Method Article
Burada, BİYOANALİZLER bir mantar patojen, Colletotrichum fioriniae, yaban mersini yoksa yabanmersini çiçek özleri cam coverslips Tarih huzurunda gelişimini izlemek için tasarlanmıştır açıklanmıştır. Su - kloroform-, dayanarak ve alan yağmur suyu - çiçek çıkarma teknikleri bu bilgileri uygulanabilir nasıl fikir yanı sıra ayrıntılı olarak açıklanmıştır.
Çiçeklenme dönemi fenoloji ve çiçek kimyasal yardımlar üzerinde mantar meyve patojenler çürüyen zamansal dinamiği doğru bir şekilde izlemek için çiçek çıkarma yöntemleri ve coverslip BİYOANALİZLER Colletotrichum fioriniaekullanarak geliştirilmiştir. Yaban mersini ve kızılcık, bu patojen nedeniyle enfeksiyon, ilk evrelerinde rol çiçek çiçeklenme döneminde mantar ilaçları uygulayarak en uygun şekilde denetlenir. Burada ayrıntılı protokolünü açıklar nasıl çiçek özleri (FE) karşılık gelen cam coverslip BİYOANALİZLER daha sonra kullanmak için su, kloroform ve alan yağmur suyu tabanlı yöntemleri kullanarak elde edilmiştir. Farklı bilgi sağlamak için her FE hizmet: C. fioriniae yanıt seferber çiçek kimyasal için ipuçları su (su bazlı), çiçek ve meyve yüzey mumlar (kloroform tabanlı) ve alan bazlı izlenmesi patojen yanıt vitro gözlemler bir tarım ayarı için hareketli çiçek yağmur suyu, toplanan. FE geniş ya su veya kloroform tabanlı olarak, uygun bir bioassay telafi etmek için bu iki malzeme arasında içsel farklılıklar açıklanan ile tanımlanır. Çiçek çalıştırmak vardı yağmur suyu içinde benzersiz aygıt her ürün için toplanan esneklik ve uygulama diğer ürün sistemleri için bu yaklaşımın ima. BİYOANALİZLER hızlı, ucuz, basit ve uyarıcı Çiçek bileşikleri varlığı hakkında kronolojik zamanmekansal ve siteye özgü bilgileri çeşitli kaynaklardan oluşturma yeteneği sağlar. FE azaltmak gibi enfeksiyon gerçekleşmesi gereken süreyi bu bilgileri sonuçta daha iyi hastalık yönetimi stratejileri, böylece içine büyüyen sezon boyunca patojen enfeksiyon riskleri değişen bilgiler sağlayan bilgi verecektir.
Colletotrichum fioriniae bir meyve çürüklüğü Highbush yaban mersini (Vaccinium corymbosum L.) ve büyük Amerikan kızılcık (macrocarpon V. Aiton)1,2neden olur. Bu patojen son zamanlarda C. acutatum tür karmaşık3,4,5,6 belirlendi ve yaban mersini Antraknoz nedensel bir ajan ve kızılcık meyve çürüklüğü üyesi karmaşık, yanı sıra çok sayıda diğer bitki hastalıkları dünya çapında7neden. C. fioriniae bir gizli, hemibiotrophic yaşam tarzı8, meyve olgunlaşma9son aşamasında kadar belirgin hale değil bloom ve belirti geliştirme sırasında ortaya çıkan enfeksiyonlar ile vardır. Yaban mersini ve yaban mersini meyve çürüklüğü sadece yeterince çiçeklenme döneminde yapılmış mantar ilacı uygulamaları ile kontrol edilir. Patojen uyuyan yaban mersini çiçek tomurcuk ölçekler10 ' overwinters ve çiçeklenme sırasında sporulates. Conidia gölgelik via yağmur-splash dağılma11,12 taşınır ve inoculum birikimi güçlü çiçeklenme dönemi13ile ilişkili. Çiçek narenciye yazı bloom meyve bileşenleri (PFD)14 yanı sıra çilek Antraknoz15, neden her iki durumda da bırak önemli olduğu gibi ana çiçek Colletotrichum türlerin yanıt Vacciniumiçin benzersiz değil sporulate patojen. Tüm bu durumlarda çiçek kimyasal yardımlar C. fioriniae ve çiçeklenme sırasında enfekte diğer patojenleri üzerinde zamansal dinamiği değerlendirmek etkili yöntemler ihtiyacını vurgulamak. Burada açıklanan yöntemler tarafından sağlanan anlayışlar giderek daha değerli hale gelmektedir.
Bu iletişim kuralı çiçek özü (FE) satın alma yöntemleri detayları ve FE C. fioriniae yanıt değerlendirilmesi via cam coverslip BİYOANALİZLER15,16kılavuzları. Çiçek çıkarma teknikleri iki ana tipe ayrılır; su bazlı çekimi (etkin-FE, pasif (pass -FE) ve alan yağmur suyu tabanlı (rw-FE)) ve kloroform tabanlı (ch-FE)17 çekimi. Su bazlı çekimi seferber su çiçek kimyasal cues incelenmesi için izin. FE, büyük ölçüde enfeksiyon enfeksiyon gerçekleşmesi gerekli nem sağlayan ek16, hızını artırır bu yana seferber bu ipuçları büyük olasılıkla önemli enfeksiyon mahkemenin bileşenleridir. Ayrıca, temsil ettikleri çiçek stimülasyon-ebilmek var olmak yıkamak gölgelik ıslatma-olaylar daha önce gözlenen yaban mersini ve diğer kırpma sistemleri14,16olarak sırasında gibi daha doğal bir durum. Çiçek çekimi (ch-FE) kloroform tabanlı bir sağlamak aynı zamanda değerli bilgileri patojen yanıt-e doğru ev sahibi yüzey17,18conidia bir kez duyarlı üzerine yatırılır erken büyüme dönemlerinde elucidating, mumlar Ana organlar (Yani çiçekler, yumurtalıklar ve gelişmekte olan meyve). Patojen yanıt-e doğru ev sahibi yüzey Vakslar mevsimsel değişimler de bu iletişim kuralını kullanan izlenebilir. Buna göre BİYOANALİZLER su bazlı FE veya kloroform tabanlı FE bu iki malzeme arasında içsel farklılıklar azaltmak için olan çalışma için düzenlenmiştir.
Su bazlı çekimi ikincil conidiation yüksek düzeyde kloroform tabanlı çekimi daha uyarmak BİYOANALİZLER oluşturulan verilerin ortaya olduğu yere kesin appressorial yanıt, bu nedenle birden çok bileşikleri göstermek için FE mevcut. İlginçtir, bu büyüme yanıt-e doğru her ikisi de ne zaman birden fazla uyarıcı bileşikler gösteren yaban mersini ve kızılcık çiçek kapalı çalıştırmak vardı yağmur suyu kullanarak çiçek yüzeyinden yıkanabilir tespit edildi. Böylece, çiçek uyarılması için izleme patojen başarı bir tarım sisteminde görmemizi sağlar.
Bu iletişim kuralı, nihai hedefi mantar bitki patojenleri çiçek kimyasal ipuçlarını yanıt getirici temel biyolojik bilgi için bir metodoloji yanı sıra yardım çiçek bu bilgi-ebilmek kullanmak Başlatan metodolojileri sağlamaktır siteye özel hastalık yönetimi ve karar alma süreçleri.
1. mantar yalıtır ve spor süspansiyonlar
2. aktif, su bazlı çiçek özleri (etkin -FE)15,16
Not: Bkz: tamamlayıcı şekil 1, tamamlayıcı Şekil 2, tamamlayıcı şekil 3ve tamamlayıcı film 1.
3. pasif , su bazlı çiçek özleri ( geçmek -FE) 16
Not: Ek 2filme.
4. kloroform tabanlı çiçek özleri (ch-FE) 17
5. yağmur suyu Blueberry çiçekler (BB rw-FE)16 topluluğu
Not: Yaban mersini çiçek yağmur suyu toplama aygıt bir hava tabancası tek kullanımlık boya sprey Kupası konnektör adaptör'ü ile oluşur (Kupası: kadın iş parçacığı, adaptörü: erkek-erkek iplik), 50 mL santrifüj tüpleri (polipropilen), parafilm ve plastik kaplı teller () Standart telefon kablosu, bireysel iç tel strand içeriği).
6. yağmur suyu kızılcık çiçekler (CB rw-FE) üzerinden topluluğu
7. bioassay15,16 su dayalı çiçek özleri kullanarak (etkin-FE, pass-FE, rw-FE)
Not: Bkz. şekil 1.
8. bioassay17 çiçek özleri (ch-FE) kloroform tabanlı kullanma
Not: Şekil 2bakın.
9. kızılcık fenoloji tabanlı çekimi17
Sonuçları burada sunulan bu metodoloji kullanarak gerçekleştirilen birçok deneyleri birkaç örnektir. Şekil 1 su bazlı FE bioassay resimli bir kılavuzdur ve kloroform tabanlı FE bioassay izleyen Şekil 2 desteklenmiştir. Şekil 3 ne C. fioriniae mikroskobik değerlendirilmesi, 24 h, her iki su ve kloroform tabanlı BİYOANALİZLER (göre SDW denetimleri) üzerine beklenebilir için görsel bir kılavuz sağlar. Şekil 4 kızılcık çeşitli 'Stevens' ch-FE huzurunda C. fioriniae ile 24 h saat ders çalışma detayları ve bu araştırma bir alma sonucu için görsel referans verir: FE azalmıştır zaman formu enfeksiyon yapıları için gerekli SDW için karşılaştırıldı. Şekil 5 kızılcık çiçek yağmur suyu akış (CB "Çiçek" rw-FE) kullanarak bir coverslip bioassay toplanan verileri gösteren bir örnek sağlar. Şekil 6 temsil eden başka bir önemli sonuç: çiçek yumurtalık ch-FE meyve ch-FE, çiçekler yaşam döngüsü içinde önemini gösteren daha çok daha uyarıcı C. fioriniae. Ek fotoğraf ve film çekimi ve çiçek yağmur suyu toplama cihazlar/dağıtım, görselleştirmek aktif - ve pasif - ayıklama (film ek olarak kullanılan çiçek önemli görsel sağlamak su bazlı) süreçleri.
Resim 1 : Genel su bazlı bir çiçek özü (FE) bioassay. Bu tahlil su bazlı çiçek özleri ile yaban mersini ve kızılcık çiçekler için kullanılmıştır: etkin -çiçek özleri (etkin-FE), pasif -çiçek özleri (geçmek-FE) ve çiçek yağmur suyu akış (rw-FE). - FE bölümü deneysel/değişken faktör genellikle kabul ettiğiniz anlamına gelir. Diğer taraftan - FE bölümü sabit kalır ve zaman Puan/saat sonrası aşılama değerlendirilir. Tercih doğru 200 X büyütme, 4 alan analizi yapılmıştır. Kısaltmalar: Steril deiyonize su, SDW; Alan başına görüş alanı, A. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Resim 2 : Genel kloroform tabanlı bir çiçek özü (ch-FE) bioassay. Bu tahlil yaban mersini ve kızılcık (çiçek, yumurtalıklar ve meyve) için kullanılmıştır. Tek tip bir sulu tedavi karışımı bu tahlil, 1 Bölüm spor süspansiyon (conidial konsantrasyonu ch-FE buharlaşma nedeniyle tutarlı tutmak için) 2 parça SDW için kullanıldı. Bu tahlil birden fazla ch-FE (balmumu çeşitli bitki yüzeyler) veya birden çok kez Puan/saat sonrası aşılama tek bir ch-FE kullanarak karşılaştırmak için kullanılabilir. Kısaltmalar: Steril deiyonize su, SDW; Van Tieghem [cam] hücre VanT. hücre. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 3 : Görsel Colletotrichum fioriniae su bazlı FE ve ch-FE karşılaştırılması. Bu tahlil blueberry 'Bluecrop' içinde (etkin-FE, su bazlı) (mantar izole: BB #10) ve kızılcık 'Stevens' kloroform tabanlı (ch-FE) (mantar izole: CB-PMAP182) çiçek özleri SDW denetimlere karşılaştırıldığında. Conidia SDW (kontrol) (A) etkinhuzurunda karşılaştırırken ikincil conidiation (yüzük) ve appressorium oluşumu (ok uçları) dramatik bir artış gözlendi-FE (B) 24 saat sonrası aşılama. Ancak, ikincil conidiation ne zaman karşılaştırma-ch-FE (D)kloroform bioassay SDW denetimi (C) kadar belirgin değildi; daha doğrusu, C. fioriniae büyüme appressorial oluşumu doğru kaymıştır. Kloroform tabanlı, ana bilgisayar/çiçek türleri ne olursa olsun açıklanan ve gösterilen her ayıklama türü, su bazlı için ortak bir yanıttır. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 4 : Ch-FE huzurunda zaman ders çalışma (24 saat) Colletotrichum fioriniae . Bu tahlil içinde bir SDW denetim (A-D) ve kızılcık 'Stevens' ch-FE (E-F) görsel olarak 0, 6, 12 ve 24 saat sonrası aşılama (birden çok FE karşılaştırma yerine değişken zaman puan örneği) denetlendi. Appressorium oluşumu (ok uçları) 6 h ch-Fe'de başladı ve sonraki zaman Puan giderek arttı. Bu sonuçları eludes patojen Biyoloji önemli bir faktör çiçeklenme döneminde: çiçek formu enfeksiyon yapıları için gereken süreyi azaltmak. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 5 : Bir bioassay rw-FE kullanarak toplanan verilerin grafik ekran. Yağmur suyu çalıştırmak kızılcık çiçekler (CB "Çiçek" rw-FE) kapalı ve herhangi bir kızılcık bitki dokulardan ("Ground" rw-FE) tek bir ıslatma olay artı bir çift aktif, su bazlı kızılcık çiçek özü (CB etkin dokundu bakir yağmur suyu -FE) (pozitif kontrol) ve SDW (negatif kontrol) bir su bazlı coverslip bioassay tabi ve C. fioriniae büyüme için değerlendirilir. CB "Çiçek" rw-FE standart CB etkinolarak ikincil conidiation ve appressorium oluşumu aynı düzeyde vardı-koleksiyon aygıtları çiçek uyarıcılar sırasında çıkış yakalayan etkili olduğunu belirten FE 24 saat sonrası aşılama, adlı bir ıslatma-olay. Toplam conidia (yatırılır) İlköğretim, conidia ve yeni kurulan ikincil conidia oluşur. Harfler (LSD); p < 0,05 Fischer'ın en azından önemli bir değişikliğe göre önemli farklılıklar test gösterir büyük harfli, toplam conidia; küçük harf, appressoria. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 6 : Kızılcık fenoloji dayalı ch-FE bioassay, görsel denetim. Hastalık yönetimi mantarlar kez çürüyen meyve için bloom kez mantar ilacı uygulamaları içerir. Burada, kızılcık kloroform tabanlı özler (ch-FE) kızılcık ('Stevens') birden fazla büyüme aşamalarında etkisi yüzey Vakslar C. fioriniae , 24 saat sonrası aşılama için görsel olarak değerlendirildi. Yumurtalık toplanan Haziran (A), Temmuz ve Ağustos aylarında toplanan olgunlaşmamış meyve (B, C), hasat meyve toplanan Ekim (D)ve bir SDW denetimi (E) appressorial oluşumu (ok uçları) kontrol. Yumurtalık ch-FE appressorial oluşumu, bu bitki fenoloji (bloom) için yaşam döngüsü C. fioriniaeönemli olduğunu belirten en büyük büyüklüğü vardı. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Tamamlayıcı şekil 1: Blueberry önümüzdeki. Yaban mersini çiçekler ('Bluecrop' olarak gösterilen) çekimi için tam çiçeklenme (Nisan-Mayıs ayında New Jersey, ABD) sırasında toplanmıştır. Corollas/yumurtalık bitişik çiçek üzerinden örtüşme ve tamamlayıcı Şekil 2 ile (kızılcık dik) karşılaştırıldığında önümüzdeki genel mimarisi unutmayın. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Tamamlayıcı Şekil 2: kızılcık dik. Kızılcık çiçekler ('Stevens' olarak gösterilen) çekimi için tam çiçeklenme (Haziran-Temmuz ayında New Jersey, ABD) sırasında toplanmıştır. Not bir tek kızılcık önümüzdeki (dik) ve çengel çeşitli çiçek Etaplar, su damlacığı corolla şeklinde istinat. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Tamamlayıcı şekil 3: Blueberry yağmur suyu dağıtım (çiçek). Yaban mersini çiçek yağmur suyu toplama aygıt, doğrudan çiçeklenme bir küme altında yerleştirilen tamamlandı. Dikey olarak cihazın yönlendirmek için kullanılan plastik kaplı tel unutmayın. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Tamamlayıcı şekil 4: Blueberry yağmur suyu dağıtım (kök). Tamamlanan yaban mersini çiçek yağmur suyu toplama aygıt, yarım taç Bush arasındaki bir önümüzdeki kök aşağı yerleştirilir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Tamamlayıcı Şekil 5: Blueberry yağmur suyu dağıtım (taç). Yaban mersini çiçek yağmur suyu toplama aygıt, bush (taç) tabanında yer tamamlandı. Not plastik kaplı teller-ebilmek var olmak çıkarmak değil gerekirse. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Tamamlayıcı şekil 6: Blueberry yağmur suyu dağıtım (toprak). Bakire yağmur suyu toplama aygıt, yaban mersini çalılar için bitişik yerleştirilen tamamlandı. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Tamamlayıcı Şekil 7: kızılcık yağmur suyu dağıtım (yakın çekim). Kızılcık çiçek yağmur suyu toplama cihazı, iki tarafta düzgünce çapraz kablo bağları altında sıkışmış ile tamamlandı. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Tamamlayıcı şekil 8: kızılcık yağmur suyu dağıtım. Çoklu bir bataklıkta dağıtılan kızılcık çiçek yağmur suyu aygıtları tamamlandı. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Tamamlayıcı film 1: etkin, su bazlı çiçek özleri (etkin -FE). Aşağıdaki adımları 2.3-2.5.1 tamamlayıcı video desteği. Yaban mersini 'Bluecrop' çiçek kullanılmıştır. Bu videoyu izlemek için lütfen buraya tıklayın. (İndirmek için sağ tıklatın.)
Tamamlayıcı Movie 2: pasif, su bazlı çiçek özleri (geçmek-FE). 3.3-3.4 tamamlayıcı video desteği aşağıdaki adımları. Yaban mersini 'Bluecrop' çiçek kullanılmıştır. Bu videoyu izlemek için lütfen buraya tıklayın. (İndirmek için sağ tıklatın.)
Tamamlayıcı film 3: dağıtım kızılcık çiçek yağmur suyu toplama cihazların. 6.4. adımda takip tamamlayıcı video desteği. Bu videoyu izlemek için lütfen buraya tıklayın. (İndirmek için sağ tıklatın.)
C. fioriniae yanıt çiçek özleri (FEs) olarak tespit BİYOANALİZLER için blueberry ve yaban mersini meyve çürüklüğü pathosystems geliştirilen ama diğer bahçe bitkileri için kolayca adapte edilebilir. Yukarıda ayrıntılı iletişim kuralı da dahil olmak üzere birçok önemli veri kümeleri alınıyor değerli edilmiş, fakat bunlarla sınırlı olmamak üzere: FE etkileri çok sayıda patojenlerin, mantar büyüme aşamalarında çeşitli FEs, huzurunda zamanlı Kurs bilgileri birden çok yalıtır Ekstraksiyon teknikleri karşılaştırılması, muayene C. fioriniae büyüme ve farklılaşma, bireysel çiçek organ değerlendirilmesi bireysel kimyasalların ayıklar, C. fioriniae FE iken, etkileri huzurunda sıcaklık etkileri fenoloji bağımlı balmumu çekimi ve çiçek yağmur suyu etkileri. C. fioriniae hayat çok daha net anlaşılmasını sahneler ve çiçeklenme dönemi birçok meyve patojenler çürüyen denetimine çok önemlidir bu yüzden kısmen elucidates sağlanan bu teknikler kullanılarak oluşturulan veri da vardır.
Başlangıçta, tüm çiçekler aynı şekilde etkinolarak işlenmiş olan-FE ama ayıklama işlemi tüm çiçekler kullanarak doğru taşındı. Çiçek diseksiyon zaman alıcı ve elde edilen FEs bioactivity üzerinde çok az etkisi vardı. Ancak, bireysel çiçek organlarını ve varsa olabilir be değerlendirilmiş kullanarak bu iletişim kuralı, ama büyük bir özenle götürülmeli tamamen çiçek dokuları (tamamlayıcı film 1, 2,3 adımda ayrıntılı önlemler ile), macerate için bu kadar neden olup serbest bırakmak mikroskobik Değerlendirmeler deforme FE içine mantarlar-toksik/statik bileşikler. Daha az invaziv çekimi gibi pass -FE (tamamlayıcı film 2) ve rw-FE şimdi edinme kolaylığı nedeniyle daha uygun. Ayrıca, bu ayıklama teknikleri biyolojik olarak aktif çiçek kimyasal ipuçlarını elde etmek için yalnızca vakum filtrasyon gerektirir.
Tüm çekimi kullanılan çiçekler genellikle 0-3 için buzdolabında gün kala özü hazırlık. Bu iletişim kuralı zaman yönetimi FE ciro (alan koleksiyonu depolama yoluyla özler) mücadeledir. Bu birden çok kaynak ve tarihleri çok sayıda örnekleri şiddetlenir. Bozulan ve renksiz çözdürülen çiçek göründükleri gibi donmuş çiçekler herhangi bir gerçek ölçüde, değerlendirilmemiştir. Ancak, bir kez su bazlı FEs hazırdı, buz gibi tekrarlanan ve çözülme etkisi üzerinde göstermiştir FE FE hoşça bioactivity hızlı bir şekilde refrozen bioassay hazırlık (uygun 3 yaşındaki FE) sonra.
Kloroform tabanlı ayıklama patojen yanıt için üç boyutlu çiçek/meyve yüzey Vakslar ch-FE buharlaşma cam coverslips doğum via iki boyutlu düzlemde incelenmesi sağlar. Ancak, bu ch FE'den yatırılır mumlar gerçek kristal yapılarının hangi onlar toplanmıştır yüzeye aynıdır düşüktür. Belirli balmumu yapıları vivo içinde mantar yanıt soruşturmanın ana odak varsa niyetli, tamamlayıcı teknikleri uygulanmalıdır. Kloroform tabanlı özleri su bazlı çekimi daha daha fazla depolama bakım gerekir. Ch-FE özleri karanlıkta tutmak, yanı sıra PTFE kaplı hücre kültürü kapaklar ve şal Evaporatif kaçakları için düzenli olarak kontrol edilmesi gerek mühürleme parafilm tüp ve gerektiği gibi yerine.
Çiçek yağmur suyu akış kontrolü kavramı siteye özgü hastalık izleme araçları tarihini erkene alma fikrini yatmaktadır. Çiçek kapalı tükendi yağmur suyu toplama aygıt yakalar sürece yağmur suyu toplama cihazlar diğer birçok bitki mimarileri için adapte edilebilir. Bu yaklaşım olsun veya olmasın çiçek stimülasyon herhangi bir zamanda alanında mevcut ve sezon boyunca izlenebilir hakkında bilgi sağlar. Alternatif olarak, koleksiyon cihazlar ne kadar çiçek cues verilen herhangi sırasında ıslatma-olay yıkanmış belirlemek için birden fazla gölgelik yerlerde dağıtılabilir. Gelecekte deneyler, mantar ilacı uygulamaları ne zaman başlaması gerektiğini ve ne zaman güvenli bir şekilde sona erebilir rw-FE belirleyecektir. Ayrıca, fenoloji bağımlı balmumu çekimi (iletişim kuralı Bölüm 9) izleyerek, çiçeklenme dönemi patojen Biyoloji için önemi daha da belirgin haline gelmiştir. Bu bölüm Ayrıca geçici ayrılır ana yüzey Vakslar yan yana karşılaştırma için izin yöntemleri sağlayan bu BİYOANALİZLER esnekliğini göstermek için eklenmiştir. Çiçek çıkarma teknikleri ve BİYOANALİZLER kullanılarak oluşturulan verilerin patojen stimülasyon, somut göstergeleri belirli kimyasal sınıfları patojen Biyoloji ve gelecekteki kontrol stratejileri için hedefler için temsil eder.
Yazarlar ifşa gerek yok.
William S. Haines, Sr. donatılmış kızılcık Araştırma Fonu ve New Jersey Blueberry ve kızılcık Araştırma Konseyi, Inc destek için teşekkür ederiz. Biz de teşekkür ederiz Jennifer Vaiciunas (rehberlik ve çiçek hazırlıklar), Christine Constantelos (mantar kültürü ve çiçek hazırlıkları), David Jones (çiçek ürünleri ve çekimi), Langley Oudemans (çiçek hazırlıklar, filme/fotoğraf), Jesse Lynch (çiçek hazırlıklar), Roxanne Tumnalis (genel destek) ve çok sayıda öğrenci/yaz stajyer.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
0.22 µm pore size, acetate sterilizing filter | VWR | 101102-280 | Blueberry floral extract (FE) clarification |
200-1000 µl pipette with tips | - | - | Equipment, any make within range will be adequate |
40-200 µl pipette with tips | - | - | Equipment, any make within range will be adequate |
5-40 µl pipette with tips | - | - | Equipment, any make within range will be adequate |
Air spray gun disposable paint spray cup with connection adapter | Harbor Freight | 97098 | Blueberry rainwater (rw-)FE collection |
Autoclave | Amsco | 3011 | Equipment, media preparation |
Bar mesh matting (plastic mesh sheet) | Winco | BL-240 | Passive (pass)-FE collection |
Benchtop timer | Fisher Scientific | 06-662-47 | Equipment, FE preparation |
Black pressure/vacuum hose | VWR | 62994-795 | Vacuum filter component |
Buchner funnel | Coors USA | 60240 | Vacuum filter component, accepts 55 mm filter paper disks |
Bunsen burner | - | - | Equipment |
Calcium carbonate | Fisher Scientific | C64-500 | Media component |
Centrifuge | Sorvall | RC 5B Plus | Equipment |
Centrifuge tubes (15 ml) | Fisher Scientific | 05-527-90 | Equipment |
Centrifuge tubes (50 ml) | VWR | 10025-694 | Equipment, rw-FE collection |
Cheesecloth (grade 50) | Fisher Scientific | AS240 | Equipment, FE preparation |
Chloroform | VWR | JT9175-3 | Chemical, trichloromethane: assay grade, ≥ 99% pure, for molecular biology, peroxide-free |
Corn Meal Agar (CMA) | Fisher Scientific | B11132 | Pre-mix media, isolate storage on slants |
Cotton-blue stain | Sigma-Aldrich | 61335 | Lactophenol cotton-blue stain |
Difco Agar | VWR | 90004-032 | Media component |
Drill-press | Delta | - | Equipment, rw-FE collection |
EASYpure LF Ultrapure water | Barnstead | D738 | Equipment, deionized water source |
Ethanol (95%) | - | - | Chemical |
Filter flask (500 ml) | Pyrex | No. 5340 | Vacuum filter component |
Fume hood | Hamilton | - | Equipment, chloroform usage |
Funnel (7 X 7 cm) | VWR | 60820-110 | Cranberry rw-FE collection, FE preparation |
Generic glass slide | Fisher Scientific | 22-038-101 | Bioassay conductance |
Generic plastic pump spray bottle | VWR | 16126-454 | pass-FE collection, at least 250 ml capacity |
Glass cell culture tubes | - | - | Storage of ch-FE |
Glass coverslips (22 x 22 mm) | Fisher Scientific | 12-542B | Bioassay conductance |
Glass Van Tieghem cells (hand cut glass tubes) | - | - | Chloroform (ch)-FE bioassay, (8 mm OD 6 mm ID) |
Glass-pipette (1-100 µl) | Hamilton Co. Inc. | #710 | ch-FE bioassay |
Glycerol | Sigma-Aldrich | G5516 | Lactophenol cotton-blue stain |
Hemocytometer | Bright-Line | 5971R10 | Equipment |
Lactic acid | Sigma-Aldrich | W261106 | Lactophenol cotton-blue stain |
Laminar flow hood | Labconco | 3730400 | Equipment, sterile work environment |
Metal probe (generic) | - | - | Equipment |
Microcentrifuge tubes (2 ml) | Fisher Scientific | 05-408-138 | Aqueous treatment mixture storage and preparation |
Microscope, Leica DMLB | Leica | 020-519.010 | Equipment |
Mortar (ceramic) | Coors USA | 60313 | Vacuum filter component |
Nitrile gloves | Fisher Scientific | 19-130-1597D | Flower collection |
Paper disks (cut paper towels) | Office Basics | KCC01510 | humidity control in bioassay |
Parafilm | Bemis | PM-996 | Plastic paraffin film |
Pestle (ceramic) | Coors USA | 60314 | Vacuum filter component |
Phenol crystals | Fisher Scientific | A92-100 | Lactophenol cotton-blue stain |
Plastic bags (~100 mm X 152 mm) | Uline | S1294 | Equipment, flower refrigeration |
Plastic cell culture dishes (9 cm diameter) | Fisher Scientific | FB0875712 | (Petri dish), bioassay conductance |
Polytetrafluoroethylene (PTFE) lined caps | VWR | 60927-228 | Storage of ch-FE |
Pyrex beakers (100 ml) | Pyrex | No. 1000 | Preparation of ch-FE |
Pyrex bread-pan | - | - | pass-FE collection |
Pyrex graduated cylinder | - | - | Equipment, FE preparation |
Sealed plastic container (30 mm X 13 mm X 7 mm) | - | - | Bioassay conductance |
Sharp-pointed dissecting scissors | Fisher Scientific | 8940 | Equipment, to cut cheese-cloth and paper disks |
Stainless steel mesh strainer | VWR | 470149-756 | Preparation of ch-FE |
Step drill bit (step-bit) | Dewalt | - | Equipment, rw-FE collection |
Sterile loop (combi-loop) | Fisher Scientific | 22-363-602 | Culture preparation |
Telephone wire (internal wires) | - | - | Blueberry rw-FE collection |
Test tube basket | VWR | 470137-792 | Readily available substitution for plastic mesh [strawberry] basket |
V8 Juice | Campbell's Soup Company | - | Fungal media component |
Vintage plastic mesh [strawberry] baskets | Donation | - | pass-FE collection, can substitute for test tube basket (470137-792) |
Vortex Genie (Vortex) | Fisher Scientific | 12-812 | Spore suspension preparation |
Whatman No. 1 Qualitative 55 mm circles | Whatman | 1001-055 | Vacuum filter component |
White plastic twist ties (100 mm) | Uline | S-566W | Cranberry rw-FE collection |
Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi
Izin talebiThis article has been published
Video Coming Soon
JoVE Hakkında
Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır