Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.
Method Article
Bu makalede farelerde hayvan arka tarafında konumlandırılmış bir erişim bağlantı noktasına bağlı bir mayi kateter, cerrahi yerleşim için yöntem gösterilmektedir. Ayrıca, PD hastalar üremik durumunu benzemeye 5/6 nefrektomi için yordamı açıklar.
Periton diyalizi (PD) yönetim ve işlevsel olarak yetersiz böbrekler mümkün değildir su ve toksik metabolitleri boşaltmak için Periton boşluğunda hyperosmotic sıvı posterior kurtarma hakkında tutarlı bir renal replasman tedavisi olduğunu ortadan kaldırmak. Ne yazık ki, bu yordamı Karın zarını bozulur. Doku hasarı yaralanma iyileşmek için iltihabı başlangıcı tetikler. Yaralanma devam ederse ve inflamasyon kronik hale gelir, birçok hastalığın ortak bir olay olduğu için fibrozis, neden olabilir. PD, kronik inflamasyon ve fibrozis, bu olanlar için ilgili diğer belirli işlemleri ile birlikte başarısızlık ve teknik sonraki kesilmesi anlamına gelir Ultrafiltrasyon kapasite bozulmasına yol açar. İnsan örnekleri ile çalışma biyopsi almak için teknik ve etik sınırlamalar bu bozulma sunar ama hakkında bilgi sağlar. Hayvan modelleri bu eksikliklerini aşmak beri bu bozulma çalışma için gerekli olan.
Kronik fare infüzyon manken 2008 yılında hangi geniş mekanizmaları dahil eğitim olasılığını açmadan genetiği değiştirilmiş farelerin faydalanacağını geliştirilmiştir. Bu model fareler, subkutan hayvan arkasına yerleştirilen bir erişim bağlantı noktasına bağlı bir kateter oluşan için tasarlanmış özelleştirilmiş bir aygıt kullanır. Bu yordamı Karın zarını sürekli ponksiyon sırasında uzun süreli deneyler, enfeksiyonlar ve iltihap nedeniyle enjeksiyonları azaltılması önler. Bu model sayesinde, kronik PD sıvı poz tarafından indüklenen periton hasar ile karakterize ve modülasyonlu. Bu teknik büyük miktarlarda sıvı infüzyonu sağlar ve diğer hastalıklar, uyuşturucu veya diğer maddelerin aşılama uzun bir süre içinde gerekli olan çalışma için kullanılabilir.
Bu makale, farelerde kateterin cerrahi yerleşim için yöntem gösterir. Ayrıca, böbrek yetmezliği PD hastalarında mevcut durumunu taklit etmek 5/6 nefrektomi için yordamı açıklar.
Böbrek ve böbrek hastalığı
Böbrekler temel organları homeostazı, kan filtrasyon ve hormon üretimi vardır. Böbrek yetmezliği ve sistemik semptomlar nedeniyle böbrek fonksiyon bozuklukları1muhafaza kandaki atık ürünlerin birikimi nedeniyle grubu olarak tanımlanan yükselmeye sonraki başlangıcı neden çeşitli koşullar vardır. Böbrek yetmezliği olduğunda homeostatik yeteneği de etkilenir beri Ayrıca, birim aşırı yük nedeniyle hipertansiyon, kalp yetmezliği1' e yol açabilir gibi da tehlikeli ile oluşabilir. Böbreklerde fonksiyonel kapasitesini daha az % 10-% 15'ten, ne zaman hasta tedavi aşağıdaki seçeneklerden birini geçmeleri gerekir: hemodiyaliz, periton diyalizi (PD) veya böbrek nakli.
PD hastalar tedavi böylece sık hastane ihtiyacını kaçınarak rahatlık evlerinin veya neredeyse her yerde, ziyaret ve kalır devam sağlar ilginç bir seçenektir. PD tekniği küçük zehirli moleküller ve aşırı su vücut2 ile korumak bir ozmotik sıvı (Periton Diyaliz sıvısı, PDF) tarafından oluşturulan periton boşluğuna ortadan kaldırır. Bu korumak solutes ve periton kılcal ve PDF, Ultrafiltrasyon (UF) bilinen bir işlem arasında su alışverişi için gerekli ozmotik degrade oluşturur.
Peritoneal yaralanma periton diyalizi tarafından indüklenen
Periton boşluğuna mesothelial hücreler de kaç kan damarları, fibroblastlar, makrofajlar ve diğer hücre popülasyonlarının evler bir matris üzerinde dinlenme monolayer oluşan bir membran (PM) kaplıdır. Ne yazık ki, peritoneal membran her zaman apoptozis ve mesothelial hücreler kaybı, mesothelial (MMT) ve (bitiş-MT) endotel hücreleri, inflamatuar hücre alımı mezenkimal geçiş gibi PD tedavisi sırasında bazı değişikliklere uğrar ve fibrocytes, vasküler değişiklikler, anjiogenez, lymphangiogenesis ve/veya fibrozis3,4,5,6,7,8,9. Bu değişiklikleri için hangi hasta (hemodiyaliz ya da böbrek nakli) hayatta kalmak için alternatif tedavi alması gereken gerektiren tedavisinin devamı önleyen bir UF kapasitesi hatası10, geliştirme sorumlu . Bu nedenle, bu hastalar için bu gecikme veya periton bu değişiklikleri gelişimi denetlemek için esastır.
Bu iltihap11yalnız yükselmeye neden olabilir, ancak PDF bioincompatibility en önemli yerel faktördür spekülasyonlar. Çoğu PDF'ler glikoz inflamasyon nedenleri ozmotik aracı kullanın. PDF depolama kez ve sterilizasyon, nedeniyle glikoz yıkımı süreci uğrar ve bu reaksiyon yeni ürünleri üreten daha fazla inflamasyon,12,13MMT ve Apoptozis görünür. Ayrıca, ayrıca korumak yöntemi nedeniyle mekanik hasar olasılığı mevcuttur. Tüm bu faktörler sürekli olarak hareket, kronik inflamasyon zarı bozulma ve UF başarısızlık için kesin, sürücüler, önde gelen bir kalıcı ve tekrarlayan inflamatuar durumu oluşturabilir. Bu hasar nasıl azaltılmış veya kaçınılması hala çalışma meselesi.
Lezyonlar gelişimi analiz: hayvan modelleri için insan örneklerinden
Çalışma insan biyopsi ile doku örneği almak üzere zorluk nedeniyle kısıtlayıcı bir faktör olduğunu. Bu örnekler yalnızca kateter arıza veya nakli, PD tedavisi yıl sonra genellikle nedeniyle gerçekleştirilen ameliyatlar elde edilebilir. Bu yaklaşım patolojik değişiklikler PDF'ye maruz bir peritoneal membran uğradığı analizi için yararlıdır, ancak süreç geliştirme çalışması için yeterli değildir. Başka bir olasılık Diyaliz Atık süzülmüş hücreleri analiz etmek, ama bu yine de tam bir senaryo sağlamak başarısız. Her iki teknik birleştirme sadece hayvan modelleri ile mümkün olur. Periton yapısı memeliler arasında benzer ve bu nedenle farklı hayvan türleri ile modelleri vardır. Birkaç çalışma koyun (Rodela vd dayalı vardır 14 ve Barrell vd. 15) ve tavşan16,17 modelleri; Ancak, onlar eve kolaydır ve korumak hem de daha ekonomik olarak daha küçük hayvanlar tercih edilir. Kullanma fare18,19,20,21,22,23,24 gözlemlemek için gerekli daha kısa bir tedavi süresi sunuyor Morfo fonksiyonel değişiklikler. Örnek BMP-7 (kemik morphogenic protein-7)25 anti-fibrotik ilaçların etkisi gibi farklı konular ve26,27 hedefleme RAS (renin-anjiyotensin sistem) keşfetmek için çok kullanışlı bir model temsil etmiştir , 28.
Ancak, fare modeli birçok yararları ile ideal bir model olarak diğerleri üzerinde ortaya çıkmıştır. Genetik olarak kullanma imkanı periton hasar moleküler ve hücresel temeli çalışmaya fareler değişikliğin en ilginç avantajdır. Aslında, fareler kez olduğu gibi birçok farklı suşları çeşitli tanınmış genetik kökenli çok sayıda hastalıklar, analiz için istihdam edilmektedir. Diğer avantajı düşük alan deneyler (nedeniyle hayvanların daha küçük boyutu), kullanım kolaylığı, reaktifler kullanılabilirliğini ve fareler farklı suşları kullanılabilir bilgi artan miktarda konut, düşük maliyet için gerekli içerir Onlar en yaygın olarak kullanılan araştırma hayvanlarda beri.
Yerleştirilmiş bir aygıt istihdam bir fare tabanlı model PD29,30için en yeni kurulan model olmuştur ve PD hastaların maruz PDF'lere nedeniyle uğradığı periton bozulma taklit etmek için gösterilmiştir. Bu model patolojik süreçler31,32,33karıştığı anlamak için işbirliği vardır. Ayrıca, bu bağışıklık modülatörler ve anti-inflamatuar ilaçlar ve diğer anti-fibrotik kullanarak bozulma ve anti-anjiogenik acentaları, COX-2 (siklooksijenaz-2) inhibitörleri gibi ameliorating için çeşitli olası tedaviler doğrulamak için kullanılmıştır 34, PPAR-γ (peroxisome proliferatör-aktive reseptör-γ) agonistler35, tamoksifen36, Paricalcitol (Bu bağışıklık reaksiyon gelen bir vitamin D reseptör aktivatör)37, Rapamycin38 ve Nebivololün 39.
Yerleştirilmiş bir kateter ile fare modeli geliştirmek
Bu model, mümkün olduğu kadar küçük hayvanlarda PD genişletilmiş tedaviler gerçekleştirmek için izin veren insan PD hastalarında tekniği kullanılan benzemeye hedeftir. Şimdiye kadar farelerde üç teknikleri içine Periton Diyaliz sıvı korumak için test edilmiştir. İlki, kör ön delik karın duvarı, tartışmalı periton hasar gibi tabi olabilir birden fazla riskleri nedeniyle kanama ve körü körüne gerçekleştirilen, visseral delik olduğu gibi. "Sıvı enjekte için cihazın gövde dışında yerleştirildiği sözde açık kalıcı sistemi", ikinci tekniğidir. Bu yordam en insanlarda gerçekleştirilen benzer. Ancak, enfeksiyon olasılığını artırabilir gibi uzun süreli deneyler, gelişimine izin vermez ve genellikle sonuçları ile girişime neden olabilir PDF aşılamak için anestezi kullanımını gerektirir. "Kapalı sistem" üçüncü tekniğidir. Bu yaklaşım ile sıvı korumak için kullanılan tüm cihaz hayvanın vücudunun içinde yer alır. Sıvı subkutan yerleştirilir bir erişim bağlantı noktası üzerinden iğneyle enjekte edilir. Bu yordamı peritonal enfeksiyon ve kanama gibi anestezi ihtiyacını riskini azaltır.
PD yükselmeye etkisini incelemek için son fare modeli de olmuştur kateter ile PDF infüzyon modelini temel40 stablished. Bu model bir nefrektomi böylece renal fonksiyon azaltarak farelerde, gerçekleştirmek için bir roman tekniği getiriyor. Bugünkü yazıda, Ferrantelli ve ark. tarafından 201540 istihdam protokolü bir değişiklik geliştirmiştir. Bu yeni iletişim kuralı kateter implantasyon sırasında yapılmış, ameliyat sırasında verdirdiler yara uzunluğunu azaltır ve böbrekler için erişimi kolaylaştırır sağlar.
Tüm yöntem tanımlamak burada kurumsal hayvan bakım ve moleküler biyoloji merkezi Severo Ochoa (Madrid, İspanya) kullanım Komitesi tarafından onaylanmış olması.
Not: 12-14 hafta yaşlı ve çalışma başlangıcında yaklaşık 20 gr ağırlığında C57BL/6J dişi fareler kullanıldı. Bütün hayvanlar standart koşullar altında yer alan ve gıda ve su ad libitumverildi. Sağlık koşulları her gün kontrol edildi. Eldiven, örtüsü, kateter, dikiş ve iğneler, gibi gerekli malzeme steril olmalıdır.
1. kateter yerleştirme
Not: böbrekler kaldırılmaz yükselmeye, böylece yalıtım modunda PDF pozlama çalışmanın erişimine izin verme etkisini dikkate almaz böylece onlar tamamen işlevsel kalır. Ameliyat sadece kateterin distal aşırı periton boşluğuna tanıtılması ve bu erişim sağlayan hayvan, arkası erişim bağlantı noktası yerleştirerek oluşur. Kateteri yerleştirmek için bu yordamı aşağıdaki gibidir:
2. performans 5/6 nefrektomi ve kateter yerleştirme
Not: daha iyi durum PD hastalarında benzemek için yalnızca bir kalıntı renal işlevi sağlayan bir 5/6 yapılmış gerçekleştirileceği mümkündür. Bu durumda, serum numuneleri kan yüz damar yolu ile 250 μL ayıklanıyor tarafından düzeyleri ponksiyon, tedavi ve hayvanlar ödün orta ameliyatlar başlamadan önce en az bir gün üre analiz etmek için alınmalıdır. Ameliyat sırasında steril koşullar bakım sağlamak için kabine akışı işlemleri yapılırsa tercih edilir.
Şekil 1 Protokolü bölümünde açıklanan yordamları izlemek için gerekli tüm malzemeleri gösterir. Bu örneğin, gönderilmiş fareler veya değil nefrektomi (grup başına 8 hayvanlar) (Şekil 2) 40 gün (günlük, iki enjeksiyon her ikisi arasında en az 2 saat bekleyen) sırasında klinik pratikte yaygın olarak kullanılan iki farklı PDF'ler karışımı sinin: EXTRANEAL (PDF icodextrin tabanlı) ve Dianeal (glikoz t...
İlk yayımlanan veri PD değişiklikler "sistemi Kapat" tekniği kullanarak Analizi 200929 gerçekleştirildi. Yakın bu sistem tüm cihaz gövdesi içinde yer alır ve sıvı bir erişim bağlantı noktası üzerinden iğneyle enjekte edilir demektir. En önemli teknik bir kateter ile sıvı infüzyonu uzun vadeli hayvan modellerinde tıkanıklığı geçtiği bir sorundur. Olası seçenekler omentectomy gerçekleştirmek veya heparin periton yapışıklıklar azaltmak için PDF'ye eklemek üzer...
Yazarlar ifşa gerek yok.
Yazarlar E. Ferrantelli ve G. Liappas R. Sánchez Díaz ve P5/6 nefrektomi iletişim kuralları ayarlanıyor verdikleri destek için teşekkür ederiz. Martin hakkında yardım almak için ureic azot değerlendirmeler ve E. Hevia ve F. Núñez fareler bakımı konusunda yardım almak için. Bu eser "" gayri resmi "de Economía y Competitividad" gelen hibe SAF2016-80648R tarafından desteklenen / Fondo de Investigaciones Sanitarias (FIS) üzerinden Fondo Europeo de Desarrollo bölge (MINECO/FEDER) Manuel López-Cabrera ve PI 15/00598-FEDER fonları için Abelardo Aguilera.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Minute Mouse Port 4French with retention beads and cross holes | Access technologies | MMP-4S-061108A | |
Posi-Grip Huber point needles 25 ga. X 1/2´´ | Access technologies | PG25-500 | |
High Temperature Cautery Kit | Bovie | 18010-00 | |
Forane | abbVie | 880393.4 HO | |
non absorbable suture 6/0 | Laboratorio Agaró | 6121 | |
Scissors | Fine Science Tools | 14079-10 | |
forceps | Fine Science Tools | 11002-12 | |
clamp | Fine Science Tools | 13002-10 | |
Buprenorphine 0,3 mg/ml | pharmaceutical product | ||
cotton swabs | pharmaceutical product | ||
Dalsy (Ibuprofen) 20mg/mL oral suspension | AbbVie S.R.L. | pharmaceutical product |
Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi
Izin talebiThis article has been published
Video Coming Soon
JoVE Hakkında
Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır