Yenidoğan Hipoksik-İskemik Ensefalopati A Piglet Modeli

Özet

Hypoxic-ischemic encephalopathy following perinatal asphyxia can be studied using animal models. We demonstrate the procedures necessary for establishing a piglet model of neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy.

Özet

Hipoksik-iskemik ensefalopati (HİE) neden Doğum asfiksi, dünya çapında 0.660.000 ölüm her yıl, dünyanın en 2,9 milyon neonatal ölümlerin yaklaşık dörtte oluşturuyor. HİE hayvan modelleri HIE patofizyoloji anlaşılmasına katkıda bulunmuştur ve bağlı perinatal asfiksi beyin hasarı meydana dinamik bir süreç sermiştir. Bu nedenle, hayvan çalışmaları taciz sonrası tedavi stratejileri için bir zaman penceresi sürmüşlerdir. Hipotermi pdiglet modellerinde HIE için bir tedavi olarak test edilmiştir ve daha sonra, klinik testlerde de etkili olmuştur. Modelin Varyasyonları adjuvan nöro-koruyucu yöntemler ve ksenon ve melatoninin domuz yavrusu çalışmaları çalışmada uygulanmıştır klinik faz yol açmıştır I ve II çalışmalarda ^1,2. domuz yavrusu HİE modeli daha yenidoğan resuscitation- ve hemodinamik çalışmalar hem de hücresel seviyede serebral hipoksi araştırmalarda kullanılır. Bununla birlikte, teknik olarak zorprotokolde modeli ve varyasyonları ya çok hafif ya da çok şiddetli beyin yaralanmaya neden olabilir. Bu yazıda, yenidoğan HIE istikrarlı bir domuz yavrusu modelinin kurulması için gerekli teknik prosedürleri göstermektedir. İlk olarak, yenidoğan piglet (<24 saat eski, ortanca ağırlık 1500 gr), anestezi entübe ve yenidoğan yoğun bakım ünitesinde bulunan kıyaslanabilir bir kurulumda izlenir. Küresel hipoksi-iskemi küresel hipoksi, hipotansiyon ile iskemi ve serebral hipoksi gösteren düz bir iz genlik entegre EEG (aEEG) ulaşmak için inspirasyon oksijen fraksiyonu düşürerek indüklenir. Hayatta kalma aEEG tepki ve kan basıncına göre oksijen ayarlayarak teşvik edilmektedir. Beyin hasarı 72 saat sonra histopatolojik ve manyetik rezonans görüntüleme ile ölçülür.

Giriş

Perinatal asfiksi Hipoksik-iskemik ensefalopati (HİE) ile ilişkili akut ve sıklıkla öngörülemeyen bir durumdur. Bu protokolün genel amacı, perinatal hipoksik iskemik ensefalopati bir domuz yavrusu hayatta kalma modeli ortaya koymaktır. Bu model yenidoğan beyin üzerinde ve kan, beyin omurilik sıvısı ve idrar gibi vücut sıvılarında nöropatolojisi deneysel tedaviler, manyetik rezonans görüntüleme ve spektroskopi (MRG ve MRS) ve biyobelirteçlerin hipoksi-iskemi çeşitli derecelerde etkisini araştırmak için kullanılabilir . modeli aynı zamanda küresel hipoksi-iskemi etkilenen bütün bunlar kardiyovasküler sistemi, solunum sistemi, böbrek ve karaciğer, soruşturma için yararlı olduğu kanıtlanmıştır.

Perinatal asfiksi tehlikeye oksijen kaynağı intrapartum veya hemen doğum sonrası dönemde sonucudur. İntrapartum hipoksik olaylar dünyanın 2.9 değirmen yaklaşık dörtte, dünya çapında 0.660.000 ölüm her yıl için hesap2012 ³ iyon neonatal ölümler. 2010 1,15 milyon bebeklerde doğum asfiksi ⁴ Aşağıdaki neonatal ensefalopati geliştiği tahmin edilmektedir. HIE gebelik 34 haftadan sonra doğan bebeklerde ensefalopati olarak tanımlanan sanayileşmiş dünyada 1-3 / 1000 canlı doğumda ⁵ oluşur ve 8.5 / 1000 canlı doğumda kadar gelişmekte olan ülkelerde ^4. ölüm riski% 10-60 olduğunu ve hayatta kalanların% 30-100 ^6,7 nörolojik handikap riski. 50200000 sakatlık ayarlanmış yaşam yılları (DALY) intrapartum hipoksik olaylar ⁴ atfedilir. Halen HIE için destekleyici başka tek tedavi sonrası hipoksik hipotermi olduğunu. Böylece, tanı yöntemleri ve tedavi stratejileri gelişmeler HIE ⁸ yönetimini geliştirmek için gereklidir.

Perinatal asfiksi ve neonatal beyin hasarı yönetiminde sonrası prognozu gelişmeler altta yatan hastalık mekanizmaları bilgisini genişleterek dayalı bird olası tedaviler. Farklı klinik olaylar HİE yol açabilir ve tek bir doğumevinde insidans düşük ⁵ olarak HIE hayvan modelleri özellikle yararlıdır. Prognostik ve tanılama araçları ve tedavi stratejileri, yeni test ederken biyolojik çeşitliliği etkisi minimize edilebileceği bir deney düzeneği, esastır. Bir hayvan modeli böylece uyarılan yaralanma ve hastalık ve İt's sonucu ⁹ katılan dinamik bir süreç altında yatan patolojik mekanizmaların anlaşılmasına katkıda, mümkün olduğunca yakından klinik durum yaklaştığı gerekir. Yenidoğan HIE hayvan modelleri kemirgenler, kuzu, domuz da dahil olmak üzere türlerin bir dizi ihtiva ederler. Buna karşılık, yeni doğmuş domuz yavrusu teslimat ^11,12 zamanında boyutu ile ilgili olarak, kalp-damar sistemi ¹⁰ ve beyin vadeli insan bebeğe daha fazla benzerliği vardır. Piglet modelinde İzleme, enstrümantasyon ve sonuç değerlendirme tha benzerHİE ile bebeklerin klinik bakımda kullanılan t. Bu duruma göre, bu modelden yenidoğan bakım çevrilmesinden yüksek derecede vardır.

Perinatal hipoksi ve HIE domuz yavrusu modelleri çok grup tarafından kullanılan ve alanda ¹³ bir dizi farklılık göstermektedir. Deneyin amacına göre, çok dikkat ilaçların seçimi ödenmelidir, hipoksi-iskemi, hakaret süresini ve şiddetini, post-hakaret resüsitasyon ve bakımı, ve sonuçları değerlendirme kontrol yöntemi uyarma yöntemi. Randomize bir çalışma tasarımı her zaman girişimsel çalışmalarda kullanılması gereken yanlılığı önlemek için.

hipoksik iskemik yaralanma uyaran uygulanacak yöntem önemlidir. HİE giden küresel hipoksi sıklıkla beyin, kalp, akciğerler, böbrek ve karaciğer ile ilgili çoklu organ yetmezliği ile sonuçlanır. Değerlendirilen sonuçlarına göre, HIE modelleri fokal iskemi, örneğin güveniyor ziyade küresel hipoksi ve iskemi dayanmalıdır., Arabanın ligasyonu ileotid arterler ^14. Ortalama kan basıncı> 40 mm Hg ² korurken yeni bir kağıt hipoksi kombinasyonu (FiO _2% 12) ve karotid arter sıkıştırma uyguladı. Başka bir grup negatif baz fazlalığı> 20 mmol / L kadar% 8 O ₂ küresel hipoksi kaynaklı veya arteriyel kan basıncı (MABP) <15 mm Hg ortalama ve 4 saat ¹⁵ de hayvanların kurban. Hipoksi aynı zamanda kardiyak output ile titre edilmiştir MABP (bazal% 30-40) ve arteriyel pH ^{(6,95-7,05), 16} (30-35 mm Hg).

Bu raporda sunulan benzer aEEG bastırma ile titre küresel hipoksi-iskemi, modelleri elektrofizyolojik, klinik olarak ensefalopati gösterdi ve oksijensiz dönem bebek ^17,18 bulunan durumuna nöropatolojik karşılaştırılabilir olması.

indüklenen HIE derecesi önemlidir. HIE yararlı bir hayvan modeli, aynı zamanda, yeni dia test edilmesi için izin vermelidirusul ve tedavi seçenekleri gnostik. Bunu sağlamak için, modeller, yeni tedaviler değerlendirirken az alakalı olacağını çok az veya hiç tedavi potansiyeline sahip ciddi beyin hasarı gibi tedavi potansiyel var ılımlı HIE neden olmalıdır. Hipoksiye tolerans testi hayvanlar arasında önemli oranda değişmektedir. Önceki çalışmalar daha tutarlı bir beyin hasarı elde edilebileceğini göstermiştir ve daha fazla hayvan genlik entegre elektroensefalografi (aEEG) tarafından değerlendirilir her Piglet serebral yanıta göre uyarılan hipoksi bireyselleştirmekte ziyade boyunca bir dizi FiO ₂ değeri kullanılarak ^17,19 hayatta olduğunu hipoksik olayı. aEEG bastırma süresi 45 dakika aEEG bastırma az sayıdaki histopatolojik değişikliklerle, beyin hasarının derecesine ilişkilidir. HİE için nöroprotektif tedavilerin bir yeni yorum davranışsal sonuç ölç sağlayan yaşam modelleri için ihtiyaç tespithayvan modellerinde ²⁰ ures.

Sunulan HIE Piglet modelinin sayısız avantajı vardır. Bu sonuç, insan fizyolojisine çevirmek için son derece muhtemeldir bir tür dayanmaktadır. AEEG Küresel hipoksi-iskemi modelleri çoklu organ yetmezliği ve hipoksi-iskemi titrasyon biyomarkerler, MR ve davranış ile ilgili zaman noktalarında değerlendirilebilir şekilde hayatta kalma klinik sonuçlarla ilgili beyin hasarı tutarlı bir derecede neden olur.

Perinatal asfiksi ve HİE Piglet modelleri HIE patofizyolojisi içine geçerli içgörü önemli katkıda değil, aynı zamanda başarılı bir sonuçta insanlarda yeni tedaviler sonucu, klinik çalışmalar öncesinde var. Piglet model çalışmaları HIE ²¹ için bir tedavi olarak hipotermi kurulmasında önemli bir rol oynadı ve yenidoğan resüsitasyon araştırması ²² kullanılır. Asfiksi ve HİE, bir araştırma içinde yaparken çeşitli gruplar piglet modelleri kullanmışD çalışmaları hipotermi ^23, a-melanosit uyarıcı hormon ^24, kalp durması ^25, tirozin hidroksilaz aktivitesi ^26, tekrar hipoksik maruz ^27, NMDA reseptör aktivitesi ¹⁴ içerir ve yakın kızıl ötesi spektroskopi ^28.

prosedür sırasında küçük ayarlamalar çok hafif ya da çok şiddetli beyin hasarı ^29,2 ya sebep olabilir, bu raporda sunulan Piglet HIE modeli ile çalışmak teknik açıdan zor. Biz mevcut literatür önce yayınlanmış modeller üretmek için yeterli ayrıntı yoktu bulundu. Böylece, burada HIE çalışmaları için bu gelişmiş modeli kurmak için araştırmacıların sağlayan bu raporda bir domuz yavrusu 72 saat hayatta kalma modelinin kurulması için gerekli teknik prosedürlerin her adımını göstermektedir.

Protokol

Mevcut protokol Danimarka Hayvan Deneyleri Müfettişliği tarafından onaylandı. Tüm test hayvanları prosedürler boyunca anestezi uygulandı. Bu protokolün çoğaltılması, ulusal etik ve hayvan refahı kurallarına uygun olarak yürütülen ve yerel etik komiteleri tarafından onaylanmalıdır.

1. Hayvanlar

1. 2.000 gr - yaklaşık 1.500 ağırlığında Danimarkalı Landrace domuz yavrusu <24 saat eski.

2. Anestezi ve Bakım Sıvıları

1. Sevofluran yönetim, alkol bezlerden, periferik damar içi kateter, lastik bant, tuzlu su ile şırıngalar, propofol (5 mg / kg) için bir maske, fentanil (10 ug / kg) ve prokain benzilpenisilin: anestezi için gerekli olan ekipman (Şekil 1) hazırlayın (15,000 IU / kg).
2. Bir solunum maskesi ile% 1-2 sevofluran sunarak anestezi neden olur.
   1. Palpebral ve çekilme refl için değerlendirerek anestezi derinliğini değerlendirmekgiderler. Piglet derinden anestezi olduğunu zaman belli, perkütan kulak damar içine periferik intravenöz kateter yerleştirin.
   2. Periferik damar içi kateter açıklığını onaylamak için, steril% 0.9 tuzlu su 1-2 ml kateteri yıkayın. Propofol (5 mg / kg) ve fentanil (/ kg 10 ug) bolus enjeksiyonları uygulayın. Bolus enjeksiyon yönetimine müteakiben steril% 0.9 tuzlu su 1-2 ml kullanarak intravenöz kateter ikinci kez yıkayın.
   3. Iki ayrı bir şırınga infüzyon pompalarında propofol (10 mg / ml) ve fentanil (10 ug / mi) ile bir yer şırınga. Intravenöz kateter bağlı olan tek bir satır halinde infüzyon katılarak üç yollu iki şırınga pompaları iv tüpleri bağlayın. Sürekli propofol infüzyonu (4-12 mg / kg / saat) ve fentanil (10 ug / kg / st) başlatın. Sürekli infüzyon çalışan sonra, propofol ve fentanil ek bolus enjeksiyonları vermeyin.
   4. Sevofluran gaz ANEST durdurulmalıdır yönetimilerine.
   5. Antibiyotik profilaksisi için yerel kurallar uyarınca intramüsküler prokain benzilpenisilin (15,000 IU / kg) deri altından veya enjekte edilir. Günlük tekrarlayın. Video domuz yavruları im tatbikat ile karşılaştırıldığında daha yüksek bir plazma konsantrasyonu ve daha uzun yarı ömür ile sonuçlandığı gösterilmiştir SC uygulamasına göstermektedir.
   6. Gözlerin kurumasını önlemek için göz yağlama merhem sürün. Bir cep şeklindeki açıklık oluşturmak için yavaşça alt göz kapağını aşağı çekin. Cebin içinde merhem küçük bir miktar sıkın. Kapat göz merhemi dağıtmak için. Kuruluk saatlik kontrol edin ve gerekirse yeniden uygulayın.
   7. % 5 dekstroz, sürekli bir infüzyon hızı / 10 ml / kg / saat% 0.45 NaCl iv başlatın. Sırasında ve hipoksi sonrasında 5 ml / kg / saat hızını azaltın. 2-10 mmol / L arasında kan şekeri düzeylerini korumak için infüzyon hızı ayarlayın.

Figuanestezi ve entübasyon 1. donatım yeniden. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

3. Entübasyon ve Havalandırma

1. Entübasyon için gerekli ekipman (Şekil 1) hazırlayın: açılması için roküronyum bromür (1 mg / kg) kas gevşemesi için, bir halat sapan (Şekil 1'de gösterildiği gibi aynı 4 mm naylon halat iki ucunu kravat birlikte bir daire oluşturacak şekilde) ağız, pamuklu bir düz bıçak Xylocaine sprey (100 mg / ml), manşon olan çeşitli büyüklükte endotrakeal tüpler, 500 mi kendinden şişen torba (3.0 mm, 2.5 mm, 2.0 mm tipleri) (torba valf bezi ve veteriner larengoskop uçlu havalandırma, manşet enflasyon ve stetoskop için 2 ml şırınga için) maske.
2. Aşağıdaki adımları izleyerek entübe:
   1. Her taraftan boynunu destekleyen yatar pozisyonda yerleştirin piglet düz bir laringeal pas güvenlientübasyon için adaçayı.
   2. Sternal çentik (genellikle yaklaşık 13 cm) burun ucundan ölçerek endotrakeal tüpün uzunluğu tahmin edin.
   3. Üst çene etrafında Yeri halat sapan (aşağı bakan) ve açık ağzı tutmak için yukarı alt çene ve dil tutun.
   4. Kas gevşemesini teşvik etmek için rokuronyum bromür (1 mg / kg), iv uygulayın.
   5. Yukarı dilini kaldırmak için laringoskop kullanın.
   6. Pamuk ya da yemek borusuna retrovert veya yumuşak damak arkasında yakalanmış olabilir Piglet uzun epiglottis, ücretsiz bez uçlu kullanın.
   7. Aritenoid kıkırdaklar ve ses tellerinin tam görünüm sağlayan dil kökünde karşı kaldırdı epiglottis tutmak için laringoskop Advance.
   8. Laringeal spazmları önlemek için larinks topikal xylocaine spreyi (100 mg / ml) uygulayın.
   9. Ses tellerinin sayesinde endotrakeal tüp ilerletin. Dar trakea kıkırdaklarının geçişini yardımcı olmak için bir dönme hareketi kullanın. Peşin tüp maille Hesapönceden ölçülmüş mesafe rding ve manuel ventilasyon için kendi kendine şişen torba (poşet valf maske) bağlanın. Xylocaine spreyi ile endotrakeal tüpün distal 1/3 sprey entübasyon sırasında sürtünmeyi azaltmak için.
   10. Doğru endotrakeal tüp yerleştirme onaylamak için: nefes almada zorluk herhangi bir endikasyon için gözlemlemek, her iki akciğerde içine ikili hava girişi için dinleme göğüs ausculate, görsel endotrakeal tüpün proksimal yönünde yoğunlaşma varlığını teyit ve end tidal karbon varlığını doğrulamak kolorimetrik karbondioksit dedektörü ile veya varsa mekanik ventilatöre bağlı ekspiratuar CO ₂ okuma ile dioksit. Normal end tidal karbondioksit% 5 civarında olduğunu. Bir normal görünümlü dalga ile birlikte% 2 üzerinde bir değer endotrakeal tüp trakea olduğunu teyit edecektir.
   11. Aspirasyonu önlemek için endotrakeal tüp şişirin. Olmalıdır Kol hava basıncı en az 25 cm iskemik hasarı engellemek için _H2O çevredeki dokuya. Yerinde endotrakeal tüpü tutarak, tüpün etrafında bant parçası rüzgar, çene kapatın ve yerine tüp sabitlemek için burnu etrafında bantlama devam edin. Yavaşça yerinde kalmasını sağlamak için tüp çekin.
   12. Mekanik ventilatöre endotrakeal tüp bağlayın.
3. Ventilatör ayarlarını yapma: hacim kontrollü ventilasyon, tidal volüm (TV): 10 ml / kg [veya tepe inspiratuar basıncı 15 cm basınç kontrollü ventilasyon ile (PIP)]. Pozitif ekspirasyon sonu basınç (PEEP): 5 cm. I: E oranı 1: 2. Solunum hızı: 35 (4.5-5.5 kPa arasındaki end-tidal CO ₂ korumak için hızını ayarlamak).

4. İzleme ve Vücut Sıvısı Örnekleme

Izlemek için 2. Ekipman rakam.ank "> bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.

1. Sürekli rektal sıcaklık ölçümü, elektrokardiyografi (EKG) elektrotlar, pulse oksimetre, jilet ve EEG elektrotları için yapışkan bant, steril yağlayıcı, sonda: izleme (Şekil 2) için gerekli ekipman hazırlayın.
   1. Bir arka bacak üzerine yerleştirin doygunluk probu, rektal sıcaklık probu yağlayın ve rektum içine 6 cm yerleştirin 38,5-39 ° C fizyolojik düzeyde rektal sıcaklığı korumak için havai radyant ısıtıcı ve / veya ısıtılmış şişme hava yatağı yerleştirin ve yer EKG elektrotlar.
   2. Derialtı iğne EEG elektrotları yerleştirilmesi için 1 cm x 1 cm alanlarını tıraş yüzüstü pozisyonda piglet yerleştirin; Her kulağın önünde tek ve sadece gözlerinin arkasında orta hatta referans elektrot. Alkollü bir bezle temizleyin elektrot sitesini, daha sonra iğne elektrot deri altına yerleştirin. Sırtüstü po yapışkan bant ve dönüş domuz yavrusu ile güvenli elektrotlarlan de.
   3. AEEG monitörü açın.
      NOT: EEG entegre genlik üst ve alt kenar boşlukları ile yoğun bir iz oluşur. Bu modelde Alt ve üst kenar boşlukları genellikle bebeklerde görülen genellikle daha yüksektir 15-50 mV vardır. Hipoksi sırasında EKG o eser yanlış aEEG iz yükseltebilir, dikkat etmek önemlidir. Bolus ilaçlar (propofol veya fentanil) da geçici aEEG iz baskılayabilir ve deney sırasında mümkünse kaçınılmalıdır. Ilaç ve klinik olayların İdaresi aEEG izi yorumlanmasını kolaylaştırmak için işaretlenmiş olmalıdır.
2. Steril eldiven, steril örtü, neşter, alkol bezlerden, steril mendil, göbek ven kateteri (5 Fr), umbilikal arter kateteri (3.5 Fr: merkezi arteriyel kan basıncı takibi ve kan örneklemesi (Şekil 3) için göbek kateterleri yerleştirmek için gerekli olan ekipman hazırlayın ), dikiş forseps, kavisli mikro forseps, makas, iğne tutucu ve sütür (setiÖrneğin, boyut 3-0), şeffaf yapışkan yama, kan örneklemesi için 5 ml şırınga.

Göbek hatları ve kan örneklemesi için 3. Ekipman rakam. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

3. Sterilize ve göbek çevresi asmak. Mümkün olduğunca cilde yakın göbek bağını kesmek için bir neşter kullanın. Bu anestezi Piglet umbilikal damarların maruz etmezse, damarları ortaya çıkarmak için göbek cilde göbek kordonu altında 2 mm kesti. Iki küçük göbek arterler ve daha büyük bir göbek ven (Şekil 4) belirleyin.
4. Arter (Şekil 4) dilate ve umbilikal arter kateter eklemek için kavisli mikro forseps kullanın(3.5 Fr). 3 x ağırlık cm Tahmin ekleme uzunluğu (kg) + 10 (otopsi renal arterlerin üzerinde inen aorta doğru yerleştirme dayalı ampirik formülü).
5. İkinci 5 Fr kateter göbek ven içine 5 cm (Şekil 4) yerleştirin. Kan dönüşü ile intravasküler kateter yerleştirme doğrulayın. Göbek etrafında bir çanta-string sütür koyarak Güvenli kateterler, dikiş göbek kateterleri her etrafında biter geçmesine ve bir düğüm. Yapışkanlı örtü ile kateterler örtün.
6. Önceden belirlenmiş zaman noktalarında kan örnekleri toplamak: 45 dakika hipoksik hasara 4) hipoksik saldırıdan sonra 2 st sonunda hipoksik hasara 3) içine 1) derhal hipoksi önce 2) 30 dakika. Kan örnekleri için deney diğer zaman noktaları amacına bağlı olarak seçilebilir.
7. Hipoksi-iskemi (Tablo 1) yol açtığı kan gazı değişiklikleri doğrulamak için hipoksi esnasında alınan kan örneklerinden arter kan gazı analizi kullanın. Domuz yavrusu düşük hemoglobin a sahip olduğunu unutmayınt doğum ve (8 g / dL civarında) sık kan örnekleme anemik hale gelebilir. 24 saat içinde beraberlik başına en az 2 ml kan / kg vücut ağırlığı, en az 5 ml kan / kg vücut ağırlığı çekiniz ve kan örneklemesi için yerel yönergelere uygun. Anemi belirtileri hematokrit ve taşikardi azalan içerir.
8. Intra-arteriyel kan basıncı izleme (MABP) devam için bir monitöre arteriyel hattı bağlayın. Sıvı ve ilaç uygulaması için venöz hattını kullanın.

4. Göbek damarları Şekil. Umbilikal ven (sağda) ve iki göbek arterler (solda) birini. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

5. hipoksi

1. Izleme tamamladıktan sonra 60 dakika bekleyin. % 4 O ₂ geçerek hipoksi øndükle /% 96 N ₂ gaz karışımı. Yakından hayati parametreleri ve aEEG izlemek ve 45 dk hipoksi devam ediyor.
2. AEEG iz (üst kenar boşluğu <7 mV) düz sonra, ilham oksijen fraksiyonu (FiO ₂₎ değiştirerek oksijenasyonu ayarlayın ve Şekil 5'te gösterilen akış şemasına göre aEEG düz bir iz muhafaza yüksek FiO ₂ seviyesine ortalama hava yolu basıncı. En az 10 dakika süreyle bazal% 70 altında MABP için Amaç ve alt FiO ₂ gerekirse hipotansiyon ve iskemi sağlamak. Hipotansiyon tarif edilen seviyesi daha önce ilgili hipoksik iskemik beyin yaralanması meydana getirmek için diğer ^19,13,30 tarafından gösterilmiştir.
3. Ciddi hipotansiyon durumunda (MABP <25 mm Hg) aşağıdaki şekilde kademeli olarak tedavi: kısa bir süre için% 1-5 FiO ₂ geliştirmek, tuzlu su, bolus (10 ml / kg), dopamin infüzyonu (5-20 ug / kg / dk), ve noradrenalinin (20 ng-1 ug / kg / dak) infüzyonu.
4. > 10 dakika süren nöbetler halinde (klonik, tonik or miyoklonik nöbetler, genellikle fokal veya aEEG genliği ani değişiklikler) tarafından belirtildiği gibi () aşağıdaki enjeksiyon geçmeden önce 30 dakika izin ile adım adım tedavi: fenobarbital iv 20 mg / kg tekrarlayın fenobarbital iv 20 mg / kg yavaş bolus ve midazolam iv 0.5 mg / kg'dır.
   1. Nöbetler gelişebilir ve ilaç tedavisi ötanazi yanıt vermeyen iseniz gösterilir.

Oksijenasyonda ayarlamaları gösteren Şekil 5. hipoksi-iskemi akış şeması. Akış aEEG yanıta göre (F _i O ₂ ve P _aw). Havayolu basıncı (P _aw) Ortalama PIP / TV (düşük PIP alt P _aw verir) ve solunum hızı değiştirilerek ayarlandı (düşük RR alt P _aw verir). AEEG = Üst iz marjı <5 mV ve iz alt marjı> 3 uV (ortalama 4 mV) hedefleyin. HedefKalp atım hızı (KAH) => 80. Hedef ortalama arteriyel kan basıncı (MABP) = MABP> 25. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

6. 72 saat sağkalım

1. Hipoksik hakaret sonra yakından piglet Monitör ve yavaş yavaş propofol ve fentanil infüzyon oranlarını azaltmak. Hayvan gönüllü nefes edildiği noktada Tüpü.
2. Yaşam süresi boyunca, yoğun bakım ve izleme eğitimli personel tarafından 24 saat seyretmek ile bir hayvan tesisinde domuz yavrusu tutun. Iv glukoz infüzyonları 20 ml yönetme / saatlik 2-3 kg. Hipoksi-iskemi kısmi şişe beslenme sonrası 26-48 saat sonra başlatılabilir. Öğürme refleksi mevcut değilse trakea ve akciğerlere aspirasyon biberonla besleme yoluyla oluşabilir.
3. Deney ile ilgili ise, Thoresen ve ark tarafından geliştirilen puanlama sistemi kullanılarak nörolojik durumlarını değerlendirmek., TarifOrijinal yayında ¹⁷ ayrıntı.

7. Sonuç Değerlendirmesi

1. 72 saat sonra, uyutmak ve 2. bölümde açıklanan ve 3. Munkeby ark ³¹ ve diğerleri ² tarafından açıklandığı gibi MR ilgili görüntüleme yöntemleri ile tarama gerçekleştirin tekrar havalandırın.
2. Deneyin sonunda pentobarbitalin letal dozu ile domuz yavrusu euthanize (5 g / kg, iv).
3. Deneyin amaca göre muayene için beyin hazırlayın.
   1. Formalin sabit doku beyin histoloji için.:. Robertson ve diğ ² tarafından tarif edildiği gibi paraformaldehid diseksiyon ve sonrası sabitleme ardından PBS içinde% 4 paraformaldehit ile kardiyak perfüzyon, kullanım Chakkarapani ark ¹ veya Liu ve diğerleri, ¹⁸ ya da beyin kaldırmak Andresen ve arkadaşları tarafından tarif edildiği gibi ve% 4 paraformaldehid içinde bırakın. ³²
   2. Analiz için Snap-dondurulmuş doku gerektiren (örneğin, RNAAnaliz veya enzim aktivitesi deneyleri, ^33). ilgi beyin bölgelerini teşrih, beyin çıkarın ve ek dondurularak azami 1 cm'lik doku blokları sıvı azot içinde x 1 cm Munkeby ve arkadaşları tarafından tarif edildiği gibi ³³

Sonuçlar

kaynaklı hakaret sırasında meydana beyinde hipoksi-iskemi etkileri aEEG izini kaydedilerek belgelenmiştir. Temsili aEEG izi, Şekil 6'da gösterilmiştir.

Şekil 6. Temsilcisi aEEG iz. Nedeniyle hipoksi-iskemi Düşük genlik. Bu rakamın büyük halini ...

Tartışmalar

Nedeniyle karmaşıklığına, açıklanan model sadece akredite tesislerde uygulanabilir ve hayvan araştırmalarında deneyimli. Yerel etik komiteler tarafından onaylanması öncesinde deneylerin başlamasından alınmalı ve optimum hayvan refahı her zaman sağlanmalıdır. Model test hayvanlarının hayatta kalma dayanmaktadır gibi, steril bir ortam enfeksiyonları önlemek için invazif prosedürler esnasında muhafaza edilmesi önemlidir.

tüm anestezik ilaçların potansiyel nöro-...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Warm-touch-pediatric blanket	Covidien	5030840
Adhesive Apertrue Drape	Barrier	915447
Utility Drape (sterile) 75x80 cm	Barrier	800530
Neoflon	BD - Luer	391350
Laryngoscope	Miller	85-0045
Endotracheal tube 2.5 mm	Covidien	111-25
Endotracheal tube 3.0 mm with cuff	Unomedical	MM61110030
Endotracheal tube 3.5 mm with cuff	Unomedical	MM61110035
Anesthesia machine	GE Healthcare	1009-9002-000
EEG - electrodes/disposable subdermal needle electrode	Cephalon	ACCE120550
ECG - electrodes	medtronic	3010107-003
ECG-electrodes for MR	philips	ACCE120550
Arterial blood sampler - aspirator	Radiometer medical ApS	956552
Polyurethane Umbilical vein catheter (5 Fr/Ch)	Covidien	8888160341
Polyurethane Umbilical vein catheter (3,5 Fr/ch)	Covidien	8888160333
Suture set (size 3-0)	Covidien	8886 623341
BD Spinal needle 0.7x38mm	BD needles	405254
Gas with 96% Nitrogen / 4% oxygen	Air Liquide	made on order
NeuroMonitor (CFM) system	Natus Medical Incorporated	OBM70002