Eşzamanlı Elektrofizyolojik Kayıt ve kemirgen Beyindeki inhibitör Ajanların Mikro-enjeksiyon

Özet

Here, we craft a glass pipette with dual functions: inhibition of deep brain structures by microinjections of drugs and real-time monitoring of their effects through simultaneous electrophysiological recordings.

Özet

Burada ticari olarak erişilebilir ve uygun fiyatlı parçalar kullanarak tek kullanımlık "injectrode" yapımı için bir yöntem açıklanmaktadır. Bir tarama sisteminin etkilenen nöronal popülasyonundan elektrofizyolojik sinyalleri kayıt sırasında bir ilacın enjeksiyonu sağlar geliştirildi. Bu yöntem, ticari çözümler için basit ve ekonomik bir alternatif sağlar. Bir cam pipet bir hipodermik iğne ve gümüş filament ile birleştirilmesi suretiyle modifiye edildi. injectrode ilaç iletimi için ticari bir mikroenjektör pompasına bağlanmıştır. Bu ilaç dağıtım sitesinden kaynaklanan çoklu ünite dışı sinyalleri aracılığıyla gerçek zamanlı farmakodinamikler geri bildirim sağlayan teknikle sonuçlanır. Kavramının bir kanıtı olarak, eş zamanlı olarak injectrode yoluyla ilaçların teslimi ile, sıçanlarda ışık yanıp söner tarafından ortaya üstün colliculus gelen nöronal aktivitenin kaydetti. injectrode kayıt kapasitesi inj fonksiyonel karakterizasyonu izin veririlaç dağıtım lokalizasyonu üzerinde hassas kontrol lehine ection sitesi. Injectrode yüklü kimyasal madde seçimi anatomik deneyler için işaretleyiciler izleme dahil olmak üzere, geniş bir şekilde, bu yöntemin uygulanması, aynı zamanda, buradan çok gösterilmiştir ötesine uzanır.

Giriş

kortikal alan ve alt kortikal çekirdeklerin inaktivasyonu, çeşitli beyin yapıları ^2-4 arasındaki fonksiyonel ilişkiler çalışmalarında önemlidir. Son literatür beyin yapılarının ^2,5 rolünü incelemek için kayıp fonksiyon-kimyasal veya kriyojenik teknikleri istihdam vardır. Çevre doku ^6,7 kollateral hasarı en aza indirerek ilaç microinjections ilgili olarak, ilaçların küçük miktarlar kontrollü bir hızda, bir beyin bölgesine uygulanabilir. Bu teknik, nöronal aktivitenin farklı farmakolojik hedeflerin etkisini incelemek için spesifik agonistleri, ters agonistleri veya antagonistleri sunmak için de kullanılabilir. Bu tür etkileri de araştır....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protokol

NOT: Tüm prosedürler Hayvanları Koruma ve Université de Montréal Etik inceleme kurulu Kanada Konseyi direktifleri doğrultusunda yapıldı.

Kayıt enjeksiyon Pipet 1. Meclisi

1. Bir pipet çektirmenin kullanarak yaklaşık 7 cm uzunluğunda bir cam kapiller (1 mm dış çapı) çekin.
2. Kılcal ucu kırın ve bir ışık mikroskobu altında diyafram kontrol edin. Iç çapı 40 mikron 30 mikron arasında olduğunu onaylayın.
3. Cam pipet olmayan konik ucundan çıkıntılı yaklaşık 1 cm cam kapiller içine 7 cm uzunluğunda gümüş tel yerleştirin.
4. Cam kapiller dikey olarak aşırı filament bükün.
5. Bir 30 G hipodermik iğnenin mil üz....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Sonuçlar

injectrode inşaat tel bükülmüş bir kısmı ile bir cam pipet (D) içine beslenir ve açıklıktan dışarı doğru çıkıntı yapan, Şekil 1 bir gümüş tel (C) 'de gösterilmiştir. A 30 G iğne (B) bağlı ve yapıştırıcı ile cam pipet açılmasına kapatılır. Pipet püskürtme maddesi ile doldurulduktan sonra, cam mikro şırınga (A), bir iğne takılır. Mikro şırınga iğnesi (E) ve nerede gümüş tel cam pipet (F) çıkıntı bağlanır iyi bir mühür var olması önemlidir........

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Tartışmalar

Önerilen protokol mevcut geri dönüşümlü etkisizleştirme yöntemleri kaynaklanan sorunları çözmek için tasarlanmıştır. Özellikle bu proje özellikle derin beyin yapılarında nöral aktiviteyi modüle maddelerin kimyasal microinjections için kullanılan yöntemleri rafine yönelik. Kurulum bu tür ortaya çıkan bir teknik zorluk, her iki sondalar enjeksiyon yerinde kesin kayıtları elde etmek amacıyla in vivo aynı kısıtlı alanda kolokalize edilmesi ihtiyacıdır. Bu sorun, aynı sitede Enj.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Injection pump (UltraMicroPump III)	WPI	#UMP3
Injection console (Micro4 Controller)	WPI	#SYS-MICRO4
Hamilton syringe	Hamliton	(80301) 701LT 10 µL SYR	Syringes between 5 and 10 μl used
Flexible plastic adhesive	Lepage	393915	The gel form is easier to apply to the shaft of the 30 G hypodermic needle forming a waterproof seal when dry.
Glass pipettes	WPI	#TW100F-4	Thin wall, 1 mm OD, 0.75 mm ID with filament pipettes used
720 Needle Pipette Puller	Kopf	720
Silver wire	A-M Systems, Inc.	782500	Bare 0.010”