Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Kronik oküler hipertansiyon fare gözünde Trabeküler ağın laser kullanılarak meydana gelir. Göz içi basıncı (GİB) lazer tedavi sonrası birkaç ay boyunca yükselir. Görme keskinliği ve Deney hayvanlarının kontrast duyarlılık azalması optomotor testi kullanılarak izlenir.

Özet

Sık sık yüksek göz içi basıncı (GİB) ile ilişkili Glokom, körlüğün önde gelen nedenlerinden biridir. Biz insan yüksek gerilim glokom taklit etmek oküler hipertansiyon bir fare modeli kurmak için çalıştı. Burada, lazer aydınlatma açı kapanması neden olan, sulu bir çıkış photocoagulate için kornea limbusa uygulanır. GİB değişiklikler lazer tedavi öncesi ve sonrası bir canlanma tonometre ile izlenmektedir. Bir optomotor davranış testi görsel kapasitesi karşılık gelen değişiklikleri ölçmek için kullanılır. Lazer aydınlatma sonra sürekli GİB yükselmesi geliştirilen bir fare temsilcisi sonucu gösterilir. Bir azalmış görme keskinliği ve kontrast duyarlılık bu göz hipertansif fare görülmektedir. Birlikte, Çalışmamızda glokom farelerde nöronal dejenerasyon ve altta yatan moleküler mekanizmaları araştırmak için değerli bir model sistem tanıttı.

Protokol

Prosedürleri

C57BL/6J fareler (Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME) Northwestern Üniversitesi Hayvan Bakım Tesisi'nde yetiştirilir. Tüm hayvanlar Northwestern Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu ve NIH Neuroscience Araştırma Hayvanların Kullanımı kurallara conformed tarafından onaylanan protokoller çerçevesinde kullanılır.

1. Lazer Fotokoagülasyon

Lazer fotokoagülasyon işlemi 5-7 daha önce yayınlanmış protokollerden değiştirilir.

  1. Ketamin (100 mg / kg, Butler, Schein Hayvan Sağlığı, OH) ve ksilazin (Iowa Shenandoah, 10 mg / kg 'Lloyd, Inc IA) bir intraperitoneal enjeksiyon sureti ile bir 40-60 günlük fareden anestezisi.
  2. % 1 atropin sülfat çözeltisi bir ya da iki damlası (Alcon Labs, Inc, Fort Worth, TX) ile topikal tedavi, deney hayvanın sağ gözün gözbebeğinin genişler.
  3. Midriyazis sonra, bir dümdüznterior odası lazer indüksiyon 6 artırmak için. Ön kamarada sıvı dışarı boşaltmak için yarık lamba altında ön alan (SL-3E, Topcon, Oakland, NJ) içine sivri ucu (Dünya Hassas Aletler A.Ş., Sarasota, FL) ile bir cam mikropipet takın.
  4. Plastik bir koni tutucu (Braintree Bilim Inc, MA) fare dizginlemek ve (Şekil 1A bak) bir ev yapımı platformda bağladı. Süzgeç ile fare tutun ve yarık lamba arkasında ışık kaynağı için farenin sağ gözü ortaya çıkarır. Yarık lamba altında anestezi farenin sağ gözü aynı hizaya getirin.
  5. Iki elinizle fare süzgeç tutarken, bir Argon lazer (Ultima 2000SE, Tutarlı, Santa Clara, CA) kullanılarak kornea limbus için lazer aydınlatma geçerlidir. Dik Trabeküler ağın çevresi 80-100 lazer noktalar (514 nm, 100 mW, 50 msn darbe ve 200 mikron nokta) hakkında sunun. C57BL / 6 fareler herhangi bir p için bir bariyer görevi görür pigmente iris vardurumundaki potansiyel başıboş enerji 7.
  6. Aşılamak topikal% 0.5 moksifloksasin (Alcon Labs, Inc, Fort Worth, Teksas) lazer ile tedavi edilen alan ve% 0.5 proparakain (Bausch & Lomb, Rochester, NY) ağrı gidermek için dezenfekte oküler yüzey üzerinde.
  7. Tamamen uyanık kadar yaklaşık bir saat için kurtarma için bir ısıtma yastığı (Sunbeam Products Inc, Boca Raton, FL) üzerinde hayvan tutun.
  8. Sol göz bir kontrol olarak hizmet tedavi edilmediğinde.

2. GİB Ölçümler

  1. Plastik huni tutacağı yüklemek ve daha sonra (Bkz. Şekil 2A) platformu üzerinde dizginlemek için bir tüp içine uyanık fare yerleştirin.
  2. Beş ila on dakika fareyi sahibi konumuna adapte izin izin verin. Prob ucu uzak kornea 14 yüzeyinden 2-3 mm kadar fare göze ribaund tonometre (TonoLab, Colonial Tıbbi Malzeme, Franconia, NH) yaklaşım.
  3. Prob ucu merkezi yüzeye vurmak izin ölçüm düğmesine basınhafifçe kornea. Aynı gözün GİB altı ölçümleri üç ardışık takımı satın aldı ve gözün GİB olarak ortalaması alınır. Tedavi edilmeyen kontrol göz her zaman yanında ölçülür lazer ile tedavi edilen göz için bir temel okuma almak için ilk ölçülür.

3. Optomotor Testi

Görme keskinliği ve kontrast duyarlılık 14,15 test edilir. Bireysel farelerin iki göz sürüklenen ızgara yönünü ters çevirerek ayrı ayrı incelenir, bir saat sürüklenen ızgara, sol göz ve sağ göz 16 için saat yönünün tersine sürüklenen ızgara görme fonksiyonu tanımlamak için kullanılır yani. Her test yaklaşık 15 dakika sürer ve bağımsız iki gözlemci tarafından tekrarlanır.

  1. Fare yerleştirin ve fare dört bilgisayar monitörleri (Şekil 3A-B) ile çevrili yüksek bir platformda serbestçe hareket etmesine izin verir.
  2. Onlar yatay sinüs sürüklenen göstergesi böylece monitör kurmak39 cd / m 2 ortalama parlaklık ile görsel uyaranlara olarak kafesler. Izgara hareket yönü dönüşümlü olmalıdır ardışık arasında saat yönünde ve saat yönünün tersine.
  3. Hayvanın hareketlerini analiz edin. Görsel uyaran üzerinde ve sonra yavaş yavaş artan sonra sürüklenen ızgaralar ile uyum içinde hayvanın hareketleri 15 saniye içinde "pozitif" olarak kabul edilir. En yüksek tepki ortaya çıkarmak görsel uyaran hayvanın görme keskinliği 17 olarak tanımlanır.
  4. 0.075, 0.16, ve derece başına 0.3 devir (dd): Üç önceden seçilmiş mekansal frekanslarda kontrast duyarlılık inceleyin. Her bir göz için kontrast eşiği önceden belirlenmiş sabit bir frekansta görsel yanıtları ortaya çıkarır en düşük kontrast olarak tanımlanır. Kontrast duyarlılık eşiği 17 tersidir.

Sonuçlar

Gibi prosedürler tarif, lazer aydınlatma açı kapanması (Şekil 1) uyaran, sulu çıkış photocoagulate için limbal bölgede trabeküler ağ hedefleniyor. En Lazerli göz önceki bulgularla 6 tutarlı anlamlı fiziksel hasar, pigment dekolmanı ya da enfeksiyon, sergiledi. Farelerin küçük bir grup (tüm Lazerli hayvanların% 5'inden az) gibi sönük göz topları, ağır katarakt, önemli pigment dekolmanı veya kanama gibi ciddi hasar fiziksel belirtileri sergiledi, biz hemen on...

Tartışmalar

Biz sürekli oküler hipertansiyon üzerinde rapor fare gözünde lazer aydınlatma ile uyarılabilir. Tuzlu enjeksiyon modeli 18 ve damar koter modeli geniş mikrocerrahi beceri gerektiren her ikisi de 11 ile karşılaştırıldığında, lazer aydınlatma gerçekleştirmek için oldukça basit ve kolaydır. Genellikle 2-3 saat içinde 4-6 fareler için lazer aydınlatma gerçekleştirebilirsiniz. Sürekli GİB artışı elde etmek için önemli adımlar lazer aydınlatma için lazer ve parametrel...

Açıklamalar

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarının olmadığını beyan ederim.

Yazarlar Northwestern Üniversitesi tam zamanlı çalışanlarıdır.

Yazarlar bu makalede kullanılan reaktifler ve aletleri üreten firma tarafından sağlanan NO fon aldı.

Teşekkürler

Bu yazıda yer alan çalışma Amerikan Sağlık Yardım Vakfı (XL), Körlük Engellenir Research William & Mary Greve Özel Scholar Ödülü (XL), gelen Glokom Araştırma Dr Douglas H. Johnson Ödülü tarafından desteklenmiştir Körlük Önlenmesi için Illinois Derneği (HC) ve NIH hibe R01EY019034 (XL).

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
Reagent
moxifloxacinAlcon Labs, Inc.NDC 0065-4013-030.5 %, Rx only
Proparacaine HydrochlorideBausch & LombNDC 24208-730-060.5 %, Rx only
Ophthalmic Solution USPBausch & LombNDC 24208-730-06.5 %, Rx only
ketamineButler Schein Animal HealthNDC 11695-0550-1100 mg / kg
xylazineLLOYD Inc. of IowaNADA 139-23610 mg / kg
atropine sulfate solutionAlcon Labs, Inc.NDC 61314-303-021 %, Rx only
Equipment
Slit Lamp, TOPCON Visual Systems IncSL-3Epowered by PS-30A
OptoMotry 1.8.0 virtualCerebralMechanics Inc.
opto-kinetic testing systemCerebralMechanics Inc.
Tonometer, TonoLab, for miceColonial Medical Supply
Heating padSunbeam Products Inc722-810
Argon laser Coherent IncUltima 2000SE
DECAPICONE Plastic cone holder Braintree Sci Inc.MDC-200for mouse

Referanslar

  1. Gupta, N., Yucel, Y. H. Glaucoma as a neurodegenerative disease. Curr. Opin. Ophthalmol. 18, 110-114 (2007).
  2. Quigley, H. A. Neuronal death in glaucoma. Prog. Retin. Eye Res. 18, 39-57 (1999).
  3. McKinnon, S. J., Schlamp, C. L., Nickells, R. W. Mouse models of retinal ganglion cell death and glaucoma. Experimental Eye Research. 88, 816-824 (2009).
  4. Pang, I. H., Clark, A. F. Rodent models for glaucoma retinopathy and optic neuropathy. J. Glaucoma. 16, 483-505 (2007).
  5. Levkovitch-Verbin, H., et al. Translimbal laser photocoagulation to the trabecular meshwork as a model of glaucoma in rats. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 43, 402-410 (2002).
  6. Aihara, M., Lindsey, J. D., Weinreb, R. N. Experimental mouse ocular hypertension: establishment of the model. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 44, 4314-4320 (2003).
  7. Grozdanic, S. D. Laser-induced mouse model of chronic ocular hypertension. Investigative ophthalmology & visual science. 44, 4337-4346 (2003).
  8. Sappington, R. M., Carlson, B. J., Crish, S. D., Calkins, D. J. The microbead occlusion model: a paradigm for induced ocular hypertension in rats and mice. Investigative ophthalmology & visual science. 51, 207-216 (2010).
  9. Ding, C., Wang, P., Tian, N. Effect of general anesthetics on IOP in elevated IOP mouse model. Experimental Eye Research. 92, 512-520 (2011).
  10. Kalesnykas, G., et al. Retinal ganglion cell morphology after optic nerve crush and experimental glaucoma. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 53, 3847-3857 (2012).
  11. Shareef, S. R., Garcia-Valenzuela, E., Salierno, A., Walsh, J., Sharma, S. C. Chronic ocular hypertension following episcleral venous occlusion in rats. Experimental Eye Research. 61, 379-382 (1995).
  12. Chiu, K., Chang, R., So, K. F. Laser-induced chronic ocular hypertension model on SD rats. J. Vis. Exp. (10), e549 (2007).
  13. Fu, C. T., Sretavan, D. Laser-induced ocular hypertension in albino CD-1 mice. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 51, 980-990 (2010).
  14. Rangarajan, K. V. Detection of visual deficits in aging DBA/2J mice by two behavioral assays. Curr. Eye Res. 36, 481-491 (2011).
  15. Wang, L., et al. Direction-specific disruption of subcortical visual behavior and receptive fields in mice lacking the beta2 subunit of nicotinic acetylcholine receptor. J. Neurosci. 29, 12909-12918 (2009).
  16. Douglas, R. M., et al. Independent visual threshold measurements in the two eyes of freely moving rats and mice using a virtual-reality optokinetic system. Visual Neuroscience. 22, 677-684 (2005).
  17. Prusky, G. T., Alam, N. M., Beekman, S., Douglas, R. M. Rapid quantification of adult and developing mouse spatial vision using a virtual optomotor system. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 45, 4611-4616 (2004).
  18. Morrison, J. C., et al. A rat model of chronic pressure-induced optic nerve damage. Experimental Eye Research. 64, 85-96 (1997).
  19. Cone, F. E., et al. The effects of anesthesia, mouse strain and age on intraocular pressure and an improved murine model of experimental glaucoma. Experimental Eye Research. 99, 27-35 (2012).
  20. Liu, X., et al. Brain-derived neurotrophic factor and TrkB modulate visual experience-dependent refinement of neuronal pathways in retina. J. Neurosci. 27, 7256-7267 (2007).
  21. Liu, X., et al. Regulation of neonatal development of retinal ganglion cell dendrites by neurotrophin-3 overexpression. The Journal of Comparative Neurology. 514, 449-458 (2009).
  22. Sun, W., Li, N., He, S. Large-scale morphological survey of mouse retinal ganglion cells. The Journal of Comparative Neurology. 451, 115-126 (2002).
  23. Feng, L., et al. Sustained Ocular Hypertension Induces Dendritic Degeneration of Mouse Retinal Ganglion Cells that Depends on Cell-type and Location. Investigative Ophthalmology & Visual Science. , (2013).

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

T pSay 78Biyomedikal M hendisli iN robiyolojiAnatomiFizyolojiN robilimH cresel BiyolojiMolek ler BiyolojiG z Hastal klarRetina N ronlarRetina N ronlarRetina Ganglion H creleriN rodejeneratif Hastal klarOk ler HipertansiyonRetina DejenerasyonVizyon TestleriG rme Keskinli iG z Hastal klarRetina Ganglion H cre RGCOk ler HipertansiyonLazer Fotokoag lasyonG z i i bas nc G BTonometreG rme Keskinli iKontrast Duyarl l koptomotorhayvan modeli

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır