik izolat ve John B. Barnett, Doktora sağlamak için John Thomas, Doktora ederim. Yazarlar Osteosentez ve Travma Bakım Vakfı ve Ulusal Bilim Vakfı (# 1003907) mali destek için minnettarım. Mikroskop deneyleri ve görüntü analizi de Meryem Babb Randolph Kanser Merkezi ve NIH hibe P20 RR016440 tarafından kısmen desteklenen Batı Virginia Üniversitesi Görüntüleme Tesis içinde yapılmıştır.

Kan Hayvan kullanımı Batı Virginia Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından onaylanmıştır çizer. Tüm deneyler ilgili tüm guidelin uygun idam edildies, düzenlemeler ve düzenleyici kurumlar.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
Name of Reagent/MaterialCompanyCatalog NumberComments
Bovine thrombinKing Pharmaceuticals, Inc 60793-215-05Thrombin (bovine origin)
Calcium chlorideKing Pharmaceuticals, Inc60793-215-0510% calcium chloride
EthanolSigma-AldrichE7023
IsofluraneBaxter1001936060
Mueller Hinton brothBecton, Dickinson and Company275710
Phosphate-buffered salineSigma-AldrichD8662
Tri-sodium citrateSigma-AldrichW302600
Tryptic soy agarFisher ScientificR01202
CentrifugeKendro Laboratory Products750043077
Syringe filterMilliporeSLGP033RS

Referanslar

  1. Gristina, A. G. Biomaterial-centered infection: microbial adhesion versus tissue integration. Science. 237, 1588-1595 (1987).
  2. Gristina, A. G., Costerton, J. W. Bacterial adherence to biomaterials and tissue. The significance of its role in clinical sepsis. J. Bone Joint Surg. Am. 67, 264-273 (1985).
  3. Everts, P. A., et al. Reviewing the structural features of autologous platelet-leukocyte gel and suggestions for use in surgery. Eur. Surg. Res. 39, 199-207 (2007).
  4. Marx, R. E. Platelet-rich plasma (PRP): what is PRP and what is not PRP. Implant. Dent. 10, 225-228 (2001).
  5. Toscano, N., Holtzclaw, D. Surgical considerations in the use of platelet-rich plasma. Compend. Contin. Educ. Dent. 29, 182-185 (2008).
  6. Cieslik-Bielecka, A., Gazdzik, T. S., Bielecki, T. M., Cieslik, T. Why the platelet-rich gel has antimicrobial activity?. Oral Surg. Oral Med. Oral Pathol. Oral Radiol. Endod. 103, 303-306 (2007).
  7. Yeaman, M. R. The role of platelets in antimicrobial host defense. Clin. Infect. Dis. 25, 951-970 (1997).
  8. Tang, Y. Q., Yeaman, M. R., Selsted, M. E. Antimicrobial peptides from human platelets. Infect Immun. 70, 6524-6533 (2002).
  9. El-Sharkawy, H., et al. Platelet-rich plasma: growth factors and pro- and anti-inflammatory properties. J. Periodontol. 78, 661-669 (2007).
  10. Krijgsveld, J., et al. Thrombocidins, microbicidal proteins from human blood platelets, are C-terminal deletion products of CXC chemokines. J. Biol. Chem. 275, 20374-20381 (2000).
  11. Trowbridge, C. C., et al. Use of platelet gel and its effects on infection in cardiac surgery. J. Extra Corpor. Technol. 37, 381-386 (2005).
  12. Gristina, A. G., Naylor, P., Myrvik, Q. Infections from biomaterials and implants: a race for the surface. Med. Prog. Technol. 14, 205-224 (1988).
  13. Subbiahdoss, G., Kuijer, R., Grijpma, D. W., vander Mei, H. C., Busscher, H. J. Microbial biofilm growth vs. tissue integration: "the race for the surface" experimentally studied. Acta Biomater. 5, 1399-1404 (2009).
  14. Klevens, R. M., et al. Invasive methicillin-resistant Staphylococcus aureus infections in the United States. JAMA. 298, 1763-1771 (2007).
  15. Foster, T. E., Puskas, B. L., Mandelbaum, B. R., Gerhardt, M. B., Rodeo, S. A. Platelet-rich plasma: from basic science to clinical applications. Am. J. Sports Med. 37, 2259-2272 (2009).
  16. Carlson, N. E., Roach, R. B. Platelet-rich plasma: clinical applications in dentistry. J. Am. Dent. Assoc. 133, 1383-1386 (2002).
  17. Man, D., Plosker, H., Winland-Brown, J. E. The use of autologous platelet-rich plasma (platelet gel) and autologous platelet-poor plasma (fibrin glue) in cosmetic surgery. Plast. Reconstr. Surg. 107, 229-237 (2001).
  18. Fridkin, S. K., et al. Epidemiological and microbiological characterization of infections caused by Staphylococcus aureus with reduced susceptibility to vancomycin, United States, 1997-2001. Clin. Infect. Dis. 36, 429-439 (1997).
  19. Jackson, C. R., Fedorka-Cray, P. J., Davis, J. A., Barrett, J. B., Frye, J. G. Prevalence, species distribution and antimicrobial resistance of enterococci isolated from dogs and cats in the United States. J. Appl. Microbiol. 107, 1269-1278 (2009).
  20. Murray, C. K., et al. Recovery of multidrug-resistant bacteria from combat personnel evacuated from Iraq and Afghanistan at a single military treatment facility. Mil. Med. 174, 598-604 (2009).
  21. Durr, M., Peschel, A. Chemokines meet defensins: the merging concepts of chemoattractants and antimicrobial peptides in host defense. Infect Immun. 70, 6515-6517 (2002).
  22. Hancock, R. E. Peptide antibiotics. Lancet. 349, 418-422 (1997).
  23. Dohan Ehrenfest, D. M., Rasmusson, L., Albrektsson, T. Classification of platelet concentrates: from pure platelet-rich plasma (P-PRP) to leucocyte- and platelet-rich fibrin (L-PRF). Trends Biotechnol. 27, 158-167 (2009).
  24. Kalen, A., Wahlstrom, O., Linder, C. H., Magnusson, P. The content of bone morphogenetic proteins in platelets varies greatly between different platelet donors. Biochem. Biophys. Res. Commun. 375, 261-264 (2008).
  25. Weibrich, G., Kleis, W. K., Hafner, G., Hitzler, W. E. Growth factor levels in platelet-rich plasma and correlations with donor age, sex, and platelet count. J. Craniomaxillofac. Surg. 30, 97-102 (2002).
  26. Mazzucco, L., Balbo, V., Cattana, E., Guaschino, R., Borzini, P. Not every PRP-gel is born equal. Evaluation of growth factor availability for tissues through four PRP-gel preparations: Fibrinet, RegenPRP-Kit, Plateltex and one manual procedure. Vox Sang. 97, 110-118 (2009).
  27. Lei, H., Gui, L., Xiao, R. The effect of anticoagulants on the quality and biological efficacy of platelet-rich plasma. Clin. Biochem. 42, 1452-1460 (2009).
  28. Redler, L. H., Thompson, S. A., Hsu, S. H., Ahmad, C. S., Levine, W. N. Platelet-rich plasma therapy: a systematic literature review and evidence for clinical use. Phys. Sportsmed. 39, 42-51 (2011).
  29. Whitman, D. H., Berry, R. L., Green, D. M. Platelet gel: an autologous alternative to fibrin glue with applications in oral and maxillofacial surgery. J. Oral Maxillofac. Surg. 55, 1294-1299 (1997).
  30. Anitua, E. Plasma rich in growth factors: preliminary results of use in the preparation of future sites for implants. Int. J. Oral Maxillofac. Implants. 14, 529-535 (1999).
  31. Whitman, D. H., Berry, R. L. A technique for improving the handling of particulate cancellous bone and marrow grafts using platelet gel. J. Oral. Maxillofac. Surg. 56, 1217-1218 (1998).
  32. Currie, L. J., Sharpe, J. R., Martin, R. The use of fibrin glue in skin grafts and tissue-engineered skin replacements: a review. Plast. Reconstr. Surg. 108, 1713-1726 (2001).
  33. Nikulin, A. A. Effect of calcium, thrombin and nucleotides (ADP, cAMP, cGMP) on blood platelet glycolysis and energy metabolism. Farmakol. Toksikol. 43, 585-590 (1980).
  34. Hantgan, R. R., Taylor, R. G., Lewis, J. C. Platelets interact with fibrin only after activation. Blood. 65, 1299-1311 (1985).
  35. Hantgan, R., Fowler, W., Erickson, H., Hermans, J. Fibrin assembly: a comparison of electron microscopic and light scattering results. Thromb. Haemost. 44, 119-124 (1980).
  36. Li, B., Jiang, B., Boyce, B. M., Lindsey, B. A. Multilayer polypeptide nanoscale coatings incorporating IL-12 for the prevention of biomedical device-associated infections. Biomaterials. 30, 2552-2558 (2009).
  37. Li, B., Jiang, B., Dietz, M. J., Smith, E. S., Clovis, N. B., Rao, K. M. K. Evaluation of local MCP-1 and IL-12 nanocoatings for infection prevention in open fractures. J. Orthop. Res. 28, 48-54 (2010).
  38. Boyce, B. M., Lindsey, B. A., Clovis, N. B., Smith, E. S., Hobbs, G. R., Hubbard, D. F., Emery, S. E., Barnett, J. B., Li, B. Additive effects of exogenous IL-12 supplementation and antibiotic treatment in infection prophylaxis. J. Orthop. Res. 30 (2), 196-202 (2012).

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

EnfeksiyonSay 74antimikrobiyal Enfeksiyon Hastal klarmm nolojiMikrobiyolojiT pH cresel BiyolojiMolek ler BiyolojiBakteriyel Enfeksiyonlar ve MikozlarKas skelet Hastal klarBiyolojik Fakt rlerTrombosit zengin plazmabakteriyel enfeksiyone ri tahlil ld rmek Staphylococcus aureusIzole klinikkan h creleriklinik teknikleri

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır