JoVE Logo
АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Мы описываем метод использования полиэтиленимина (PEI)-покрытием суперпарамагнетическим оксида железа наночастицы для transfecting макрофагов с siRNA. Эти наночастицы могут эффективно поставлять малых интерферирующих РНК к макрофагов в пробирке и в естественных условиях и молчание экспрессии генов цели.

Аннотация

Из-за их решающую роль в регулировании иммунной реакции Макрофаги непрерывно были предметом интенсивных исследований и представляют собой многообещающие терапевтические целевой многих расстройств, таких как аутоиммунных заболеваний, атеросклероза и рак. Сайленсинга генов, опосредованного системой РНК-интерференции является ценным подход выбора зонд и манипулировать функции макрофагов; Однако transfection макрофагов с siRNA часто считается чтобы быть технически сложным, и в настоящее время, доступны несколько методик, посвященный siRNA передачи макрофагов. Здесь мы представляем протокол использования наночастиц полиэтиленимина покрытием суперпарамагнетическим оксида железа (пей-SPIONs) в качестве транспортного средства для доставки целевых интерферирующей РНК макрофагов. Пей-SPIONs способны привязки и полностью конденсации siRNA, когда массовая доля Fe: siRNA достигает 4 и выше. В пробирке, эти наночастицы могут эффективно поставлять малых интерферирующих РНК в первичных макрофагов, а также в Макрофаг как RAW 264.7 клеток линии, без ущерба для жизнеспособности клеток при оптимальной дозе для transfection, и, в конечном счете, они вызывают малых интерферирующих РНК опосредованной целевой сайленсинга генов. Помимо используется для в vitro трансфекции siRNA, пей-SPIONs также являются перспективным инструментом для доставки siRNA макрофагов в естественных условиях. С учетом его комбинированных особенностей магнитные свойства и способность заставлять замолчать гена системно управляемых Пей-SPION/siRNA частицы, как ожидается, не только чтобы модулировать функции макрофагов, но и для включения макрофаги образы и отслеживаются. По сути, пей-SPIONs представляют собой простой, безопасный и эффективный синцитиального платформу для доставки siRNA макрофагов в пробирке и в естественных условиях.

Введение

Макрофаги являются тип innate иммунных клеток, распространен во всех тканях организма, хотя и в разных количествах. Производя различные цитокины и других посредников, они играют важнейшую роль в принимающей обороны против вторжения патогенных микроорганизмов, в ткани ремонт после травмы и в поддержании гомеостаза ткани1. Из-за их важности макрофаги непрерывно были предметом интенсивных исследований. Однако, несмотря на его распространенности в ген регулирования и исследования функции, малых интерферирующих РНК опосредованной генов меньше шансов на успех в макрофагах, потому что эти клетки — в частности, первичного макрофаги — зачастую трудно transfect. Это можно объяснить сравнительно высокой степени токсичности связанные с наиболее устоявшихся трансфекции подходов, в которых клеточной мембраны является химически (например, полимеров и липидами) или физически (например, путем электропорации и Джин пушек) нарушается позволить siRNA молекул через мембрану, тем самым значительно снижая макрофаги жизнеспособности2,3. Кроме того макрофаги, посвященный фагоцитов богаты деструктивные ферментов. Эти ферменты могут нарушить целостность siRNA, ослабляет эффективность глушителя, даже если ген специфического siRNA был доставлен в ячейке3,4. Таким образом эффективный siRNA Макрофаг целевой системы доставки необходимо защищать целостность и стабильность малых интерферирующих РНК во время доставки4.

Становится все более очевидным, что неблагополучных макрофаги замешаны в инициации и прогрессирования некоторых общих клинических расстройств как аутоиммунных заболеваний, атеросклероза и рак. По этой причине, модулирует функции макрофагов с, например, siRNA формируется как привлекательный методологию для лечения этих расстройств по5,6,7. Хотя был достигнут значительный прогресс, главной задачей стратегии на основе малых интерферирующих РНК лечения является бедным ячейки специфика системно управляемых siRNA и недостаточно siRNA поглощение макрофагами, которые соответственно приводят к нежелательным побочным эффектам. По сравнению с свободной нуклеиновые кислоты терапевтов, которые обычно не имеют оптимальное ячейки избирательности и часто приводят к негативным последствиям, загруженных наркотиков наночастиц (NPs), ввиду их спонтанной склонность быть захвачен ретикулоэндотелиальной системы,-цели могут быть спроектированы для пассивной ориентации макрофагов в естественных условиях, позволяя для улучшения терапевтической эффективности с минимальными побочными эффектами8. Текущий NPs, изучены для доставки молекул РНК включают неорганических nanocarriers, различные липосомы и полимеров9. Среди них полиэтиленимина (PEI), тип катионных полимеров, способных привязки и конденсации нуклеиновых кислот в стабилизированное NPs, показывает высокий РНК, обеспечивая потенциал9,10. PEI защищает нуклеиновые кислоты от ферментативного и nonenzymatic деградации, является посредником при их передаче через клеточную мембрану и способствует их внутриклеточного релиз. Хотя первоначально введено как реагент доставки ДНК, пей впоследствии был продемонстрирован быть привлекательной платформой для в естественных условиях доставки siRNA, либо локально или системно9,10.

Наночастицы суперпарамагнетическим оксида железа (SPIONs) показали большие перспективы в биомедицине, вследствие их магнитные свойства, биосовместимость, сопоставимого размера биологически важных объектов, высокий коэффициент площадь поверхности и объем и легко адаптируется поверхностью для bioagent крепления11. Например из-за их потенциальной полезности в качестве контрастного вещества и быстрое поглощение макрофагами, SPIONs появились как любимый клинический инструмент для изображения ткани макрофагами12. В то время как SPIONs также были широко изучены как нуклеиновые кислоты доставки транспортных средств11,13,14,15, к нашему знанию, литература содержит несколько сообщений о SPIONs как носитель для Макрофаг целевой siRNA доставки. Для доставки генов, SPIONs их поверхность обычно покрыты слоем гидрофильные катионных полимеров, на которые отрицательно заряженных нуклеиновые кислоты может быть электростатически привлекают и привязал. Здесь мы представляем метод синтеза SPIONs, поверхность которых изменяется с низким молекулярным весом (10 кДа), разветвленные Пей (пей-SPIONs). Затем эти магнитные nanoplatforms заняты уплотнить siRNA, образуя комплексы Пей-SPION/siRNA, позволяющие транспорта малых интерферирующих РНК в клетку. Мы причина что спонтанное фагоцитоза SPIONs клеток ретикулоэндотелиальной системы16, в сочетании с сильной способности привязки и конденсации нуклеиновых кислот, пей, оказывает Пей-SPIONs подходит для эффективной перевозки малых интерферирующих РНК в макрофаги. Представленные здесь данные поддерживают возможности подавления экспрессии гена Пей-SPION/малых интерферирующих РНК опосредованной в макрофагах в культуре, а также в естественных условиях.

протокол

Все методы, которые были проведены с участием живых животных в соответствии с животное уход и использовать руководящие принципы Юго-Восточный университет, Китай.

1. Подготовка Пей SPIONs

  1. Подготовка олеиновая кислота модифицированных SPIONs
    1. Растворите FeCl3•6H2O и FeSO4•7H2O в воде под защитой N2.
      1. Добавьте 28 g O FeCl3•6H2и 20 г FeSO4•7H2O 80 мл обессоленной воды в стакан. Ввести N2 в воду через проводник стекла и размешать до полного растворения твердых веществ.
      2. Нагрейте смесь реакции до 72 ° C со скоростью перемешивания 800 об/мин, последующим добавлением 40 мл воды аммиака (28%). Мешайте в течение 5 мин.
    2. Добавить 9 мл олеиновой кислоты каплям в вышеупомянутых раствор и размешать в 72 ° C для 3 h.
    3. Прохладный полученный раствор до комнатной температуры (RT). Осадок решение через магнитной сепарации.
    4. Вымойте преципитат, содержащие SPIONs 3 x с абсолютного этилового спирта и, затем, разогнать осадок в 100 мл-гексана.
  2. Подготовка dimercaptosuccinic кислота модифицированных SPIONs
    1. Добавить 800 мг олеиновой кислоты (OA)-изменен SPIONs, диспергированных в 200 мл-гексана, и 400 мг dimercaptosuccinic кислоты (ДМСА) в 200 мл ацетона, разогнали в три шеи колбу в водяной бане при температуре 60 ° C.
      Примечание: Чтобы определить концентрацию OA-модифицированных SPION, полученные на предыдущем шаге, Возьмите небольшой объем (например, 1 мл) SPION дисперсии, испарения гексана и весят полученный порошок.
    2. Добавьте 200 мкл триэтиламин каплям в вышеупомянутых раствор с перемешивая при 1000 об/мин и орошения.
    3. После 5 h перемешивания и орошения получите черный осадок, магнитной сепарации.
    4. Разогнать гидрофильные SPIONs в деионизированной воде однородно, регулируя рН раствора с помощью Тетраметиламмония гидроксид.
  3. Подготовка Пей SPIONs
    1. Добавить ДМСА модифицированных SPION коллоидного раствора каплям в раствор (10 кДа) PEI в три шеи колбе 500 мл под механического перемешивания при 1000 об/мин 2 h (WFe: WPEI = 1:3).
      Примечание: Заряд и размер Пей-SPIONs зависимости от соотношение WFe для WPEI. WFe: WPEI соотношение 1:3 может быть хорошей отправной точкой для синтеза Пей-SPIONs подходит для доставки siRNA.
    2. Добавьте полученный раствор в трубу ультрафильтрации, имеющие молекулярный вес отсечки 100 кДа и содержание 15 мл; затем центрифуги на 5400 x g за 10 мин до оставшийся раствор 1 мл. Добавьте деионизированной воды решение сделать объемом 15 мл снова и повторите описанный выше процесс 10 x для получения конечного продукта. Затем фильтр решение через фильтр 0,22 мкм и хранения конечного продукта при 4 ° C.
    3. Определите концентрацию Fe Пей-SPIONs колориметрическим методом с использованием фенантролиновый17. Разбавить Пей-SPIONs с дейонизированной стерильной воды до концентрации 1 мг Fe/мл и хранить при 4 ° C.
    4. Разбавляют 10 мкл раствора Пей-SPION (1 мг Fe/мл) до 1 мл с дейонизированной водой; затем протестируйте его гидродинамические размер и Зета потенциальных устройством динамического рассеяния света.
      Примечание: Подготовьте Пей-SPIONs в диапазоне около 30-50 Нм. В этом диапазоне размеров влияние размера NP на Связывание siRNA и клеточного поглощения не представляется значительным. Пей-SPIONs подшипник средняя Зета потенциал более чем 37 mV могут быть токсичными в диапазоне доз для transfection и цитотоксичность assay должны выполняться для обеспечения безопасности. Поверхности заряд и гидродинамические размеров наночастиц можно управлять в пределах требуемого диапазона, регулируя PEI содержание.

2. Подготовка и электрофорез геля агарозы Пей-SPION/siRNA ЯИЭ

  1. Разбавьте siRNA с РНКазы свободной воды приносить конечная концентрация 20 мкм (0.26 мкг/мкл).
  2. Подготовьте пять свободных РНКазы microcentrifuge трубки помечены 0, 1, 2, 4 и 8. Метки представляют собой соотношение веса различных Fe: siRNA. Накапайте 3 мкл siRNA решения всех трубок (~0.8 мкг siRNA/трубки).
  3. Добавьте 0, 0,8, 1.6, 3.2, и 6.4 мкг Fe в виде Пей-SPIONs для трубки помечены 0, 1, 2, 4 и 8, соответственно. Сохраните объем общей выборки каждой трубы менее 20 мкл. Смешайте нежно закупорить вверх и вниз.
  4. Инкубируйте смеси на RT 30 мин разрешить комплекс формирования Пей-SPION/siRNA. В течение этого периода сделайте 3% агарозном гель с высокой чистоты агарозы.
    Примечание: Дополнительные Пей-SPION/siRNA комплексы с другими Fe: siRNA соотношения (например, 5 или 6) могут быть подготовлены и испытаны.
  5. Добавить 1 мкл 6 x ДНК загрузки буфера за 5 мкл пример и осторожно перемешать. Загрузить все образцы и запустить электрофорез на 5 V/см до тех пор, пока бромфеноловый синий мигрирует по мере две трети длины геля. Пятно гель бромидом ethidium (EB) для 15-20 мин.
    Примечание: Следует использовать буфер электрофореза свежеприготовленные и решения EB.
  6. Визуализируйте siRNA банды под УФ изображений системы. Проверьте Fe: siRNA коэффициенты на котором siRNA образует комплексы с Пей-SPIONs, и в результате, группы, представляющие бесплатно siRNA отсталых или не поддаются обнаружению.

3. transfection RAW264.7 макрофагов в пробирке

  1. Культура клетки RAW264.7 Макрофаг как мыши в 10 см блюдо с помощью DMEM завершить среднего содержащий 10% плода бычьим сывороточным (ФБС) на 100 ед/мл пенициллин за 100 мкг/мл стрептомицина при 37 ° C в 5% CO2 инкубатора.
  2. Один день до трансфекции, аспирационная среднего из клеток и промойте их фосфат амортизированное saline (рН 7,4). Добавьте 1 мл 0,25% трипсина на 10 см блюдо. Trypsinize RAW264.7 клетки около 5-10 мин при 37 ° C в 5% CO2 инкубатора.
  3. Когда большинство клеток отдельный (после 5-10 мин), добавьте 5 мл DMEM полного среднего блюдо, чтобы инактивировать трипсина. Накапайте вверх и вниз, чтобы разогнать кластеры клеток в одиночных камерах.
  4. Суспензию клеток передавать стерильные 15 мл Конические трубки. Центрифуги, на 300 g x 3 мин на RT. удалить супернатант.
  5. Ресуспензируйте клетки с 5 мл свежего DMEM полного среднего и подсчитать количество ячеек.
  6. Плита 9 x 104 клетки на хорошо в 6-ну плита с 2 мл полного DMEM среды и инкубировать при 37 ° C в 5% CO2 инкубатора для около 24 часов.
    Примечание: При использовании тарелку другого размера, отрегулируйте плотность покрытием клеток пропорционально относительной площади поверхности так, что клетки достигают 80% confluency в то время transfection.
  7. Когда ячейка confluency составляет 80%, извлеките носитель из клеток и заменить его с 1 мл раствора DMEM полного среднего за хорошо. Пластину можно вернуть инкубатора пока не пей-SPION/siRNA комплексы были подготовлены и готовы к использованию (около 30 мин).
  8. Подготовить Пей-SPION/siRNA комплексы: рассчитать количество комплексов Пей-SPION/siRNA, необходимые для transfection эксперимент. В 1,5 мл бесплатно РНКазы microcentrifuge трубку Смешайте соответствующее количество Пей-SPIONs с малых интерферирующих РНК в соотношении данной Fe: siRNA. К примеру, подготовить Пей-SPION/siRNA NPs, содержащие 100 мкг Fe в Fe: siRNA соотношении 4, добавить 100 мкл (1 мг Fe/мл) Пей-SPIONs до 96 мкл интерферирующей РНК (0.26 мкг/мкл), а затем осторожно смешивая его с микропипеткой. Инкубируйте 30 мин на RT.
    Примечание: Подготовка тома Пей-SPION/siRNA комплекса, что составляет 10% сверх общей массы окончательный счет для любых непредвиденных потерь. Сделайте Пей-SPION/siRNA комплексов на низких Fe: siRNA коэффициенты, при которых молекул siRNA полностью погружены на ОПЭ-SPIONs и, следовательно, небольшое количество Пей-SPIONs может использоваться для минимизации потенциальных цитотоксичности. Экспериментальный экспериментов (гель отсталости пробирного) для оптимизации соотношения Fe: siRNA являются необходимыми.
  9. Выньте пластину 6-ну из инкубатора (шаг 3.7). Добавьте необходимый объем Пей-SPION/siRNA комплекса каплям каждой скважины и вихрем пластину осторожно, чтобы обеспечить равномерное распределение. Возвращение пластину в инкубаторе до оценки клеточного поглощения или гена нокдаун эффективности (1-3 d).
    Примечание: Transfecting макрофагов с Пей-SPION/малых интерферирующих РНК в концентрации ~ 15 мкг Fe/мл может максимизировать эффективность трансфекции при минимизации потенциальных цитотоксичности.

4. Системные доставка малых интерферирующих РНК в макрофагов крыс с экспериментального артрита

  1. Получение конкретного возбудителя бесплатный мужской крыс Вистара которые 7 недель. Приучать крыс для 7 d до использования и их обеспечения надлежащей пищей и водой. Вызвать артрит адъювантной (AA) у крыс как описано18.
  2. Подготовьте Пей-SPION/siRNA комплексы, как описано в шаге 3.8.
  3. Inject Пей-SPION/siRNA NPs (0,3 мг siRNA/кг) в AA крыс через Вену хвост. Оценки клеточного поглощения через, например, проточной цитометрии, ткань накопление через, например, в реальном времени флуоресценции изображений системы, или терапевтические эффекты на основе, например, клинические, гистологическое и рентгенографических анализы в нужный момент очка18.
    Примечание: Для клеточных и тканевых накопление исследований, лечения крыс с одной инъекции желаемого ЯИЭ; для терапевтических исследований придать крыс с NPs протестированных 1 x в неделю в течение трех недель подряд.

Результаты

Размер и Зета потенциал Пей-SPIONs, приготовленные этот протокол были в диапазоне от 29-48 Нм (полиизопрена индекс: 0.12 - 0,23) и 30-48 м, соответственно. Они были стабильными в воде при температуре 4 ° C в течение 12 месяцев без очевидных агрегации. Чтобы оценить их siRNA привязки способ...

Обсуждение

Макрофаги являются тугоплавкие transfect часто используемые синцитиального подходы, например, электропорация, Катионный липосомы и липидов видов. Здесь мы описали надежный и эффективный метод для transfect макрофагов с siRNA. Используя настоящий Протокол, свыше 90% Макрофаг как RAW 264.7 клеток (

Раскрытие информации

Авторы не имеют ничего сообщать.

Благодарности

Эта работа была поддержана Фонд национального естественных наук Китая (81772308) и Национальный исследовательский ключ и Программа развития Китая (№ 2017YFA0205502).

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
DMEMGibcoC11995500BTWarm in 37°C water bath before use
Fetal bovine serumGibcoA31608-02
Penicillin/streptomycin (1.5 ml)Gibco15140122
Tetrazolium-based MTS assay kitPromegaG3582For cytotoxicity analysis
RAW 264.7 cell lineCell Bank of Chinese Academy of Sciences, Shanghai, ChinaTCM13
Tissue culture plates (6-well)Corning3516
Tissue culture dishes (10 cm)Corning430167
RNase-free tubes (1.5 ml)AXYGENMCT-150-C
Centrifuge tubes (15 ml)Corning430791
TrypsinGibco25200-056
Wistar ratsShanghai Experimental Animal Center of Chinese
Academy of Sciences
Bacillus Calmette–Guérin freeze-dried powderNational
Institutes for Food and Drug Control, China		for inducing adjuvant arthritis in rats
siRNAGenePharma (Shanghai, China)
Cy3-siRNARiboBio (Guangzhou, China)
Polyethyleneimine (10 kDa)Aladdin Chemical Reagent Co., Ltd.E107079
Ammonia waterAladdin Chemical Reagent Co., Ltd.A112077
Oleic acidAladdin Chemical Reagent Co., Ltd.O108484
DimethylsulfoxideAladdin Chemical Reagent Co., Ltd.D103272
FeSO4•7H2OSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd10012118
FeCl3•6H2OSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd10011918
Dimercaptosuccinic acidAladdin Chemical Reagent Co., Ltd.D107254
ultrafiltration tubeMilliporeUFC910096
Tetramethylammonium hydroxide solutionAladdin Chemical Reagent Co., Ltd.T100882
Particle size and zeta potential analyzerMalvern, EnglandNano ZS90

Ссылки

  1. Murray, P. J., Wynn, T. A. Protective and pathogenic functions of macrophage subsets. Nature Reviews Immunology. 11 (11), 723 (2011).
  2. Maeß, M. B., Wittig, B., Lorkowski, S. Highly efficient transfection of human THP-1 macrophages by nucleofection. Journal of Visualized Experiments. (91), e51960 (2014).
  3. Zhang, X., Edwards, J. P., Mosser, D. M. The Expression of Exogenous Genes in Macrophages: Obstacles and Opportunities. Macrophages and Dendritic Cells. , 123-143 (2009).
  4. Zhang, M., Gao, Y., Caja, K., Zhao, B., Kim, J. A. Non-viral nanoparticle delivers small interfering RNA to macrophages in vitro and in vivo. PLoS ONE. 10 (3), e0118472 (2015).
  5. Davignon, J. -. L., et al. Targeting monocytes/macrophages in the treatment of rheumatoid arthritis. Rheumatology. 52 (4), 590-598 (2012).
  6. Brown, J. M., Recht, L., Strober, S. The promise of targeting macrophages in cancer therapy. Clinical Cancer Research. 23 (13), 3241-3250 (2017).
  7. Karunakaran, D., et al. Targeting macrophage necroptosis for therapeutic and diagnostic interventions in atherosclerosis. Science Advances. 2 (7), e1600224 (2016).
  8. Prosperi, D., Colombo, M., Zanoni, I., Granucci, F. Drug nanocarriers to treat autoimmunity and chronis inflammatory diseases. Seminars in Immunology. 34, 61-67 (2017).
  9. Höbel, S., Aigner, A. Polyethylenimines for siRNA and miRNA delivery in vivo. Wiley Interdisciplinary Reviews: Nanomedicine and Nanobiotechnology. 5 (5), 484-501 (2013).
  10. Whitehead, K. A., Langer, R., Anderson, D. G. Knocking down barriers: advances in siRNA delivery. Nature Reviews Drug Discovery. 8 (2), 129 (2009).
  11. Liu, G., et al. N-Alkyl-PEI-functionalized iron oxide nanoclusters for efficient siRNA delivery. Small. 7 (19), 2742-2749 (2011).
  12. Weissleder, R., Nahrendorf, M., Pittet, M. J. Imaging macrophages with nanoparticles. Nature Materials. 13 (2), 125 (2014).
  13. Magro, M., et al. Covalently bound DNA on naked iron oxide nanoparticles: Intelligent colloidal nano-vector for cell transfection. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-General Subjects. 1861 (11), 2802-2810 (2017).
  14. Abdelrahman, M., et al. siRNA delivery system based on magnetic nanovectors: Characterization and stability evaluation. European Journal of Pharmaceutical Sciences. 106, 287-293 (2017).
  15. Zhang, H., Lee, M. -. Y., Hogg, M. G., Dordick, J. S., Sharfstein, S. T. Gene delivery in three-dimensional cell cultures by superparamagnetic nanoparticles. ACS Nano. 4 (8), 4733-4743 (2010).
  16. Moghimi, S. M., Hunter, A. C., Murray, J. C. Long-circulating and target-specific nanoparticles: theory to practice. Pharmacological Reviews. 53 (2), 283-318 (2001).
  17. Harvey, A. E., Smart, J. A., Amis, E. Simultaneous spectrophotometric determination of iron (II) and total iron with 1, 10-phenanthroline. Analytical Chemistry. 27 (1), 26-29 (1955).
  18. Duan, J., et al. Polyethyleneimine-functionalized iron oxide nanoparticles for systemic siRNA delivery in experimental arthritis. Nanomedicine. 9 (6), 789-801 (2014).
  19. Fröhlich, E. The role of surface charge in cellular uptake and cytotoxicity of medical nanoparticles. International Journal of Nanomedicine. 7, 5577 (2012).
  20. Wu, Y., et al. Ultra-small particles of iron oxide as peroxidase for immunohistochemical detection. Nanotechnology. 22 (22), 225703 (2011).
  21. Xia, T., et al. Polyethyleneimine coating enhances the cellular uptake of mesoporous silica nanoparticles and allows safe delivery of siRNA and DNA constructs. ACS Nano. 3 (10), 3273-3286 (2009).
  22. Mocellin, S., Provenzano, M. RNA interference: learning gene knock-down from cell physiology. Journal of Translational Medicine. 2 (1), 39 (2004).
  23. Courties, G., et al. et al.In vivo RNAi-mediated silencing of TAK1 decreases inflammatory Th1 and Th17 cells through targeting of myeloid cells. Blood. 116 (18), 3505-3516 (2010).
  24. Zolnik, B. S., Gonzalez-Fernandez, A., Sadrieh, N., Dobrovolskaia, M. A. Minireview: nanoparticles and the immune system. Endocrinology. 151 (2), 458-465 (2010).
  25. Mulens-Arias, V., Rojas, J. M., Pérez-Yagüe, S., Morales, M. P., Barber, D. F. Polyethylenimine-coated SPIONs trigger macrophage activation through TLR-4 signaling and ROS production and modulate podosome dynamics. Biomaterials. 52, 494-506 (2015).

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

144transfection

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены