JoVE Logo
Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Biz polyethyleneimine (PEI) kullanarak bir yöntemi açıklamak-kaplı superparamagnetic demir oksit nano tanecikleri siRNA ile transfecting makrofajlar için. Bu nano tanecikleri siRNA makrofajlar vitro ve in vivo ve sessizlik hedef gen ekspresyonu için verimli bir şekilde teslim edebilirsiniz.

Özet

Bağışıklık yanıtı düzenlenmesinde önemli rolleri nedeniyle makrofajlar sürekli yoğun araştırma konu oldu ve otoimmün hastalıkları, ateroskleroz ve kanser gibi birçok hastalıklarda umut verici bir terapötik hedef temsil eder. RNAi aracılı gen susturmak yoklama ve makrofaj işlevi değiştirmek için seçim değerli bir yaklaşımdır; Ancak, makrofajlar siRNA ile transfection kez teknik olarak zor olabilir kabul edilir ve, makrofajlar siRNA aktarmak için adanmış birkaç metodolojileri mevcuttur. Burada, polyethyleneimine kaplı superparamagnetic demir oksit nano tanecikleri (PEI-SPIONs) siRNA makrofajlar için hedeflenen teslim için bir araç olarak kullanarak bir iletişim kuralı mevcut. PEI-SPIONs bağlama ve Fe: siRNA ağırlık oranı 4 ulaştığında tamamen siRNA Yoğuşmalı ve üzeri yeteneğine sahiptirler. Vitro, bu nano tanecikleri verimli siRNA birincil makrofajlar içine yanı sıra olmadan ödün hücre canlılık transfection için en uygun doz, makrofaj gibi ham 264.7 hücre kültürünü içine teslim edebilir ve sonuçta, onlar neden siRNA aracılı hedef gen susturmak. Vitro siRNA transfection için kullanılan dışında PEI-SPIONs da siRNA makrofajlar içinde vivoiçin teslim etmek için umut verici bir araç vardır. İçinde görüş-in kombine özellikleri manyetik özelliği ve gen susturmak yeteneği, sistemik yönetilen PEI-casus/siRNA parçacıklar sadece makrofaj işlevi modüle için aynı zamanda yansıma ve izlenen makrofajlar etkinleştirmek için bekleniyor. Özünde, bir basit, güvenli ve etkili nonviral platform siRNA teslim edilmek üzere makrofajlar PEI-SPIONs temsil vitro ve içinde vivo.

Giriş

Makrofajlar doğuştan gelen bağışıklık hücreleri tüm vücut dokuları içinde dağıtılmış bir türü farklı miktarlarda da olsa vardır. Çeşitli sitokinlerin ve diğer arabulucu üreterek, onlar mikrobiyal patojenler istila karşı ana savunma, yaralanma takip doku onarımı ve doku homeostazı1korumada önemli rol oynarlar. Önemleri nedeniyle makrofajlar sürekli yoğun araştırma konu oldu. Ancak, gen düzenlemesi ve işlev çalışmalar yaygınlık rağmen gen siRNA aracılı susturmak için makrofajlar başarılı olasılığı daha düşüktür bu hücreler — özellikle, birincil makrofajlar — çoğu kez transfect zor. Bu hücre zarı olan kimyasal olarak en köklü transfection yaklaşımlar ile ilişkili toksisite (Örneğin, polimerler ve lipidler) nispeten yüksek derecede atfedilen veya fiziksel olarak (Örneğin, Elektroporasyon tarafından ve Böylece büyük ölçüde azaltarak makrofajlar canlılığı2,3membran çapraz siRNA molekülleri izin gen silah) bozulur. Ayrıca, makrofajlar adanmış fagositler degradative enzimler zengin vardır. Bu enzimler siRNA, gene özgü siRNA hücre3,4teslim olsa bile silencing verimlilik zayıflaması bütünlüğünü zarar verebilir. Bu nedenle, bir etkili makrofaj hedefli siRNA teslim sistem bütünlüğü ve istikrarı siRNA teslim4sırasında korumak gerekiyor.

Disfonksiyonel makrofajlar başlatma ve otoimmün hastalıkları, ateroskleroz ve kanser gibi bazı ortak klinik bozukluklar ilerlemesini karıştığı giderek belirgin olduğu. Bu nedenle makrofaj işlevini kullanarak, örneğin, siRNA, oransal, bu bozuklukları5,6,7tedavisi için çekici bir metodoloji olarak ortaya çıkan olmuştur. Ne kadar çok ilerleme yaptı, sistemik yönetilen siRNA ve sonuç olarak istenmeyen yan etkilere neden makrofajlar tarafından yetersiz siRNA alımını zavallı hücre özgüllük siRNA dayalı tedavi stratejisinin büyük bir sorun olduğunu. Genellikle optimum hücre seçicilik eksikliği ve sık sık hedef kapalı yan etkiler, ilaç dolu nano tanecikleri (NPs), retiküloendotelyal sistem tarafından yakalanan spontan onların eğilimi nedeniyle yol ücretsiz nükleik asit tedavi ile karşılaştırıldığında, makrofajlar vivo içindebırakmak için en az yan etkileri8ile geliştirilmiş tedavi edici etkinliği, pasif hedefleme için tasarlanmış. Geçerli NPs RNA molekülleri teslimi için araştırdı inorganik nanocarriers, çeşitli lipozomlar ve polimerler9içerir. Bunlar arasında kapasitesi9,10teslim etmek yüksek RNA polyethyleneimine (PEI), Katyonik Polimerler bağlama ve nükleik asitler stabilize NPs yoğuşmalı yeteneğine sahip bir türünü gösterir. PEI nükleik asitler enzimatik ve nonenzymatic bozulma korur, transfer hücre zarı arasında aracılık eder ve onların hücre içi serbest teşvik etmektedir. Her ne kadar başlangıçta bir DNA teslim reaktifi tanıttı, PEI daha sonra vivo içinde siRNA teslimi, ya yerel olarak veya sistemik9,10çekici bir platform olacak şekilde gösterilmiştir.

Superparamagnetic demir oksit nano tanecikleri (SPIONs) içinde biyomedikal, kendi manyetik özellikleri, biyouyumluluk, biyolojik olarak önemli nesnelerine, yüksek hacim için yüzey alanı oranı, karşılaştırılabilir boyutu nedeniyle büyük söz göstermiştir ve kolayca uyarlanabilir yüzey düşündüğümüzden Eki11. Örneğin, bir kontrast Ajan ve makrofajlar tarafından hızlı alımı olarak onların potansiyel yarar nedeniyle, SPIONs bir favori klinik araç görüntü doku makrofajlar12olarak ortaya çıkmıştır. SPIONs da yaygın nükleik asit teslimat Araçlar11,13,14,-15, bizim bilgi olarak incelenmiştir iken edebiyat bir taşıyıcı olarak SPIONs birkaç raporları içerir makrofaj hedefli siRNA teslim. SPIONs tarafından gen teslim için onların yüzey genellikle üzerine olumsuz ücret nükleik asitler elektrostatik çekti kaşif balonlu keşif ve hidrofilik Katyonik Polimerler bir tabaka ile kaplanır. Burada, SPIONs olan yüzey düşük moleküler ağırlıklı ile (10 kDa), dallı PEI (PEI-SPIONs) değiştirilir sentezleme yöntemi mevcut. Bu manyetik nanoplatforms sonra siRNA, hücre içine siRNA taşıma etkinleştirmek PEI-casus/siRNA kompleksleri şekillendirme yoğunlaşmak için istihdam edilmektedir. Retiküloendotelyal sistem16hücreleri tarafından SPIONs o kendiliğinden fagositoz nedeni, bağlama güçlü yeteneği ile birleştiğinde ve nükleik asitler tarafından PEI, yoğuşmalı PEI-SPIONs siRNA etkin taşıma için uygun işler makrofajlar. Burada sunulan veri PEI-casus/siRNA-aracılı gen kültür hem de vivo içindemakrofajlar içinde yalıtım fizibilite destekler.

Protokol

Tüm yöntemleri içeren canlı hayvan hayvan uygun olarak gerçekleştirilen bakım ve Güneydoğu Üniversitesi, Çin'in yönergeleri kullanın.

1. hazırlanması PEI-SPIONs

  1. Oleik asit-modified SPIONs hazırlanması
    1. FeCl3•6H2O ve FeSO4•7H2O N2koruması altında suda çözülür.
      1. FeCl3•6H2O 28 g ve 20 g FeSO4•7H2O 80 mL deiyonize su içine bir ölçek ekleyin. N2 cam boru ile su içine tanıtmak ve katı maddenin eriyene kadar karıştırın.
      2. 72 ° C de 800 devir/dakika, buna ek olarak 40 mL Amonyak su (% 28) tarafından takip, coşkulu bir oranda tepki karışıma ısı. 5 dakika karıştırın.
    2. Oleik asit 9 mL dropwise yukarıda belirtilen çözüm içine ekleyin ve 3 h için 72 ° C'de karıştırın.
    3. Oda sıcaklığında (RT) elde edilen çözüm ne yapıyorsun? Manyetik ayırma çözüm yolu ile çökelti.
    4. SPIONs 3 içeren çökelti yıkama x mutlak etil alkol ile ve o zaman, 100 ml N-hekzan çökelti dağıttı.
  2. Dimercaptosuccinic asit-modified SPIONs hazırlanması
    1. Oleik asit (OA) 800 mg eklemek-SPIONs 200 mL N-hekzan dağınık değiştiren ve dimercaptosuccinic asit (DMSA) 400 mg 60 ° C'de bir su banyosu bir üç-boyun şişesi içine 200 mL aseton, dağınık
      Not: OA-modified casus önceki adımda elde konsantrasyonu belirlemek için küçük hacimli (örneğin 1 mL) casus dispersiyon, N-hekzan volatilize tutup elde edilen toz tartmak.
    2. Trietilamin 200 µL dropwise 1000 devir / dakikada karıştırma ve refluxing ile yukarıda belirtilen çözüm içine ekleyin.
    3. Karıştırma ve refluxing 5 h sonra siyah bir çökelti manyetik ayırma tarafından elde etmek.
    4. Deiyonize su hidrofilik SPIONs homojen tetramethylammonium hidroksit kullanarak çözüm pH ayarlayarak dağıtmak.
  3. PEI-SPIONs hazırlanması
    1. DMSA-modified casus kolloidal çözüm dropwise PEI çözümde bir 500 mL üç-boyun şişesi için 2 h 1000 devirde mekanik karıştırma altında (10 kDa) içine ekleyin (WFe: WPEI = 1:3).
      Not: Şarj ve boyutunu PEI-SPIONs W WPEIFe oranı bağlı olarak değişiklik gösterebilir. WFe: 1:3 oranında WPEI PEI-SPIONs siRNA teslim edilmek üzere uygun sentezleme için iyi bir başlangıç noktası olabilir.
    2. Sonuç çözüm 100 kDa bir molekül ağırlığı kesme ve 15 mL bir içeriğe sahip bir Ultrafiltrasyon tüp içine ekleyin; sonra kalan çözüm 1 mL kadar 10 dk santrifüj 5400 x g de. Deiyonize su hacmi 15 mL tekrar yapmak ve yukarıdaki adımları tekrarlayın 10 ekleyin x nihai ürün elde etmek için. O zaman, çözüm 0,22-mikron filtre ile filtre ve nihai ürün 4 ° C'de depolayın
    3. PEI-SPIONs Fe konsantrasyon tarafından pH17kullanarak kolorimetrik yöntemi belirleyin. PEI-SPIONs konsantrasyonu 1 mg Fe/mL deiyonize steril suyla seyreltik ve 4 ° C'de saklayın
    4. 10 μL PEI-casus çözüm (1 mg Fe/mL) 1 ml deiyonize suyla seyreltik; hidrodinamik büyüklüğü ve zeta potansiyel tarafından dinamik bir ışık saçılım aygıtı sınayın.
      Not: PEI-SPIONs hakkında aralığında hazırlamak 30-50 nm. Bu boyut aralığında, NP boyutu siRNA bağlama ve hücresel alımını yaptığı etkisi anlamlı görünmüyor. PEI-SPIONs bir ortalama zeta potansiyeli üzerinde 37 derece taşıyan mV-ebilmek var olmak zehirli transfection doz aralığında ve sitotoksisite tahlil güvenliğini sağlamak için yapılmalıdır. Yüzey ücret ve hidrodinamik nano tanecikleri boyutunu istediğiniz aralığı içinde PEI içeriği ayarlayarak denetlenebilir.

2. hazırlık ve özel jel elektroforez PEI-casus/siRNA NPS'nin

  1. SiRNA suyla 20 mikron (0,26 μg/μL) son bir konsantrasyon vermeye RNase free sulandırmak.
  2. 0, 1, 2, 4 ve 8 etiketli beş RNase free microcentrifuge tüpleri hazırlayın. Etiketleri farklı Fe: siRNA ağırlık oranları temsil eder. Damlalıklı 3 μL siRNA çözüm için tüm tüpler (siRNA/tüp ~0.8 μg).
  3. 0, 0.8, 1.6, 3.2 ve Fe 6.4 μg PEI-SPIONs şeklinde 0, 1, 2, 4 ve 8, sırasıyla etiketli tüpler ekleyin. Her tüpün toplam örnek hacmi 20'den az μL tutun. Yavaşça yukarı ve aşağı pipetting karıştırın.
  4. RT 30 dk için PEI-casus/siRNA karmaşık oluşumu izin vermek için karışımları kuluçkaya. Bu dönemde, yüksek saflıkta özel ile jel % 3 özel olun.
    Not: Ek PEI-casus/siRNA kompleksleri (Örneğin, 5 veya 6) diğer Fe: siRNA oranları ile hazırlanan ve test.
  5. 6 x 5 μL örnek başına DNA-yükleme arabellek 1 μL ve dikkatli bir şekilde karıştırın. Tüm örneklerini yüklemek ve bromophenol mavi üçte bildiğim kadarıyla jel uzunluğu geçirir kadar 5 V/cm Elektroforez çalıştırmak. Jel etidyum bromür (EB) 15-20 dk ile leke.
    Not: Taze hazırlanmış Elektroforez tamponu ve EB çözüm kullanılmalıdır.
  6. SiRNA bantları bir UV görüntüleme sistemi altında görselleştirin. Hangi siRNA formları kompleksleri PEI-SPIONs ile Fe: siRNA oranlarıyla kontrol ve sonuç olarak, ücretsiz siRNA temsil eden grup geri zekalı ya da değil tespit.

3. RAW264.7 makrofajlar Vitro transfection

  1. Kültür fare makrofaj gibi RAW264.7 hücre DMEM kullanarak bir 10 cm tabak içinde orta içeren % 10 fetal Sığır serum (FBS) başına % 5 CO2 kuluçka 37 ° C'de 100 μg/mL streptomisin başına 100 U/mL penisilin tamamlayın.
  2. Bir gün önce transfection, orta hücrelerden Aspire edin ve fosfat tamponlu tuz (pH 7,4) ile yıka. 1 mL % 0.25 tripsin 10 cm yemek için ekleyin. RAW264.7 hücreler için yaklaşık 5-10 dk 37 ° c % 5 CO2 kuluçka trypsinize.
  3. Hücreleri çoğunluğu (5-10 dakika sonra) bağlantısız, 5 mL DMEM tam orta tripsin devre dışı bırakabilirsiniz için yemek için ekleyin. Damlalıklı yukarı ve aşağı tek hücrelere hücre kümeleri dağıtmak için.
  4. Hücre süspansiyon steril bir 15 mL konik tüp aktarın. Bu 300 x g RT. Kaldır, 3 dk de süpernatant santrifüj kapasitesi.
  5. 5 mL taze DMEM tam orta de içeren hücreleri resuspend ve hücreleri saymak.
  6. Plaka 9 x 104 hücre başına bir 6-şey plaka tam DMEM Orta 2 mL ile iyi ve % 5 CO2 kuluçka için yaklaşık 24 h 37 ° C'de kuluçkaya.
    Not: böylece hücrelerin % 80 confluency transfection anda ulaşmak farklı bir boyutta bir tabak kullanıyorsanız, kaplama hücre yoğunluğu göreli yüzey alanı ile orantılı olarak ayarlayın.
  7. Hücre confluency % 80 olduğunda, orta hücrelerdeki kaldırmak ve 1 mL de başına DMEM tam orta yerine. PEI-casus/siRNA kompleksleri hazırlanmıştır ve (yaklaşık 30 dk) kullanıma hazır kadar plaka da kuluçka için dönmek.
  8. PEI-casus/siRNA kompleksleri hazırlamak: bir transfection deneme için gerekli PEI-casus/siRNA kompleksleri miktarını hesaplamak. Bir 1.5 mL RNase free microcentrifuge tüp içinde belirli Fe: siRNA oranında siRNA PEI-SPIONs uygun bir miktarda karıştırın. Örneğin, Fe 100 µg / 4 Fe: siRNA oranında içeren PEI-casus/siRNA NPs hazırlamak için 100 eklemek için siRNA (0,26 μg/μL), 96 μL PEI-SPIONs (1 mg Fe/mL) µL takip bir micropipette ile hafifçe karıştırarak. 30 dk RT. az için kuluçkaya
    Not: bir birim arızi zararlar için hesap son toplam ayine aşan % 10 PEI-casus/siRNA kompleks hazırlayın. PEI-casus/siRNA kompleksleri hangi siRNA molekülleri tamamen PEI-SPIONs yüklenir ve bu nedenle, PEI-SPIONs az miktarda potansiyel sitotoksisite en aza indirmek için kullanılabilir düşük Fe: siRNA oranlarıyla olun. Pilot deneyler (jel retardasyon tahlil) Fe: siRNA oranı optimizasyonu için gereklidir.
  9. İnkübatör (adım 3.7) 6-şey plaka çıkarmak. Gerekli birim PEI-casus/siRNA kompleks dropwise her şey için ekleme ve ihtiyatlı bir hatta dağıtım sağlamak için plaka girdap. Plaka da kuluçka için hücresel alımı veya gen devirme verimliliği (1-3 d) değerlendirme kadar dönün.
    Not: ~ 15 μg Fe/mL bir konsantrasyon, PEI-casus/siRNA ile Transfecting makrofajlar potansiyel sitotoksisite en aza indirerek transfection verimliliği maksimize etmek.

4. sistemik siRNA teslim makrofajlar sıçanlarda deneysel artrit ile

  1. 7 haftalık özel patojen-Alerjik erkek Wistar rats edinin. 7 kullanılmadan önce d sıçanlara alıştırmak ve yeterli yiyecek ve su ile sağlamak. Adjuvan artrit (AA) yukarıda açıklanan18fareler neden.
  2. 3.8. adımda açıklandığı gibi PEI-casus/siRNA kompleksleri hazırlayın.
  3. PEI-casus/siRNA NPs (0.3 mg siRNA/kg) AA fareler ile kuyruk ven enjekte et. Hücresel alımı yolu ileÖrneğin, akış sitometresi, doku biodistribution ileÖrneğin, gerçek zamanlı bir floresan görüntüleme sistemi, değerlendirmek veya tedavi edici etkileri, örneğin, klinik, histolojik ve radyografik dayalı olarak istenen zamanda analizleri18puan.
    Not: istediğiniz NPs tek bir enjeksiyon farelerle hücresel ve doku biodistribution araştırmaları için tedavi; terapötik çalışmaları için test edilmiş 1 haftada üç ardışık hafta x olarak NPs ile fareler enjekte.

Sonuçlar

Boyutu ve zeta potansiyel PEI-SPIONs bu iletişim kuralı ile hazırlanan edildi 29-48 nm aralığında (polydispersity Dizin: 0,12 - 0,23) ve 30-48 mV, anılan sıraya göre. Onlar için 12 ay boyunca açık toplama olmadan su 4 ° C'de kararlı idi. Yetenek bağlama onların siRNA değerlendirmek için PEI-SPIONs siRNA, çeşitli Fe: siRNA ağırlık oranları ile karıştırıldı. Şekil 1 gösterir Fe: siRNA ağırlık oranı 4 ulaştığında ve yukarı...

Tartışmalar

Makrofajlar çoğalmasıyla, katyonik lipozomlar ve lipid türler gibi yaygın olarak kullanılan nonviral yaklaşımlarla transfect ateşe dayanıklı. Burada makrofajlar siRNA ile transfect için güvenilir ve etkin bir yöntem açıklanmıştır. Mevcut iletişim kuralını kullanarak, fazla makrofaj gibi ham 264.7 hücreleri (Şekil 2B) ve fare peritoneal makrofajlar%18 90 siRNA önemli hücre canlılığı bozulma olmadan ile transfected. Bu yöntem bir nanocarri...

Açıklamalar

Yazarlar ifşa gerek yok.

Teşekkürler

Bu eser Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı Çin (81772308) ve ulusal anahtar araştırma ve geliştirme programı of China (No. 2017YFA0205502) tarafından desteklenmiştir.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
DMEMGibcoC11995500BTWarm in 37°C water bath before use
Fetal bovine serumGibcoA31608-02
Penicillin/streptomycin (1.5 ml)Gibco15140122
Tetrazolium-based MTS assay kitPromegaG3582For cytotoxicity analysis
RAW 264.7 cell lineCell Bank of Chinese Academy of Sciences, Shanghai, ChinaTCM13
Tissue culture plates (6-well)Corning3516
Tissue culture dishes (10 cm)Corning430167
RNase-free tubes (1.5 ml)AXYGENMCT-150-C
Centrifuge tubes (15 ml)Corning430791
TrypsinGibco25200-056
Wistar ratsShanghai Experimental Animal Center of Chinese
Academy of Sciences
Bacillus Calmette–Guérin freeze-dried powderNational
Institutes for Food and Drug Control, China		for inducing adjuvant arthritis in rats
siRNAGenePharma (Shanghai, China)
Cy3-siRNARiboBio (Guangzhou, China)
Polyethyleneimine (10 kDa)Aladdin Chemical Reagent Co., Ltd.E107079
Ammonia waterAladdin Chemical Reagent Co., Ltd.A112077
Oleic acidAladdin Chemical Reagent Co., Ltd.O108484
DimethylsulfoxideAladdin Chemical Reagent Co., Ltd.D103272
FeSO4•7H2OSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd10012118
FeCl3•6H2OSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd10011918
Dimercaptosuccinic acidAladdin Chemical Reagent Co., Ltd.D107254
ultrafiltration tubeMilliporeUFC910096
Tetramethylammonium hydroxide solutionAladdin Chemical Reagent Co., Ltd.T100882
Particle size and zeta potential analyzerMalvern, EnglandNano ZS90

Referanslar

  1. Murray, P. J., Wynn, T. A. Protective and pathogenic functions of macrophage subsets. Nature Reviews Immunology. 11 (11), 723 (2011).
  2. Maeß, M. B., Wittig, B., Lorkowski, S. Highly efficient transfection of human THP-1 macrophages by nucleofection. Journal of Visualized Experiments. (91), e51960 (2014).
  3. Zhang, X., Edwards, J. P., Mosser, D. M. The Expression of Exogenous Genes in Macrophages: Obstacles and Opportunities. Macrophages and Dendritic Cells. , 123-143 (2009).
  4. Zhang, M., Gao, Y., Caja, K., Zhao, B., Kim, J. A. Non-viral nanoparticle delivers small interfering RNA to macrophages in vitro and in vivo. PLoS ONE. 10 (3), e0118472 (2015).
  5. Davignon, J. -. L., et al. Targeting monocytes/macrophages in the treatment of rheumatoid arthritis. Rheumatology. 52 (4), 590-598 (2012).
  6. Brown, J. M., Recht, L., Strober, S. The promise of targeting macrophages in cancer therapy. Clinical Cancer Research. 23 (13), 3241-3250 (2017).
  7. Karunakaran, D., et al. Targeting macrophage necroptosis for therapeutic and diagnostic interventions in atherosclerosis. Science Advances. 2 (7), e1600224 (2016).
  8. Prosperi, D., Colombo, M., Zanoni, I., Granucci, F. Drug nanocarriers to treat autoimmunity and chronis inflammatory diseases. Seminars in Immunology. 34, 61-67 (2017).
  9. Höbel, S., Aigner, A. Polyethylenimines for siRNA and miRNA delivery in vivo. Wiley Interdisciplinary Reviews: Nanomedicine and Nanobiotechnology. 5 (5), 484-501 (2013).
  10. Whitehead, K. A., Langer, R., Anderson, D. G. Knocking down barriers: advances in siRNA delivery. Nature Reviews Drug Discovery. 8 (2), 129 (2009).
  11. Liu, G., et al. N-Alkyl-PEI-functionalized iron oxide nanoclusters for efficient siRNA delivery. Small. 7 (19), 2742-2749 (2011).
  12. Weissleder, R., Nahrendorf, M., Pittet, M. J. Imaging macrophages with nanoparticles. Nature Materials. 13 (2), 125 (2014).
  13. Magro, M., et al. Covalently bound DNA on naked iron oxide nanoparticles: Intelligent colloidal nano-vector for cell transfection. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-General Subjects. 1861 (11), 2802-2810 (2017).
  14. Abdelrahman, M., et al. siRNA delivery system based on magnetic nanovectors: Characterization and stability evaluation. European Journal of Pharmaceutical Sciences. 106, 287-293 (2017).
  15. Zhang, H., Lee, M. -. Y., Hogg, M. G., Dordick, J. S., Sharfstein, S. T. Gene delivery in three-dimensional cell cultures by superparamagnetic nanoparticles. ACS Nano. 4 (8), 4733-4743 (2010).
  16. Moghimi, S. M., Hunter, A. C., Murray, J. C. Long-circulating and target-specific nanoparticles: theory to practice. Pharmacological Reviews. 53 (2), 283-318 (2001).
  17. Harvey, A. E., Smart, J. A., Amis, E. Simultaneous spectrophotometric determination of iron (II) and total iron with 1, 10-phenanthroline. Analytical Chemistry. 27 (1), 26-29 (1955).
  18. Duan, J., et al. Polyethyleneimine-functionalized iron oxide nanoparticles for systemic siRNA delivery in experimental arthritis. Nanomedicine. 9 (6), 789-801 (2014).
  19. Fröhlich, E. The role of surface charge in cellular uptake and cytotoxicity of medical nanoparticles. International Journal of Nanomedicine. 7, 5577 (2012).
  20. Wu, Y., et al. Ultra-small particles of iron oxide as peroxidase for immunohistochemical detection. Nanotechnology. 22 (22), 225703 (2011).
  21. Xia, T., et al. Polyethyleneimine coating enhances the cellular uptake of mesoporous silica nanoparticles and allows safe delivery of siRNA and DNA constructs. ACS Nano. 3 (10), 3273-3286 (2009).
  22. Mocellin, S., Provenzano, M. RNA interference: learning gene knock-down from cell physiology. Journal of Translational Medicine. 2 (1), 39 (2004).
  23. Courties, G., et al. et al.In vivo RNAi-mediated silencing of TAK1 decreases inflammatory Th1 and Th17 cells through targeting of myeloid cells. Blood. 116 (18), 3505-3516 (2010).
  24. Zolnik, B. S., Gonzalez-Fernandez, A., Sadrieh, N., Dobrovolskaia, M. A. Minireview: nanoparticles and the immune system. Endocrinology. 151 (2), 458-465 (2010).
  25. Mulens-Arias, V., Rojas, J. M., Pérez-Yagüe, S., Morales, M. P., Barber, D. F. Polyethylenimine-coated SPIONs trigger macrophage activation through TLR-4 signaling and ROS production and modulate podosome dynamics. Biomaterials. 52, 494-506 (2015).

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

T psay 144makrofajtransfectionnanopartik lsiRNA teslimpolyethyleneiminearagen susturmak

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır