Sol Anterior İnen Koroner Arterin Kalıcı Ligasyonu ile Murine Miyokard Enfarktüsü Modeli

Özet

Burada farelerde sol anterior inen koroner arterin kalıcı ligasyonunun nasıl elde edilebildiğini gösteren bir cerrahi prosedürü açıklıyoruz. Bu model miyokard enfarktüsü ve eşlik eden biyolojik süreçlerin patofizyolojisini araştırmak için yüksek öneme hemşilir.

Özet

Miyokard enfarktüsü (MI) ve akut koroner hastalıklar batı yaşam tarzına sahip popülasyonda en belirgin ölüm nedenleri arasındadır. Sol-anterior inen kalıcı ligasyon ile MI murine modelleri (LAD) koroner arter yakından insanlarda MI taklit. Murine modelleri günümüzde mevcut olan kapsamlı genetik mühendislikten yararlanmaktadır. Burada kalıcı LAD koroner ligasyonu ile miyokard enfarktüsünün tekrarlanabilir bir murine cerrahi modelini öneriyoruz. Tekniğimiz ketamin/ksilazin ile anesteziden oluşur, antagonist intübasyon, mekanik destekli ventilasyon için trakeotomi olmadan entübasyon, ekstrensek pozitif uygulama ile ventilasyon alveoler çöküşü önlemek için son ekspiratuar basınç (PEEP), iskelet kaslarına yapılan minimum cerrahi lezyonları sınırlayan bir torakotomi yöntemi, ve torasentez olmadan akciğer enflasyonu. Bu yöntem seyrek invaziv, tekrarlanabilir ve ameliyat sonrası mortalite ve komplikasyonları azaltır.

Giriş

Akut miyokard enfarktüsü (MI) iskemik kalp hastalıklarının (İhD) en şiddetli ifadesidir. İhD, özellikle batı ülkelerinde, dünya çapında morbidite ve ölüm lerin önde gelen nedenidir^1. Sonuç olarak, sağlık sistemleri üzerinde büyükbir ekonomik etkisi vardır 2. MI aterosklerotik plak ile bir koroner arter tıkanıklığı ve miyokardyumun büyük bölgelerinde kan akımının sonraki tutuklanması ile karakterizedir. Miyokardlarda oksijen yetersizliği kardiyomiyositlerin iskemik ölümüne yol açar. Bu patolojik durum ventriküler dokuda yanıtları tetikler sonuçta ventriküler fonksiyonlarda eksikliklere yol açar, remodeling ve kalp yetmezliği³. MI düzenlenmiş hücre ölümü, oksidatif strese yanıt, inflamasyon, yara iyileşmesi, fibrozis ve ventrikül remodeling oluşan birden fazla ve karmaşık biyolojik süreçler içeren karmaşık bir patofizyolojik durumdur. Bu biyolojik yanıtların bazıları hasara bağlı moleküler desenlerin nekrozkaynaklı salınımı ve ilişkili inflamatuar yanıtlar gibi in vitro bireysel süreçler olarak modellenmiştir⁴. Bu basitleştirilmiş modeller MI anlamak için gereklidir. Ancak sadece bir in vivo modeli MI yanıt yapan biyolojik süreçler karmaşıklığı gerçekçi bir görüntü sağlayabilir.

Domuz gibi büyük hayvanlarda MI modelleri daha yakından MI insan patofizyolojisi ile ilgili olsa da, murine modellerinin gücü diğer memeli türlerine göre daha gelişmiş genetik mühendisliği tarafından sunulan olanaklar da bulunur. Diğer ihmal edilemez yönleri göreceli düşük maliyet ve cerrahi kurulum basitliği vardır.

Miyokardinisin iskemi-reperfüzyonu modellerinin kalıcı MI modellerinden farklı sonuçlar sergilenebildiği nden bahsetmek tefaydalıdır. Miyokard dokusunda inflamatuar ve yara iyileşmesi yanıtlarının hücre ölümü tipi, kalite/genlik veya kinetik gibi biyolojik süreçler modele göre değişebilir^5,6,7. Ancak, kalıcı koroner oklüzyon bu protokol kolayca bir iskemi-reperfüzyon modeli elde etmek için adapte edilebilir.

Bu yöntem reperfüzyon olmadan MI fizyopatolojisi ile ilgili çalışmalar için önemlidir ve lokal kalp dokusunda ve sistemik kalp dokusunda koroner oklüzyondan (dakika) geç evre kalp yetmezliğine (hafta) kadar patolojik süreçlerin izlenmesine olanak sağlar. Düzey.

Protokol

Bu protokolde tanımlanan hayvan deneyleri Vaud Kantonu Hayvan Etik Komitesi tarafından gözden geçirildi ve onaylandı.

NOT: Bu deneylerde 25 g ile 30 g arasında ve 8-12 haftalık erkek C57Bl/6J fareler kullandık. Fareler chow pelet ve su reklamı libitum beslenen ve geleneksel koşullar altında yetiştirilen edildi. Cerrahi ekipmanlar daha önce sterilize edildi. Deneyci kontaminasyon ve postoperatif enfeksiyonları sınırlamak için steril cerrahi eldiven ve cerrahi maske takmalıdır.

1. Anestezi ve trakeal kanülasyon.

1. Anestezik ilaçların dozajını belirlemek için fareyi tartın, postoperatif analjezik ilaç ve ventilatörün gelgit hacmini belirleyin. Isıtma yastığını 37 °C'de önceden ısıtın. Cerrahi kurulum Şekil1'de gösterilmiştir.
2. Fareye ketamin ve ksilazin karışımı ile sırasıyla 80 mg/kg ve 10 mg/kg enjekte edin.
3. Fare kürkü, elektrikli bir jilet kullanarak fare kürkünün boğazını ve göğüs kafesinin sol tarafını hızlı bir şekilde tıraş edin.
4. Kuyruk ve/veya arka ayakları çimdikleyerek anestezinin derinliğini kontrol edin ve hayvanı ısıtma yastığında supine pozisyonunda yerleştirin. Gözlerin aşırı ısınmasını önlemek için hayvanın başının altına küçük bir gazlı bez kompres yerleştirin. Göz kuruluğu önlemek için oküler jel uygulayın.
5. Isıtma yastığının yüzeyinde ki yapışkan bantla dört uzvunu sabitleyin. Üst kesici dişlerin altında 5-0 ipek sütür bir döngü geçirin ve ısıtma yastığı üzerine yapışkan bant ile döngü ekstremite sopa. Bu hayvanın ağzını açık tutacak ve kanülasyonu kolaylaştıracaktır.
6. Önceden tıraş edilen alanlara epilasyon kremi uygulayın ve 1 dk. Kesi bölgelerini temizlemek için %0,9 tuzlu çözelti ve gazlı bez kullanın. Tıraş boğaz ve toraks steril gazlı bez parçaları uygulayın ve iodopovidon onları ıslatın.
   NOT: Kesi bölgelerine lokal anestezik ilaç (lidokain veya bupivacain) uygulanmasını öneriyoruz.
7. Ventilatörü 7 mL/kg'lık bir gelgit hacmine ve 140 vuruş/dak havalandırma hızına ayarlayın.
   NOT: Şu andan itibaren mikrocerrahi stereomikroskop altında çalışmaya devam edin.
8. Boğazın ortasında deri tutun ve küçük makas kullanarak bir kaudal / sefalik çizgi aşağıdaki 0,5 cm bir kesi gerçekleştirin. Tükürük bezinin loblarını ayırın, daha sonra gırtlak ve trakea görünene kadar kıvrımlı diseksiyon forceps ile sternohyoid kas hafifçe ayrı fasya. Elastik bantlara bağlı retraktörlerle açıklığın güvenli kenarları.
   NOT: Bu adımı kasların kesilmesi olmadan yapın. Eğitimli bir operatör bu adımı isteğe bağlı hale trakea görselleştirme olmadan oral kavite yoluyla hayvan entübe etmek mümkün olacak.
9. Dili yavaşça yana tutun. Forceps ile, trakea içine bir 16 G kanül körkulaklı iç iğne takın. Boğaz kesisi ile trakea içine doğru ekleme görselleştirin.
10. Kanülleri ventilatöre bağlayın ve egzoz borularını suya yerleştirerek doğru havalandırmayı sağlayın. Kabarcıkların varlığı doğru entübasyon gösterir.
    NOT: Ameliyat sırasında dokuları ıslak tutmak için steril gazlı bez %0.9 tuzlu çözelti ve boğaz kesisinde iyodopovion ile ıslatılır. İşlem sırasında nemi kontrol edin.

2. LAD koroner arter ligasyonu

1. Sol ön pençeyi koli bandından serbest bırakın ve fareyi dikkatlice sağ taraftaki dekübititus pozisyonuna taşıyın. Hayvan doğru pozisyonda olduğunda sol ön ekstremiteyi sabitle.
2. Sol pektoralis minör ve majör kaslar arasındaki çizgiyi belirleyin ve çizgiyi takip eden makasla 1 cm'lik eğik bir deri kesisi yapın. Künt mikro makas diseksiyon ile, kesit olmadan pektoralis kaslarının ayrı fasya. Elastik bantlara bağlı retraktörlerle ayrılmış pektoralis kaslarını koruyun.
3. Ventilatöre 3 cm H₂O pozitif son ekspiratuar basınç (PEEP) ayarlayın.
4. 3^{ve 4} kaburga arasında 3 interkostal boşlukta künt forceps kullanarak göğüs boşluğu açın. Kanama tehlikesi olduğu için iç torasik artere dokunmaktan kaçının. Kalp veya akciğer dokunmayın. Göğüs kafesine iki retraktör uygulayın, her kaburgaya bir tane (Şekil2A).
5. Kavisli ince forceps ile, dikkatle perikard kaldırmak ve kalp ve akciğerlere zarar vermeden ayrı çekin.
6. Sol anterior inen bulun (LAD) koroner arter. LAD arter apeks doğru sol auricle kenarından çalışan yüzeysel parlak kırmızı bir çizgi olarak görünür.
7. Sol atriin in altında LAD 2-3 mm altında 7-0 ipek dikiş geçmek için bir iğne tutucu kullanın. Kalp dokusunun yırtılmasını önlemek için yavaşça ipek çekin. Bağları üç düğümle bağlayın. Sol ventrikülalt sol kısmı hemen ligasyon üzerine soluk dönecek (Şekil 2B-E).
   NOT: Ventriküler kavitenin çok derinlerine inmemek veya çok yüzeysel kalmak önemlidir. Sham-işletilen hayvanlar için, LAD altında dikiş ipek çekin ve yavaş yavaş doku yırtılma kaçınarak kaldırın.
8. Kaburga retraktörlerini serbest bırakın, 3 kaburgayı forceps ile tutun ve³ ve⁴ kaburganın altında 6-0 ipek sütürle iki geçiş yapın.
   DİkKAT: Delikli kalp veya akciğer etmeyin. Henüz düğümleri sıkmayın.
9. 37 °C tuzlu çözeltinin üç damlasını açıklığın üzerine koyun ve akciğerleri düzgün bir şekilde şişirmek için 2 veya 3 solunum döngüsü için son kullanma egzoz tüpünü kapatın. Dikiş sıkın ve iki atar ile güvenli.
10. Kasları tutan retractors bırakın ve onları doğru yer almak yardımcı olur.
11. 5-0 dikiş ipek iki dikiş ile göğüs derisi kapatın ve iki atar ile güvenli. 5-0 dikiş ipek bir dikiş ile yakın boğaz cilt ve iki atar ile güvenli.

3. Ameliyat sonrası prosedürler ve takip.

1. Uzuvlardan yapışkan bant bantlarını çıkarın. Hayvanın sağ tarafında ısıtma yastığı bir kompres koyun.
   NOT: Anesteziden bu noktaya kadar olan genel işlem 40-45 dk'dan uzun sürmemelidir.
2. Intraperitoneally enjekte 0.3 mL 5% glikoz çözeltisi önceden 37 °C'de ısıtılır.
3. Dikkatle kompres ped üzerine ventral dekübit us üzerinde hayvan açın.
4. Ventilatör durdurun; fare kendiliğinden nefes alırsa, kanülleri dikkatlice çıkarın.
5. Deri altı (SC) 0,1 mg/kg buprenorfin enjekte edin ve fareleri 30 °C'de ısıtılan ve %100 O₂ ile havalandırılan önceden ısıtılmış bir kafese koyun.
6. Ameliyatı takip eden iki ilk gün boyunca, fareyi günde iki kez izleyin. Enjekte SC 0.1 mg/kg buprenorfin günde iki kez. İntraperitoneally günde iki kez % 5 glikoz çözeltisi 0.3 mL 0 enjekte. Yumuşak diyet ve su reklam libitum ile fareler sağlayın. Gerekirse hayvanı ısıtın.
   NOT: Opioidlere ek olarak, hayvanlara diyette karıştırılan veya içme suyunda seyreltilmiş steroid olmayan anti-inflamatuar ilaçlar sağlanmalıdır.
7. Üçüncü günden itibaren, hayvan genel görünüm, solunum veya davranış la ilgili olağandışı belirtiler gösteriyorsa, günde iki kez SC 0.1 mg/kg buprenorfin enjekte edin. Hayvan hala kilo kaybediyorsa, intraperitoneally günde iki kez % 5 glikoz çözeltisi 0.3 mL enjekte. Gerekirse hayvanı ısıtın.
   NOT: Aşırı acı çekmemek için gerektiğinde önceden tanımlanmış kesinti kriterlerini kesinlikle uygulayın. Genellikle fareler gün 3 ve 4 kadar kilo ve daha sonra kilo. Yedi gün sonra, fareler genellikle ameliyat öncesi ağırlık almak.

Sonuçlar

Fareler ameliyattan yedi gün sonra ötenaziye alındı. Hayvanlar 80 mg/kg ketamin ve 10 mg/kg ksilazin ile anestezi edildi. Anestezi altında vena kavadan kan alındı ve kalp örneği alındı. Atria çıkarıldı, miyokardiyum buz gibi PBS ile yıkandı. İskemik alanların ölçümleri için kalpler -20 °C'de 40 dakika donduruldu, daha sonra %2 triphenyltetrazolium klorür (TTC) içeren PBS'de 37 °C'de 20 dakika dilimlendi ve boyandı. Kalp dilimleri oda sıcaklığında %4 tamponlu paraformaldehit çözeltisinde bir gecede sabitlendi. İskemik alanlar lekesiz kalırken, canlı doku dehidrogenaz varlığı nedeniyle kırmızı ile boyanmıştır. İskemik alanlar sol ventrikülün (LV) beyaz alanının yüzdesi olarak bir görüntüleme yazılımı ile hesaplandı (Şekil3A, B). Biyokimyasal ve moleküler biyoloji analizleri için kalpler sıvı nitrojenle donduruldu. Sıvı azot üzerinde kalpleri taşlama sonra organ tozu protein ve mRNA ekstraksiyon için kullanılmıştır. Enfarktüs kalplerin miyokardiyal dokusundaki fibrozisin kapsamı, sırasıyla miyofibroblastların ve TGFβ sinyal aktivasyonunun başlıca okumaları olan alfa düz kas aktininin (αSMA) ve SMAD2 fosforilasyonunun batı leke analizi ile değerlendirildi ( Şekil 3C). TgfbmRNA ekspresyonu , ve downstream hedefleri Ctgf, Postn ve Il11 miyokardfibrozis tüm göstergeleri vardır. Bu gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) analizi (Şekil3D)ile gösterilmiştir.

Pro-inflamatuar sinyal yolları ve pro-inflamatuar genlerin ekspresyonu tipik olarak miyokard infarktüsü sonrası ilk hafta içinde aktive bulundu. NF-κB p65 transkripsiyon faktörünün fosforilasyon iltihabının bir özelliğidir ve MI mice'nin tüm miyokard özlerinde gözlenmiştir (Şekil3E). pro-inflamatuar genlerin mRNA ekspresyonu Il1b, Il6 ve Cxcl10 (Şekil 3F) ve monosit/makrofaj belirteçleri Cd14 ve Mertk gerçek zamanlı PCR (Şekil 3G) ile analiz edildi. NF-κB p65 ve SMAD2 fosforilasyon ölçüde bir değişkenlik olduğunu unutmayın (Şekil3C,E, şerit 4-7). Bu değişkenlik büyük ölçüde enfarktın boyutuna bağlıdır.

Şekil 1 : Cerrahi kurulumun tanımı. (A) Cerrahi kurulum modifiye ısıtma yastığı, bir vantilatör ve elastik bantlar bağlı retraktörler oluşur. (B) Ameliyat sırasında kullanılan makas, forceps ve iğne tutucu seti. (C) Mini retraktörlerin yakın çekim. Gösterilmez: cerrahi stereo mikroskop. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 2 : Cerrahi ve LAD ligasyonu temsili görüntüler. (A) Retraktörler ile açık göğüs. Sol ventrikül belliydi. Üst, sol ve alt retraktörler göğüs kafesi düzenlenen ve sağ retraktör pektoralis kas düzenledi. (B) İğne LAD altında geçti. (C) Dikiş ipek LAD altında, sol ventrikül içine geçti. (D) LAD tek dikiş. (E) Ligasyon işleminin sonunda, dikiş üç düğüm ile güvence altına alındı. (F) Kalbin ön görünümünün temsili. LAD ligasyonunun pozisyonu 2-3 mm aşağıda sol atria ve LAD'nin diyagonal dalı üzerindeydi. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 3 : Fibrozis ve tüm miyokard özleri iltihap ameliyat sonrası yedi gün. (A) Ameliyat sonrası yedi gün içinde dilimlenmiş enfarktlı bir kalbin TTC lekelerinin temsili görüntüleri. Soluk iskemik alanlar lekesiz ve beyaz kalırken, canlı doku kırmızı lekeliydi. Ligasyon soldan üçüncü dilimde görülüyordu. (B) Beş infarktlı kalbin iskemik alanlarının büyüklüğü TTC boyama tekniği ile ölçüldü. Sonuçlar sol ventrikül (LV) beyaz alan yüzdesi idi. (C) Fibrozisin göstergesi olarak tüm miyokardiyumda SMAD2 fosforilasyonve alfa-SMA ekspresyonunun batı leke analizi. (D) tüm miyokard özlerinde Tgfb, Ctgf, Postn ve Il11 mRNA ekspresyonu. (E) Tüm miyokard özlerinde NF-κB p65 fosforilasyonun batı lekesi. (F) pro-inflamatuar genlerin mRNA ekspresyonu Il1b, Il6 ve Cxcl10 tüm miyokard özleri. (G) Cd14 ve Mertk'in mRNA ekspresyonu sırasıyla monosit/makrofajlar ve fagositik makrofajların miyokardiyumundaki varlığın göstergesidir. Sham'da N = 3 ve MI grubunda N = 4. mRNA ekspresyon analizi için ifade endojen kontrol Rps18'e göreidi ve grup karşılaştırmaları öğrencinin T-testleri, *p ≤ 0,05, **p ≤ 0.01, *** p ≤ 0.001 olarak eşleşti. B, D, F ve G panellerinde hata çubukları standart sapmaları temsil eder.  Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Tartışmalar

Bu işlemin ilk kritik adımı kesinlikle entübasyondur. 16 G kateterin körelmiş iç iğnesini trakeal tüp olarak kullanıyoruz. Bu kurulumu 22 g'dan daha hafif farelerle kullanmanızı önermiyoruz. Bu kurulum ile, trakea zarar vermeden daha küçük vücut ağırlığı ile düzgün fareler entübe etmek zor olabilir. Bir diğer kritik nokta da trakea ve göğüs kafesini ortaya çıkarırken kaslara yapılan kesileri sınırlamaktır. Doku hasarının azaltılması, özellikle MI'den sonraki inflamatuar süreçleri incelerken büyük önem taşımaktadır. Bu yüzden forseps ve retractors^8,9ile kas ve kaburga nazik yayılması tercih olmasıdır. Biz kanama¹⁰kontrol etmek için elektrikli karaçer kullanmayın. Bu iyatrojenik yanıklarneden olabilir ve enfeksiyonları lehine. Hem travma hem de enfeksiyonlar inflamatuar okumalara neden olabilir. Ventilasyon egzozunun torakotomi sırasında son ekspiratuar alveoler çökmesine daldırılarak 3 cm H₂O'luk dışsal peep uygulaması. LAD lokalizasyonu başka bir kritik adımdır ve koroner arterlerin anatomisi zorlanma ve fare¹¹genotip bağlı olarak değişebilir akılda tutmak gerekir. Lad'i görselleştirmek için biraz deneyim gerektirir, ancak dikişin prosedürde açıklandığı gibi sol atriya 2-3 mm doğrudan yerleştirilmesi ligasyonun doğru konumlandırılmasına olanak sağlar. Dikiş altında sol ventrikül büyük porsiyonanında renk değişikliği doğruluğu teyit. Son olarak, yapay göğüs kapanması sırasında 2-3 solunum döngüleri için ventilasyon egzoz engelleyerek otomatik PEEP uygulayarak torasik kavite hava kovalamak yardımcı olacak akciğer geçici bir hiperenflasyon sağlar¹². Biz bilerek ⁹,¹⁰gösterildiği gibi bir torasentez yapmazlar. Bu şekilde, akciğer ve kalp yaralanmaları riskini sınırlamak ve aşırı doku hasarı veya perforasyon önlemek.

Miyokardiyal iskemi-reperfüzyon (I/R) kliniklerde MI hastalarına yapılan koroner kan akımının restorasyonu taklit ilgili bir cerrahi modeldir. G / R modeli sırasında koroner arter geçici bir tıkanıklık 20 ila 45 dk^8,13bir süre için LAD üzerine tüp bir parça sıkma tarafından yapılır. Daha sonra oklüzyon istenilen süre boyunca miyokardrerere izin serbest bırakılır. Protokolümüze uygulanan bu basit değişiklik kolayca bir G / R modeli⁴,^8,14,15dönüştürebilirsiniz. Enfarktüs kardiyak troponin T^8,10 veya ekokardiyografi¹⁵için bir kan testi ile teyit edilebilir.

MI, reperfüzyonun tek başına yaralanmaya neden olduğu için I/R modelinden farklıdır. MI daha fazla doku nekrozu neden olur ve apoptoz daha reperfüzyon miyokardiyum belirgindir⁵. İnflamatuar hücrelerin infiltrasyonukinetiği de MI ve IR arasında MI⁷bağışıklık hücrelerinin gecikmiş miyokardiyal infiltrasyonu ile farklıdır. Enfarkt alanın büyüklüğü ve konumu da kalıcı ligasyon ve G/R modelleri arasında farklılık gösterir¹⁵. Bunu göz önünde bulundurarak, G/Y ve kalıcı MI modelleri eşdeğer olmadığından, ilgili bir model seçmek için dikkatli olmak gerekir. Miyokard enfarktüsünün bir diğer murine modeli de kriyoinfarktüs modelidir. LV ön duvarına kriyojenik bir sonda uygulanması LAD arterventriküler doku ve kan akımı arrest donma neden olur. Ancak bu teknik, remodeling ve inflamatuar yanıtların zamanlaması ve genliği ile ilgili MI ve I/R tekniklerinden farklıdır^16,17.

Değişkenlik herhangi bir cerrahi işlem için bir sınırlamadır. Bu değişkenlik biyolojik farklılıklara dayanır. İyi bir örnek farelerde koroner arteriyel düzenleme varyasyonu¹¹. Aynı zamanda deney becerilerine de dayanır. Bu modelle istikrarlı sonuçlara ulaşmak için deneycilerin yeterli eğitiminin zorunlu olduğunu belirtmekte faydalıdır. İyi eğitilmiş bir deneyci kolayca tekrarlanabilir enfarktüs boyutları üretebilir (Şekil3A-B). Modelin mortalitesi LAD'nin konumuna, deneylerin süresine (günler, haftalar), fare zorlanmasına ve genotiplere bağlıdır. Anestezik ve analjezik ilaçların türleri de putatif kardiyoprotektif veya kardiyodepresan etkileri ile deneylerin sonucunu etkileyebilir. Bizim elimizde bu modelin küresel ölüm oranı %25-30'dur. Bu ölüm oranı, suşlar ve deney süresi ne olursa olsun, deney bitmeden önce spontan ölüm ve fedakarlıkları kapsar. Ölümlerin ya da fedakarlığın çoğu ameliyat sonrası ikinci ve dördüncü günler arasında. Sıkı bir ağrı yönetimi uygulamak ve hayvanların takibi mortaliteyi azaltabilir.

Burada ttc boyama ve protein ve genlerin ekspresyonu kullanılarak analiz edilen enfarktüs boyutunun temsili sonuçlarını sırasıyla batı lekeve gerçek zamanlı PCR ile LV'de inflamatuar veya fibrotik süreçlerde yer alan genler satmaktadır (Şekil 3C-G). Bu parametrelerin çoğunu enzime bağlı immünosorbent tahlil (ELISA) veya enzimosit testleri ile ölçmek de mümkündür. Tabii ki, test edilmesi gereken hipoteze uygun olarak, bu yöntem ultrason, MRG veya intraventriküler kateter basınç ve hacim ölçümü ile herhangi bir fonksiyonel analiz ile takip edilebilir. Ayrıca kalp ayıklamak ve izole hücreler üzerinde kardiyak hücre biyolojisi daha fazla araştırmak mümkündür. Genel olarak, LAD koroner arter kalıcı ligasyon ile MI modeli özellikle inflamatuar ve fibrotik süreçleri değerlendirmek için yararlıdır, yara iyileşmesi ve miyokard infarktüsü sonrasında kardiyak fonksiyon değişiklikleri.

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
1 CC Syringe, Omnifix-F	B. Braun	9161406V
30G- Needle	BD Microlance 3	304000
70% Ethanol
Betadine 60 ml	MundiPharma
Blunt Retractors	Fine Science Tools	18200-09
Castroviejo Needle Holder Straight with Lock	Roboz	RS-6416
Cotton Swabs	Applimed SA	6001109
Dissecting Scissors, Curved	Aesculap	BC603R
Electrical Razor	Remington	HC720
Glucose 5% B.Braun	B. Braun	531032
Hair Removal Cream, Veet	Silk & Fresh Tech.	8218535
Iris Dissecting Forceps Full Curved	Aesculap	OC022R
Ketasol 100 (100 mg/ml)	Dr. E. Graeub AG	QN01AX03
Micro Scissors, Curved Blunt/Blunt	Aesculap	FM013R
NaCl 0.9% B. Braun	B. Braun	534534
Short Fixator	Fine Science Tools	18200-01
Silk Suture 5-0, BB	Ethicon	K880H
Silk Suture 6-0, P-1	Ethicon	639H
Silk Suture 7-0,BV-1	Ethicon	K804
Student Dumont #7 Forceps	Fine Science Tools	91197-00
Student Fine Forceps-Angled	Fine Science Tools	91110-10
Surgical Gloves	Weitacare	834301
Surgical heating pad	Personalized setting
Temgesic  sol 0.3 mg/ml  Buprenorphine	Indivior Schweiz AG	N02AE01
Tracheal tube inner needle of an 16G i.v. cat	Abbocath-T	G714-A01
Universal S3 Microscope, OMPIMD	Zeizz
Ventilator, MiniVent Model 845	Harvard Apparatus	73-0043
Viscotears	Alcon	1551535
Xylasol (1mg/ml)	Dr. E. Graeub AG	QN05CM92