JoVE Logo

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Here we present a protocol to assess cardiopulmonary function in awake swine, at rest and during graded treadmill exercise. Chronic instrumentation allows for repeated hemodynamic measurements uninfluenced by cardiodepressive anesthetic agents.

Özet

Bu protokol, kronik enstrüman domuz ve bir motorlu koşu bandı üzerinde domuz egzersiz prosedüre cerrahi prosedür açıklanmaktadır. kardiyopulmoner fonksiyon genellikle anestezi gerektiren, invaziv ölçülür erken kardiyopulmoner fonksiyon bozukluğu, özellikle hayvan modellerinde, teşhis edilmesi zordur. Birçok anestezik ajanlar Kardiyodepresif olduğundan, kardiyovasküler fonksiyonu ince değişiklikler maskeli olabilir. ölçümler anestezi ve akut cerrahi travmanın etkileri olmaksızın sakin bir dinlenme koşulları altında elde edilebilir ve böylece zıt durumda, kronik cihazlar, uyanık halde kardiyopulmoner fonksiyonunun ölçülmesini sağlar. hayvanlar düzgün eğitimli zaman Dahası, ölçümler de derecelendirilmiş koşu bandı egzersiz sırasında elde edilebilir.

Akış sondaları Coron ölçümü için inen koroner arter kalp debisi ölçümü ve sol ön etrafında aort veya pulmoner arter etrafına yerleştirilirli kan akışı. Sıvı dolu kateterler basıncı ölçümü ve kan örneklemesi için aort, pulmoner arter, sol atrium, sol ventrikül ve sağ ventrikül implante edilir. Buna ek olarak, bir 20 G kateter koroner venöz kan örnekleme izin vermek için ön interventriküler damar konumlandırılır.

iyileşme bir hafta sonra, 3 dakika süren her aşaması ile, beş kademeli egzersiz protokolüne domuz kateterler basınç ve debi metre bağlandığında, bir motorlu koşu bandı üzerinde yerleştirilir ve domuz tabi tutulur. Hemodinamik sinyalleri sürekli olarak kaydedilir ve kan örnekleri her egzersiz aşamasının son 30 saniye boyunca alınır.

Kronik instrumented hayvanları okuyan büyük avantajı dinlenme değil, aynı zamanda egzersiz gibi fiziksel stres sırasında değil, sadece kardiyopulmoner fonksiyonun seri değerlendirmesini izin vermesidir. Ayrıca, kardiyopulmoner fonksiyon hastalığı geliştirme a sırasında sürekli olarak değerlendirilebilirND, kronik tedavi sırasında, bu şekilde istatistiksel gücünü artırmak ve dolayısıyla çalışma için gerekli hayvan sayısını sınırlar.

Giriş

Yeterli kardiyopulmoner fonksiyon özellikle de egzersiz 1 sırasında olduğu gibi artan metabolik talep koşulları sırasında, oksijen ve besin ile vücut tedarik esastır. Egzersize kardiyopulmoner tepki kalp fonksiyonu, yani uyarlamalar bir dizi ile karakterizedir., Egzersiz kasları besleyen vasküler yataklarda kalp atım hızı, kontraktilite ve atım hacminde ve mikrovasküler fonksiyon, yani, vazodilatasyon bir artış yanı sıra pulmoner gibi gastrointestinal sistem tedariki vasküler yatak yanı sıra inaktif kasları 1 damar ve vazokonstriksiyon. Bozulmuş egzersiz kapasitesi kardiyopulmoner disfonksiyonun erken özelliğidir ve kardiyopulmoner egzersiz testleri bozulmuş egzersiz kapasitesi 2 olan hastalarda kardiyak disfonksiyon, vasküler disfonksiyon ve / veya pulmoner disfonksiyon arasındaki tanımlamak için etkili bir yöntem olarak kullanılmaktadır. Erken kardiyopulmoner disfonksiyon D,kardiyopulmoner fonksiyon genellikle anestezi gerektiren, invaziv ölçülür olarak ifficult birçok anestezik ajanlar Kardiyodepresif özellikleri 3 haiz olan, özellikle hayvan modellerinde, teşhis etmek.

Kronik enstrümantasyon uyanık halde kardiyopulmoner fonksiyon ölçümü için izin verir, ve hayvanlar tamamen laboratuvar koşulları ölçümlere göre ayarlanmıştır zaman anestezi ve akut cerrahi travmanın etkileri olmadan sessiz istirahat koşullarında elde edilebilir. Hayvanlar eğitilmiş Dahası, ölçümler de kademeli koşu bandı egzersizi 4,5 sırasında elde edilebilir. Daha spesifik olarak, sol ve koroner sistemik ve pulmoner mikrosirkülasyondaki vazomotor sesi düzenlenmesi tespit edilebilir ise sağ ventrikül fonksiyonu, değerlendirilmesi ve miyokard perfüzyon ile ilgili olabilir. sıvı dolu kateter kullanımı reklamı empoze olmadan basınç ölçümünü yanı sıra alarak kan örneklerini veriyorHayvanlar üzerinde neksel stresi. Kronik olarak hayvanlar üzerinde çalışılarak bir diğer avantajı, kardiyopulmoner egzersiz testi, bu şekilde istatistiksel gücünü artırmak ve dolayısıyla çalışma için gerekli hayvan sayısını sınırlama hastalık gelişimi esnasında veya kronik tedavi sırasında ya kendi kontrolü olarak bir hayvan kullanımına izin tekrarlanabilir olmasıdır .

Domuz Kardiyopulmoner anatomisi, insanlarda bu benzer ve diyabet 6, miyokard enfarktüsü 7, pulmoner hipertansiyon 8,9 ve ilerleme hızı kaynaklı kalp yetmezliği 10,11 olarak kardiyopulmoner hastalığın çeşitli biçimlerini oluşturmak mümkündür. Ayrıca, domuz boyutu sadece kan gazlan analiz etmek için değil, aynı zamanda nörohumoral ölçümler yapmak için ve / veya hastalığın biyolojik aramak için, kronik aletleri ve yeterli miktarda tekrarlanan kan örnekleme sağlar.

Bu protokol, kronikleştiriyor için kullanılan cerrahi tarifly enstrüman domuz yanı sıra motorlu koşu bandı üzerinde domuz egzersiz için protokol.

Protokol

Hayvan denekleri Prosedürleri Erasmus Tıp Merkezi Rotterdam Hayvan Bakım Komitesi (NL) tarafından onaylanmıştır. 6 ve 80 kg arasında ağırlıklar ile domuz başarıyla bu protokolü kullanarak Enstrümante edilmiştir.

İnsan Taşıma için Hayvanların 1. Adaptasyon

  1. tesis geldikten sonra, yalnız hayvanların ev ama birbirleri ile etkileşim sağlayacak.
  2. en az günde bir kez bir hafta boyunca hayvan ele alarak, deneysel laboratuvara hayvan tesis insan taşıma ve ulaşım domuz Accustomize.
  3. Ameliyat öncesi üç kez en az koşu bandının üzerinde onları egzersiz yaparak bir motorlu koşu bandı üzerinde egzersiz deneyler için uygun hayvanlar eğitin.
  4. Hayvanlar kusma ve mide sıvılarının böylece potansiyel aspirasyon, mide bulantısı önlemek için O / N ameliyattan önce aç olmalıdır.

Cerrahi 2. Hazırlık

  1. yatıştırma
    1. 10 ml'lik bir şırınga içinde sedasyon için ilaç hazırlayın. Premedikasyon tiletamine / zolazepam (5 mg / kg), ksilazin (2.25 mg / kg) ve atropin (1 mg) oluşur.
    2. domuz uyutmak için bir 19 G 1.5 '' iğne ile trapezius kasında ilaç intramüsküler enjekte edilir.
    3. Yaklaşık 10 dakika bekleyin ve sedasyon uygun ve istikrarlı bir seviyede onaylamak için kas gevşemesi ve bilinç olmadığını kontrol edin.
    4. anestezi ve / veya sıvıların sonraki intravenöz uygulama için bir kulak vende 20 G periferik güvenlik kateter yerleştirin.
  2. Entübasyon ve Havalandırma
    1. yatar pozisyonda bir tablo ve / veya arabası hayvan yerleştirin.
    2. oral dağıtıcı ile hayvanın ağzını aç.
    3. çeneleri veya entübasyon engel refleksleri, yutma varlığı yetersiz gevşemesi durumunda, kulak ven kateter yoluyla damardan tiyopental (10 mg / kg) yönetmek. Seçenek olarak ise, pik maskelenebilirizofluran ile sedasyon ikna etmek.
    4. laryngoscopist doğrudan larinksi görüntülemek için izin vermek için bir ışık ve bir Miller bıçak ile geleneksel laringoskop kullanın. laringospazm varsa, spazm azaltmak ve entübasyon sağlamak için kordonlar ve larinks% 2 lidokain uygulayın.
    5. tüp üst solunum yolu anatomisine daha iyi uyum sağlamak ve ağız yoluyla ve trakea içine ses tellerinin arasındaki tüp geçmek endotrakeal tüpe bir Entübasyon stile yerleştirin.
    6. Solunum gazlarının sızmasını önlemek için, ve mide sıvısının olası aspirasyon hava yolları korumak için, bir yerde güvenli hale getirmek için bir 10 ml şırınga ile balon şişirin.
    7. Bir nefes filtre (ısı ve nem eşanjörü) ve mekanik ventilatöre tüp bağlayın.
    8. Cerrahi masaya onun sağ tarafta hayvan yerleştirin.
    9. , Ç: oksijen ve azot ile (2 hacim / hacim 1) oluşan bir karışım ile hayvan havalandırın, 100-120 mmHg pO2 seviyelerini elde etmek içing aşağıdaki ventilatör ayarları: Basınç kontrol modu: pozitif ekspirasyon sonu basınç (PEEP) 4 cmH2O; tepe inspiratuar basıncı 16-18 cmH2O; hayvanın büyüklüğüne bağlı olarak frekans solunum bu ~ 10 ml / kg bir gelgit hacmi ile sonuçlanabilir kapnografiye olan havalandırma izlemelidir (20 kg hayvan için, artan vücut ağırlığı ile sıklığını azaltabilir).
    10. rektal termometre kullanarak sıcaklığını izlemek ve 37 arasında sıcaklık korumak - bir ısı lambası veya ısı paspas kullanarak 39 ºC. Ayrıca, elektrokardiyografi ile kalp atışlarının izlenmesi.
  3. Anestezi
    1. Neden ve kulak damarı kateterinin ile fentanil (10 ug / kg / saat) damardan tatbikat alternatif olarak solunum gazı-karışıma izofluran (h / h) ya da% 2.0 ilave edilerek anestezi tercihen korur.
    2. Ameliyat başlamadan önce bir arka bacak ayak tutam ağrı refleksleri test ederek anestezi yeterli derinliğini kontrol edin. Gerektiğinde, eklemekEk anestezi ya da birkaç dakika bekleyin. ameliyat boyunca düzenli olarak ağrı refleksleri kontrol edin.
  4. Sıvılar ve Antibiyotikler
    1. damar içine, kulak damarı kateterinin ile amoksisilin (25 mg / kg) birinci doz yönetmek.
    2. Ameliyat sırasında 10 glikoz (% 500 mi) yavaş yavaş infüzyon sağlamak için kulak damarı kateterinin yapılacak bir bağlantı sistemi.
  5. Cerrahi Site Sterilizasyon
    1. Tıraş ve tüm yol sol koltuk altına vertebral kolon yaklaşık 25 cm genişliğinde bir alan üzerinde hayvanın cilt temizlemek.
    2. yaklaşık olarak 5 dakika boyunca povidon-iyot fırçalama (75 mg / ml) ile nemli cilt sürtünür.
    3. povidon-iyot losyon (100 mg / ml) ile cilt sterilize önce, ıslak steril kompres ile deriden povidon-iyot sabun çıkarın.
    4. cerrahi bölgenin bakteriyel transferi ve sonraki kirlenmeyi azaltmak için steril cerrahi örtüler ile hayvan örtün.

3. Cerrahi

  1. Açılış Toraks (Torakotomi)
    1. Aşağı sol koltuk altına skapula sol alt açı 1 cm kaudal (Şekil 1) başlayarak, deride bir kesi yapmak. aşırı kanama önlemek için ciltteki kan damarları dağlamak için diatermi kullanın.
    2. diathermy kesme yöntem kullanılarak, serratus kas ve pektoralis majör kası kesti. Ayrıca aşırı kanama önlemek için kas tabakasında kan damarlarını dağlamak için diatermi kullanın.
    3. dikkatli bir sivrisinek kelepçe ile dördüncü sol interkostal alanı interkostal kas bölmek için künt diseksiyon kullanın. Şimdi visseral ve parietal plevra ile kaplı sol akciğerde kıyı yüzey maruz olmalıdır.
    4. plevra boşluğuna girmek için, dikkatlice plevra iki katmanı delmek ve onları açık gözyaşı.
    5. yaranın kenarlarını ve kaburga ayırmak için göğüs retraktörü kullanın ve zorla dokuları sürücüdışında plevra boşluğunun iyi pozlama elde etmek için.
    6. kaudal yönde sol akciğer uzaklaştırdığına ve ıslak bir gazlı bez ile yerde saklayın. Şimdi kalp ve büyük damarlar açıkça maruz olmalıdır.
  2. Kateter ve Akış Sondalar Yerleştirme (Şekil 1)
    1. ~ Inen torasik aortun çevreleyen bağ dokusunun 2 cm 2 kaldırmak için künt diseksiyon kullanın.
    2. olmayan bir emilebilir USP3-0 örgülü ipek sütür (Ø0.2 mm) aort duvarında, üç dikiş oluşan bir çanta-string sütür gerçekleştirin.
    3. purse-string sütür ortasında bir paslanmaz çelik 16 G iğne ile aort damar duvarına nüfuz.
    4. , Aort içine (halka kadar) sıvı dolu kateter ucu takın sıkıca birbirine purse-string sütür çekin ve sütür iki dizeleri kravat.
    5. t halka yukarıda ve tekrar sütür kateter etrafında 3 kez rüzgar, yerinde kateter tutmak içinsütür iki dizeyi yani. Dahası ekleme yerden yaklaşık 1 cm kafatası yeni bir dikiş ile kateteri sabitleyin.
    6. Ameliyat sırasında ortalama arter basıncını izlemek için, bilgisayara bağlı olan kalibre basınç dönüştürücü, sıvı dolu kateter bağlayın. doğrulamak veya doğru havalandırma ayarları ayarlamak için bir kan gazı edinin.
    7. bir çapraz kesim ile perikard açın. sağlam perikard üzerinde çalışan frenik sinir tutmak için dikkatli olun.
    8. pulmoner arter tespit ve Farabeuf retraktörü ile kaudal yöne doğru hafifçe çekin. Şimdi çıkan aort ve arkus aorta maruz olmalıdır. pulmoner arter geri çekilmeden ise ortalama arter basıncı izleyin.
    9. çıkan aort ve Metzenbaum makas kullanarak pulmoner arter arasında bağ dokusunda küçük bir kesim (~ 1 cm) yapmak, büyük bir kavisli ile çıkan aort veya pulmoner arter ya incelemek mümkünsivrisinek kelepçe akış probu yerleştirmek için.
    10. geminin etrafında akış prob lastik bant yerleştirin. kolay bu, lastik bandın bir ucundan bir dikiş yerleştirmek yapmak için, geminin etrafında bu sütür yerleştirin ve lastik bant gemi çevreleyen kadar çekin.
    11. lastik bant akış probu ölçüm cihazı sabitleyin. bilgisayara akış probu bağlayın ve akış probu doğru yerleştirme onaylamak için bilgisayarda kardiyak output sinyalini kontrol edin.
    12. Aort sıvı dolu kateter (- 3.2.5 3.2.2) için tarif edildiği gibi aynı şekilde pulmoner arter sıvı dolu kateterler, sağ ventrikül, sol ventrikül ve sol atrium yerleştirin. yapılarda bir purse-string sütür yapmadan önce bağ dokusu kaldırmak için gerekli olmadığını unutmayın.
    13. Metzenbaum makasla kesilmiş - (3 mm 2) Açığa ve ilk forseps ile doku kaldırma ve küçük yaparak koroner arter sol ön inen proksimal kısmının dissekeDikkatle bir pamuklu çubuk ile uzak arter doku alay izledi. altında küçük bir düz açılı sivrisinek kelepçe geçirilerek koroner arterin tam diseksiyon emin olun.
    14. koroner venöz kateter bağlı bir sütür, anterior interventriküler koroner damara bir dikiş paralel yapın.
    15. Koroner venöz kateter 20 G iğne ile koroner damar delinme ve intravenöz kateter kanül yerleştirin.
    16. İğneyi çıkarın ve zaten yapılan dikiş (3.2.14) ile kateter sabitleyin. Dahası, ilk ponksiyon yerden yaklaşık 1cm yeni bir dikiş ile kateteri sabitleyin.
    17. inen koroner arter önce disseke sol ön etrafında koroner akım probu yerleştirin. arter dar ve zor görünür olduğunda, geminin daha iyi bir pozlama elde etmek geminin dinlenmek için lidokain% 10 sprey kullanın. conf için bilgisayarda koroner akım sinyali kontrolIRM akış prob doğru yerleştirmenin (Şekil 2).
  3. tünel açma
    1. Tünel ayrı ayrı kas altında soldan üçüncü interkostal uzayda ve büyük kavisli sivrisinek kelepçe kullanarak kaburga üzerinde akış sondaları.
    2. Tünel üçüncü ya da interkostal kas delerek beşinci sol interkostal ya içinden sıvı dolu kateterler. sıvı dolu kateter kapalı Kelepçe ve delici alanı en aza indirmek ve tünel boyunca sıvı dolu kateter sızmasını önlemek için üç yollu stopcock çıkarın.
    3. interkostal kas üzerinde bir kese dize sütür vasıtasıyla emilmeyen USP2-0 örgülü ipek (Ø0.3 mm) akış sondaları ve sıvı dolu kateterler Fix. Bu dikiş de yeniden instating negatif intratorasik basınç sonra hava sızıntısını önlemek için hizmet vermektedir.
    4. Vertebral kolon yaklaşık 2 cm uğursuz ve paralel deride üç insizyon, yaklaşık 3 cm olunuzunluğu birbirinden ayrı 3 cm.
    5. arkasındaki kesiler rostralinde kesi sitesinden sol latissimus dorsi kasında altında bir trokar delmek. Tünel bu trokar içinde arka akış sondaları ve sıvı kateterler.
    6. sıvı dolu kateterler üzerinde stopcocks yerleştirin ve kelepçeyi çıkarın. 1,000 IU / ml heparin ile sıvı dolu kateter pıhtıları ve hava kabarcıkları ve doldurmak için kan alınır. Koroner venöz kateterler 5,000 IU / ml heparin ile doldurulmalıdır.
  4. Toraks kapanış
    1. İlk kesi bir yaklaşık 1,5 cm uzunluğunda, 8 cm kaudal ve paralel bir kesi yapmak.
    2. subkutan büyük kavisli sivrisinek kelepçesi ile bu kesi altıncı interkostal kas yoluyla plevra boşluğunda drenaj Kurşun. Kalan sıvıyı çıkarmak ve toraks kapanması sırasında plevral boşlukta negatif basınç yeniden emme cihazına drenaj bağlayın.
    3. Rahatlatmak ve şişirmekBir inspirasyon sonu beklemeye akciğer. görsel izleme akciğere yeterli doldurulmasını sağlamak.
    4. Birlikte emilmeyen USP6 örgülü polyester (Ø0.8 mm) iki ayrı sitelerde dördüncü interkostal alanı kaburga çekerek toraks kapatın.
    5. Çalışan bir dikiş ve emilmeyen USP2-0 örgülü ipek kullanılarak çalışan subkütiküler dikiş ile cilt ile serratus kas ve pektoralis majör kas kapatın (Ø0.3 mm)
    6. kateter arasındaki emilmeyen USP2-0 örgülü polyester (Ø0.3 mm) sırt tarafında kesiler dikilmelidir. İlk deriden bir düğüm ile sütür 1 cm kateter sonra, kesi yakın sabitleşmek için cildinize doğrudan bir düğüm atın. Akış prob için, akış probu tel dikiş (Şekil 1) kesilmesini önlemek için emilebilir USP2-0 örgülü poliglaktin (Ø0.3 mm) dikiş kullanır.
    7. kranial tarafındaki basınç uygularken dikkatli tahliye kaldırmakkesi plevral boşlukta negatif basınç korumak için. emilmeyen USP2-0 örgülü polyester (Ø0.3 mm) kullanılarak bir kese dize sütür ile kesi kapatın ve vazelin ile yara mühür.

figure-protocol-11919

Cerrahi Şekil 1. Genel Sol üst paneli:. Traş ve bleu satırlar arasındaki yatıyor sterilize edilmelidir hayvan, steril bir alan. insizyon bölgesi kırmızı noktalı çizgi olarak tasvir edilir. Alt Sol panel: kateterler ve akış sondaları Resim: sıvı dolu kateter (A), lastik bant (B) dahil olmak üzere aort / pulmoner akım probu, 20 G iğne (C) ve koroner akım probu (D) de dahil olmak üzere koroner venöz kateter. Sağ üst panel: kateterler ve akış sondaları yerleştirme şematik bakış. MAP, ortalama arter basıncı; Kor venöz, koroner venöz kateter; LAP, atriyal basınç sol; LVPsol ventrikül basıncı; RVP, sağ ventrikül basıncı; PAP, pulmoner arter basıncı; CO, kardiyak output; CBF, koroner kan akışı. Alt sağ panel: a. Dikişin ve bir düğüm dikiş boyunca yaklaşık 1 cm mesafe ile güvence altına geri çıkarken tünelli kateterler bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.

  1. cerrahi anestezi ve iyileşme sona ermesi
    1. Tüm kesi siteleri kapalı iken anestezi durdurun.
    2. gracilis kasında (0.015 mg / kg) im buprenorfin verilerek analjezi sağlamak.
    3. Hayvan bağımsız nefes zaman havalandırma durdurun ve ventilatörden trakeal tüp ayırın. Hayvan yeterince nefes alıp almadığını düzenli olarak kontrol edin.
    4. yara sıvısını absorbe etmek için kateter dışsallaştırdığını siteler arasında gazlı bez yerleştirin.
    5. se dış korumak içinkateterlerin gments, hayvana bir elastik yelek vermek ve suni koyun iki adet arasında kateterler paket.
    6. trakeal tüpün balonu söndürün ve hayvan yutma refleksini kavuşur zaman ekstübe.
    7. Bir Fentanil yavaş salınımlı yama vasıtasıyla uzun vadeli analjezi sağlamak (20 kg domuz için 12 ug / saat; vücut ağırlığı göre gücünü ayarlamak). analjezi yeterli teslim edilmesini sağlamak için (örneğin alt karın gibi) derinin ince bir parçası yama yerleştirin.
    8. Ev, tüm post-operatif dönem için ayrı ayrı hayvan. hayvan sıcak tutmak için ameliyat sonrası ilk hafta için bir ısıtma lambası sağlamak.
    9. Hayvan bağımsız içmiyor ise yeterli sıvı iv sağlayın.
    10. kan pıhtısı oluşumunu önlemek için - (5000 IU / ml 1000) sonra ilk tuzlu su ile dolum ve nihayet heparinli serum fizyolojik ile, pıhtıları uzaklaştırmak için kan çekerek, günlük sıvı dolu kateterler yıkayın. Herhangi bir hava kabar demlenmeye vermemeye özenles kateterleri kızarma sırasında.
    11. ameliyat sonrası enfeksiyonları önlemek için ameliyat sonrası iv günde 6 gün boyunca amoksisilin (25 mg / kg) yönetmek.
    12. Hayvan koşu bandı deneyleri başlamadan önce bir hafta boyunca kurtarmak için izin verin.

4. Koşu Bandı Deneyi (Şekil 2)

  1. (3.5.10) tarif edildiği gibi sıvı dolu kateterler yıkayın ve basınç dönüştürücüler için kızarmış kateterler takın. Sıcaklık düzeltilmiş kan gazı değerlerini elde edebilmek için rektal sıcaklığını ölçün.
  2. hava kabarcıkları nedeniyle sinyallerin sönümleme önlemek için tuzlu su ile basınç dönüştürücüler yıkayın. sırt tarafında elastik yelek basınç dönüştürücüler takın.
  3. amplifikatör basınç dönüştürücüler ve akış sondaları bağlayın. bilgisayar programında ölçme başlayın ve 0 mmHg havaya açık olma ile basınç dönüştürücüler ve akış sondaları kalibre (ve hayvana kapalı) ve bir manometre kullanarak 100 mmHg.
  4. akışkan kateterler basınç dönüştürücüler ile bir bağlantınız var bir şekilde üç yönlü stopcock geçin. kan basıncı hemen elde edilebilir unutmayın. Şekil ve genlik (Şekil 2) için sinyallerini kontrol edin.
  5. Gerekirse, karışık venöz ve arteriyel kan örnekleme için sıvı kateterler ya bir uzantısı hattı bağlayın.
  6. Hayvan koşu bandı üzerinde sessizce duran yanı sıra yalan olduğunda hemodinamiği ölçün. Ortalama kan basıncı 10 sn'lik bir zaman dilimi boyunca ölçülür.
  7. İlk olarak saf 1 ml kan heparinize 1 ml şırınga kullanılarak elde edilebilir, böylece bir 10 ml şırınga ile kan 5 ml geri çekerek arteriyel ve karışık venöz kan örnekleri elde edilir. Koroner venöz kan örnekleri için, 2 ml şırınga saf kan elde etmek yerine, 1 ml, 10 ml şırınga ve geri çekilme yeterlidir kullanılır.
  8. belirlemek için bir kan gazı analizörü ile kan örnekleri işlemeden önce buz üzerinde mühürlü 1 ml şırınga tutunhayvanın metabolik ve ventilasyon durumu.
  9. koşu bandı üzerinde beş aşamalı egzersiz protokolüne domuz Konu, hız başına 3 dakika, 1-5 km / sa (~ maksimal kalp hızının% 85). dinlenme pozisyonunda olduğu gibi her hızına hız başına 2 dakika - 1.5 sonra hemodinami ve kan gazları elde edin.
  10. egzersiz protokolü sonrasında stopcocks kapatın ve sürüklenme 0 mmHg kalibrasyonu oluşup oluşmadığını kontrol edin bu kalibrasyon bir yere not edin. sıvı dolu kateter basınç dönüştürücüler çıkarın ve akış sondaları ayırın.
  11. (- 5000 IU / ml 1000) tuzlu ve heparin ile sıvı dolu kateterler yıkayın. Yapay koyun derisi iki adet arasında elastik yelek altına koyarak kateterleri ve akış sondaları koruyun. Hayvan şimdi kafesine iade edilebilir.

figure-protocol-17244
Şekil 2. Koşu Bandı Deneyi. Sol bölmedels: koşu bandı üzerinde domuz Enstrümanlı. Sıvı doldurulmuş kateter domuz arkasına yerleştirilmiş basınç dönüştürücüler, bağlanır. Sağ üst panel: koşu bandı, amplifikatör ve kayıt bilgisayara dahil toplam deneysel set-up, genel bakış. Alt sağ panel: kaydedilen hemodinamik veriler, tipik bir örneği. Baştan aşağı; Aort basıncı (AoP, mavi) ve sol ventrikül basıncı (LVP, kırmızı); Sol atriyal basınç (LAP, mavi) ve sol ventrikül basıncı (kırmızı); pulmoner arter basıncı (PAB, mavi) ve sağ ventrikül basıncı (RVP, kırmızı); Aort akım / kardiyak output (AoF, mavi); koroner kan akımı (CBF kırmızı). Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

Sonuçlar

5 km / saat egzersiz kadar prensip olarak birlikte per min 137 ± 7-256 ± 8 atım kalp hızında artış gerçekleştirildi 8.5 ± 0.7 L / dk 4.3 ± 0.3 den kalp debisi iki katına sonuçlandı 36 ± 3 ml (Şekil 3) 32 ± 2 ila inme hacminde küçük bir artış. Sol ventriküler basınç birinci türevinin maksimum bir artışla kanıtlandığı gibi inme hacmindeki artış, sol ventrikül büzülebilirliğinde bir artış ile kolaylaştırıldı dP / dtmax birlikte, s...

Tartışmalar

Bu çalışmada domuz kronik enstrümantasyon nedeniyle ameliyat yanı sıra hemodinamiğini ölçüm yaparken bir motorlu koşu bandı üzerinde aletli domuz egzersiz ve arteriyel, venöz karışık ve koroner venöz kandaki oksijen miktarının ölçümü için kan örneklerini almak için protokol tanımlamaktadır.

Protokol çerçevesinde kritik adımlar
entübasyon işlemi sırasında zaten başlangıç ​​protokolü içinde birkaç kritik adımlar vardır. Tiyopental (2.1.5),...

Açıklamalar

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Teşekkürler

Bu çalışma (DJ Duncker için) Hollanda Kalp Vakfı hibe 2000T038 (D. Merkus kadar) hibe 2000T042 tarafından desteklenen, Avrupa Komisyonu FP7-Sağlık-2010 hibe MEDYA-261409, Hollanda Kardiyovasküler Araştırma Girişimi (DJ Duncker D. Merkus için): Hollandalı Kalp Vakfı, Üniversitesi Tıp Merkezleri Hollanda Federasyonu, Sağlık Araştırma ve Geliştirme ve Kraliyet Bilimler Akademisi Hollanda Hollanda Örgütü   CVON- ARENA KVON 2011-11, (D. Merkus için) KVON-Phaedra CVON2012-08 ve KVON-RECONNECT KVON 2014-11 (DJ Duncker için), Sophia Vakfı (DJ Duncker D. Merkus için) (D. de için Wijs-Meijler, D. Merkus ve IKM Reiss).

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
3-way stopcocksB. Braun16496
Perfusor lines PVC (DEHP-free) 150 cm/2.6 ml B. Braun8722960Used for fluid filled catheters
“python “ silicontubingRubber BV1757 ID 1 mm, OD 2 mmUsed for fluid filled catheters
Sodium Chloride 0.9%BaxterTKF7124
Glucose 10%BaxterWE0163
Suction device
Slim-Line electrosurgical pencil with 2 buttonsERBE ELEKTROMEDIZIN GMBH20190-066
Servo Ventilator SV900C Siemens-Elema AB 
LaryngoscoopVererinary Technics Int.11.02.47
Sterile surgical gloves
tie-on surgical mask3M1818FS
surgical hatKlinidrape621301
Procedure packMolnlycke Health Care97027809Surgical drape, gauze pads, syringes, beaker etc
DroptearsAlcon288-28282-01
Betadine scrub 75 mg/ml Povidone-iodineMeda Pharma BVRVG08939
Betadine solution 100 mg/ml Povidone-iodineMeda Pharma BVRVG01331
Cuffed Endotracheal tubeEmdamedsize depends on animal size
Breathing filter Hyrdo therm 3HMEIntersurgical1560000
Laryngoscope Handle+ Miller blade size 4Kawe Germany
Manual resuscitator- CombibagWeinmann6515-12-313-5596
Perivascular flow probe 3PSTransonicFor coronary artery; Size 2.5 - 4 mm depending on animal size
Confidence flow probeTransonicFor aorta/pulmonary artery, 16 - 20 mm; size depends on animal size
Venflon-Venisystem 20 G x 32 mmBD393224For coronary venous catheter
Blunt Needle 18 GFor coronary venous catheter
Tygon TubingRubber BV2802 ID 0.8 mm (1/32’’), OD 2.4 mm (3/32’’)For coronary venous catheter
Suction Handle 17 cm 6 6/8 " Coupland 18/8 martinit with tube connectorKLS Martin Group18-575-24
Scalple blade 
Scalpel Handle 13.5 cm 5 3/8 " Stainless Steel solidKLS Martin Group10-100-04
Vascular Forceps 20.2 cm 8 " De Bakey Stainless SteeKLS Martin Group24-388-20± 14 cm
Dressing Forceps 17 cm 6 6/8 " Cushing Stainless SteelKLS Martin Group12-189-17± 18 cm
halsted-musquito straight 12.5 cm - 5"Rudolf MedicalRU-3100-13± 12 cm
halsted-musquito curved 12.5 cm - 5"Rudolf MedicalRU-3101-12± 12 cm
Dissecting and Ligature Forceps 13 cm 5 1/8 " Gemini Stainless SteelKLS Martin Group13-451-13± 12 cm
Dissecting and Ligature Forceps 18.5 cm 7 2/8 " Schnidt Stainless SteelKLS Martin Group13-363-18
Rib Retractor Finochietto, Baby Aluminium -KLS Martin Group24-162-01
suture forceps Mayo-Hegar 3 mm 18 cm - 7"Rudolf MedicalRU-6050-18
Metchenbaum blunt curved 14.5 cm - 5(3/4)"Rudolf MedicalRU-1311-14M
Retrector farabeuf 12 cm - 4 (3/4)"Rudolf MedicalRU-4497-12
Towel forceps schrädel curved 9cm - 3,5"Rudolf MedicalRU-3550-09
surgical scissors blunt 13 cm - 5"Rudolf MedicalRU-1001-13
Gauzes Cutisoft 10 x 10 cm 4-plyBSN Medical45846-00
Gauzes Cutisoft 5 x 5 cm 4-plyBSN Medical45844-00
Flowmeter -CM2 / SF2 - 2gas (O2 and Air)UNO BV180000008
Tec 7 VaporizerDatex-Ohmeda
Acederm wound spayEcuphar NV
Vaseline AlbumBufa165313
silkam 3-0 Natural silk, non-absorbableB. BraunF 1134043sutures for placement of catheters
silkam 2-0 Natural silk, non-absorbableB. BraunF 1134051sutures for muscular approximation
dagrofil 3-0 Polyester, non-absorbableB. BraunC 0842478sutures for fluid fille catheters after tunneling
Vicryl rapide 3-0, 1 x 45 cm FS2, V2930GDaxtrio medische producten15560sutures for electrical catheters after tunneling
Vitafil 6 USPSMI6080Ties
Syringes10 ml and 2.5 ml
Heparin LEO (heparin sodium) LEO Pharma A/S
ZoletilVirbactiletamine / zolazepam
SedazineAST farma108855xylazine
TemgesicRB Pharmaceuticals5429buprenorphine
TensogripBSN Medical71522-00elastic vest

Referanslar

  1. Laughlin, M. H., et al. Peripheral circulation. Compr Physiol. 2, 321-447 (2012).
  2. Datta, D., Normandin, E., ZuWallack, R. Cardiopulmonary exercise testing in the assessment of exertional dyspnea. Ann Thorac Med. 10, 77-86 (2015).
  3. Vatner, S. F., Braunwald, E. Cardiovascular control mechanisms in the conscious state. N Engl J Med. 293, 970-976 (1975).
  4. Duncker, D. J., Bache, R. J. Regulation of coronary blood flow during exercise. Physiol Rev. 88, 1009-1086 (2008).
  5. Tune, J. D., Gorman, M. W., Feigl, E. O. Matching coronary blood flow to myocardial oxygen consumption. J Appl Physiol. 97 (1985), 404-415 (2004).
  6. van den Heuvel, M., et al. Coronary microvascular dysfunction in a porcine model of early atherosclerosis and diabetes. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 302, H85-H94 (2012).
  7. Zhou, Z., et al. Pulmonary vasoconstrictor influence of endothelin in exercising swine depends critically on phosphodiesterase 5 activity. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 306, L442-L452 (2014).
  8. Pereda, D., et al. Swine model of chronic postcapillary pulmonary hypertension with right ventricular remodeling: long-term characterization by cardiac catheterization, magnetic resonance, and pathology. J Cardiovasc Transl Res. 7, 494-506 (2014).
  9. Mercier, O., et al. Endothelin A receptor blockade improves regression of flow-induced pulmonary vasculopathy in piglets. J Thorac Cardiovasc Surg. 140, 677-683 (2010).
  10. Spinale, F. G., et al. Chronic supraventricular tachycardia causes ventricular dysfunction and subendocardial injury in swine. Am J Physiol. 259, H218-H229 (1990).
  11. Yarbrough, W. M., Spinale, F. G. Large animal models of congestive heart failure: a critical step in translating basic observations into clinical applications. J Nucl Cardiol. 10, 77-86 (2003).
  12. Duncker, D. J., Stubenitsky, R., Verdouw, P. D. Autonomic control of vasomotion in the porcine coronary circulation during treadmill exercise: evidence for feed-forward beta-adrenergic control. Circ Res. 82, 1312-1322 (1998).
  13. Stubenitsky, R., Verdouw, P. D., Duncker, D. J. Autonomic control of cardiovascular performance and whole body O2 delivery and utilization in swine during treadmill exercise. Cardiovasc Res. 39, 459-474 (1998).
  14. Zhou, Z., et al. Phosphodiesterase-5 activity exerts a coronary vasoconstrictor influence in awake swine that is mediated in part via an increase in endothelin production. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 306, H918-H927 (2014).
  15. Gross, D. R. . Animal Models in Cardiovascular Research. , (2009).
  16. Merkus, D., Duncker, D. J. Perspectives: Coronary microvascular dysfunction in post-infarct remodelled myocardium. Eur Heart J Suppl. 16, A74-A79 (2014).
  17. de Beer, V. J., de Graaff, H. J., Hoekstra, M., Duncker, D. J., Merkus, D. Integrated control of pulmonary vascular tone by endothelin and angiotensin II in exercising swine depends on gender. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 298, H1976-H1985 (2010).
  18. Lautt, W. W. Resistance or conductance for expression of arterial vascular tone. Microvasc Res. 37, 230-236 (1989).
  19. Merkus, D., et al. Phosphodiesterase 5 inhibition-induced coronary vasodilation is reduced after myocardial infarction. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 304, H1370-H1381 (2013).
  20. Heusch, G. The paradox of alpha-adrenergic coronary vasoconstriction revisited. J Mol Cell Card. 51, 16-23 (2011).
  21. Merkus, D., Houweling, B., van den Meiracker, A. H., Boomsma, F., Duncker, D. J. Contribution of endothelin to coronary vasomotor tone is abolished after myocardial infarction. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 288, H871-H880 (2005).
  22. Haitsma, D. B., et al. Minimal impairment of myocardial blood flow responses to exercise in the remodeled left ventricle early after myocardial infarction, despite significant hemodynamic and neurohumoral alterations. Cardiovasc Res. 52, 417-428 (2001).
  23. Bender, S. B., van Houwelingen, M. J., Merkus, D., Duncker, D. J., Laughlin, M. H. Quantitative analysis of exercise-induced enhancement of early- and late-systolic retrograde coronary blood flow. J Appl Physiol. 108 (3), 507-514 (2010).

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

T pSay 108Kronik enstr mantasyonKardiyak fonksiyonKoroner mikrosirk lasyonPulmoner mikrosirk lasyonmiyokard oksijen dengesiendotel fonksiyonu

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Araştırma

Eğitim

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır