Rat ve Rabbit anevrizma modellerinde anevrizma perfüzyon ve ebeveyn arter patensinin değerlendirilmesi için floresan anjiyografi

Özet

Foscein bazlı floresan video anjiyografi (FVA) kullanılarak, sıçan ve tavşanlarda yan duvar anevrizmasının anevrizma perfüzyon ve damar patinliğini verimli bir şekilde değerlendirmek için bir protokol sunuyoruz. % 92,6 pozitif tahmini değeri ile, özel bir ekipman gerektirmez basit ama çok etkili ve ekonomik bir yöntemdir.

Özet

Beyin anevrizması tedavisi tam tıkanıklık elde odaklanarak, yanı sıra ana arter kan akışını korumak. Floresan sodyum ve indokyanin yeşil sırasıyla kan akımı ve damar perfüzyon durumunun gözlem sağlamak için kullanılır. Bu çalışmanın amacı, tavşan ve fareler içinde yan duvar anevrizmalarının indüksiyonu sonrasında gerçek zamanlı kan akışını, damar perfüzyon durumunu ve anevrizmaların tıkanmasını doğrulamak ve bu türlerin prosedürünü doğrulamak için FVA uygulanmadır.

20 yan duvar anevrizması, bir donör tavşanın karotis arter üzerinde deselülarize arter damar torbası sütür tarafından 10 tavşan oluşturuldu. Ayrıca 48 fareler içinde 48 mikrocerrahi yan duvar anevrizması oluşturuldu. Yaratılışın ardından bir ay içinde takip sırasında, üst arter/anevrizma kompleksi disseke ve FVA bir intravenöz floresan kullanılarak yapılmıştır (10%, 1 ml) tavşanlar bir kulak ven kateterizasyon ile enjeksiyon ve fareler femoral ven kateterizasyon Laboratuan. Anevrizmalar daha sonra hasat edildi, ve patkans makroskopik olarak değerlendirildi.

Makroskopik olarak, 14 ' ü tavşanlar içinde 16 anevrizma tamamen okcluded luminae ile hiçbir kalıntı ebeveyn arter perfüzyon gösterdi, ancak 11 (79%) FVA tarafından tespit edildi. Teknik sorunlar nedeniyle dört anevrizma dışlandı. Sıçanlarda, 48 olguda 25 ' in altında kalan anevrizma perfüzyon makroskopik olarak görülür. 23 ' ün makroskopik perfüzyon kanıtı olmadan, FVA 22 anevrizmanın (% 96) insidansı doğruladı. FVA ile ilişkili hiçbir olumsuz olay yoktu. Fluorcein kolayca uygulanabilir ve özel bir ekipman gerekmez. Tavşan ve fareler ile deneysel bir ortamda ebeveyn arter bütünlüğü ve anevrizma patens/kalıntı perfüzyon değerlendirmek için güvenli ve son derece etkili bir yöntemdir. Bir kontrast maddesi olarak floresan kullanılarak FVA, anevrizmaların ve altta yatan geminin patilliğini kontrol etmek için etkili görünüyor ve hatta atıcılık ameliyatına adapte edilebilir.

Giriş

Anevrizma cerrahisinde tam anevrizma obliterasyon ve ebeveyn arter bütünlüğünü kanıtlar son derece önemlidir. Doppler sonografi, konvansiyonel serebral anjiyografi (DSA), bilgisayarlı tomografi anjiyografi (CTA) veya manyetik rezonans anjiyografi (MRA)^{1 gibi üst arter patensinin ve anevrizma oklüzyonu onaylamak için çeşitli seçenekler vardır. 2}. ancak, bu genellikle bir laboratuar ayarı mevcut değildir pahalı ve zaman alıcı yöntemlerdir. Ayrıca, onlar radyasyon pozlama veya hareket artefact önlemek için deneysel hayvanların ek sedasyon için ihtiyaç gibi ilgili yan etkileri olabilir.

Artan sayıda yeni endovasküler cihaz ortaya çıktığı için, bu tür cihazların preklinik testleri için ardışık bir ihtiyaç vardır. Ancak, bu çalışmalar genellikle otopsi sonrası analizine (örn. makro patoloji ve histoloji) ve dinamik perfüzyon hakkında bilgi eksikliğine güveniyor. Ayrıca, araştırmacı için deneysel bir cerrahi prosedür sırasında acil ve güvenilir bilgiler elde etmek için çok önemli olabilir. Floresan anjiyografi uygun maliyetli ve kolay görselleştirme tekniği^1,3,4.

Bu nedenle, İndosiyanin Yeşil (ICG) video anjiyografi genellikle klinik Nöroşirürji prosedürlerinde kullanılır ve yaygın olarak^5,6incelenmiştir. Floresan video anjiyografi (FVA) alternatif bir tekniktir, insan vizyonu dalga boyu aralığında bir floresan sinyal oluşturma ek avantajı ile, ve böylece uzun spektrum kızılötesi kamera olmadan çıplak gözle görülebilir ⁷. florürin video anjiyografi daha az sıklıkta klinik serebrovasküler cerrahide kullanılır ve deneysel ayarlarda FVA raporlarında düşük^1,4.

Bu raporun amacı, sıçan ve tavşan preklinik serebrovasküler araştırmalarda FVA uygulamalarının fizibilitesini ve kapsamını göstermektir.

Protokol

Kemirgenler bir hayvan bakım tesisinde yer aldı ve deneyler inceledi ve Bern, Isviçre Üniversitesi 'nde hayvan refahı Komitesi tarafından onaylanmış (BE 108/16) ve (BE65/16). Tüm hayvanlar, gıda ve suya ücretsiz erişim ile standart bir laboratuar diyetinde tutulur. Tüm hayvan deneyleri 3Rs (yedek, azaltma ve arıtma) dikkatli dikkate alınarak yapılmıştır. On kadın Yeni Zelanda beyaz tavşan ve 48 erkek Wistar fareler dahil edildi. ULAŞMAK kuralları kesinlikle⁸izledi.

Not: yirmi yan duvar anevrizması, bir donör tavşanın karotis arter üzerinde deselülarize arteriyel damar torbası sütür tarafından 10 tavşan oluşturuldu. Buna ek olarak, 48 mikrocerrahi yan duvar anevrizmaları^4,9önce açıklandığı gibi 48 sıçan oluşturuldu. Anevrizma yaratılmasından 4 hafta sonra görüntüleme prosedürü ve makroskopik analiz yapıldı.

1. floresan video anjiyografi için gerekli malzemenin hazırlanması

1. Mavi bant geçiren filtresinin üzerine bantlayarak el feneri değiştirin ( malzeme tablosunabakın), bir uyarma filtresi olarak işlev göreceksiniz. Meşale daha sonra sadece mavi ışık yaymalıdır. Filtrelenmemiş ışık sızıntısını önlemek için siyah bandı kullanın.
2. Kamera (örneğin, mikroskop bağlı) yeşil bant geçiren filtresi ile donatın ( malzeme tablosunabakın), bir emisyon ışık filtresi olarak işlev göreceksiniz. Sadece yeşil ışık şimdi geçmesi mümkün olmalıdır.

2. İşyeri ve malzemelerin hazırlanması

1. Dezenfektan çözeltisi ile çalışma alanını dezenfekte edin.
2. Kontaminasyonu önlemek için masayı steril drapeler ile koruyun.
3. Cerrahi için steril aletler kullanın.

3. ameliyat için hayvanların hazırlanması

1. Hayvanları tartın.
2. Anestezisi teşvik etmek ve dozu ağırlığa göre ayarlayın.
   1. Tavşaniçin, dengeli anestezi başlayın. Onların korku reaksiyonu azaltmak için enjeksiyon sırasında bir elle gözlerini Shield. Hayvanları sakinleştirici yardımcı olmak için bir levha ile kafes kapak.
   2. Enjeksiyon öncesinde% 4 isofluran ve% 96 oksijen içeren bir gaz odasındaki fareler anestezi.
3. Anestezinin derinliğini izleyin. Hayvanların uyurken emin olmak için ayak parmakları arasında çimdik.
   1. Tavşanları sırtlarına yeniden konumlandırın. Tepki vermemelidir.
   2. Fareleriçin, kuyruklarını çimdik ve hiçbir reaksiyon gözlendiğinden emin olun.
4. Kuruluğu önlemek için kemirgenler gözleri üzerinde merhem uygulayın. Yutulması olasılığını önlemek için rats ' dilleri dışarı çekin.
5. Anestezinin korunması ile başlayın.
   1. Tavşan, kateterize (enjeksiyon portu Ile 22 G korumalı IV kateter, malzeme tablosunabakın) kulak ven için. Dengeli anestezinin bakımını yapın. Birden fazla eşzamanlı enjeksiyonları etkinleştirmek için üç yönlü stopkoku kullanın.
   2. Fareleriçin, enjekte 50 mg/kg ketamin hidroklorür ve 0,5 mg/kg agonistler hidroklorür intraperitoneally. Cerrahi sırasında zehirli bir ayak tutam ile anestezinin izlenmesi. Reaksiyon durumunda, ek anestezik yönetin.
6. Hayvanları bir supin pozisyonunda tahta üzerine bantla ve kesi yerini yakından tıraş edin. Betaseptic ile bölgeyi dezenfekte edin.
   1. Tavşaniçin, özellikle steradidomastoid kas etrafında, boyun dezenfekte.
   2. Fareleriçin, mesane transvers kolon için alan dezenfekte.
7. Cerrahi boyunca bir maske ile oksijen yönetmek ve bir Isıtma Pad ile vücut sıcaklığını korumak.

4. arter hazırlanması

1. En iyi sonuçlar için, seçilen gemisi çevreleyen dokudan iyice incelemek^9,10.
   1. Fareleriçin, tail ven (daha az invaziv, tercihen hayatta kalan hayvanlar için kullanılan) tanımlamak veya floresan enjeksiyon için bir femoral ven incelemek^4,11.
      Not: tavşanlariçin, kulak ven anestezi için zaten kullanıldığı için, floresan enjeksiyon için damarların başka bir diseksiyonu gereklidir.
2. Çevreleyen doku ile kontrastı artırmak için seçilen gemi altında beyaz bir Pad konumlandırın.
3. Kamera, disseke arter üzerinde mikroskop monte odaklama.

5. floresan video anjiyografi

1. Floresan sodyum (100 mg/mL, malzeme tablosunabakın) ile dolu 5 ml şırınga kapak ışık pozlama korumak için alüminyum folyo ile. Işıkları kapatın (mümkün olduğunca) ve foscein sodyum intravenöz enjekte. Fotoobleaching önlemek için karanlığa enjekte.
   1. Tavşaniçin, üç-yönlü-stopcock kateterize kulak ven içine ml/kg floresan sodyum 0,3 enjekte.
   2. Fareleriçin, bir kateter veya 25 G iğne ile femoral ven Içine 0,4 ml/kg florcein sodyum enjekte.
2. Tüm boya enjekte edilmesini sağlamak için iğne veya kateter 0,5 mL tuz çözeltisi ile yıkayın.
3. Modifiye edilmiş el feneri ile cerrahi alanı aydınlatın.
4. Modifiye kamera ile filme başlayın. Enjeksiyonu yaptıktan birkaç saniye sonra kan akışı görülebilir (Şekil 1).
   Not: burada, biz kare hızı kullanılan = 50 kare/s, odak uzaklığı = 70 mm, ve F 3.4.

6. makroskopik analiz

1. Anevrizma ve ebeveyn arter kompleksi RESECT ve makroskopik mikro-makas ile ana arter açarak ve üst arter ve anerysm 's orifis lümeni değerlendirmek tarafından makro kapsamları değerlendirmek (bkz. Şekil 1, 2)⁹. Anevrizmaların boyutlarını ölçün. Anevrizma-ebeveyn-arter-kompleksi daha sonra analiz için saklanabilir (örneğin, Histoloji).

Sonuçlar

Cerrahi sırasında kalp atışı ve kan basıncı izleniyor. Ortalama kalp hızı tavşanlara 193/dk, fareler içinde 196/dak idi. Tavşanların vücut ağırlığı 3,05-4.18 kg olarak değişmektedir ve fareler 335-690 g tarttı.

Biz on tavşandan sekiz dışarı FVA gerçekleştirmek başardık (Şekil 1). İki tavşandan dört anevrizma sınavı teknik zorluklar nedeniyle kamera ile kaydedilmedi. Sıçanlarda FVA ile ilgili teknik zorluklar bildirilmiştir. A...

Tartışmalar

FVA kemirgenler gemiler incelemek için umut verici ve karmaşık olmayan bir yöntemdir ve ticari cihazlar ve off-the-raf ekipmanları ile gerçekleştirilebilir. FVA, damarların doğru diseksiyona ihtiyacı olduğu için damar bütünlüğünü intraoperatif değerlendirmede gerekli olan herhangi bir cerrahi sırasında uygulanabilir.

Yazarlar, enfeksiyon, iskemi ve bölme sendromu gibi yanlışlıkla yaşanan olayların düşük riski nedeniyle arter enjeksiyonu için venöz enjeksiyon ter...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
For rabbits
Aluminium foil
Animal shaver
Black tape
Blue filter	Thorlabs MF475-35
Body warm plate
Camera	Sony NEX-5R
Catheter	22G Vasofix Safety
Disinfictant
Fluorescein sodium	Fluorescein Faure 10%
Glas plate
Green filter	Thorlabs MF539-43
Incontinence pad
Infusion pump	Perfusor Secura
Ketamine hydrochloride			any generic products
Needle	25G
Oxygen
Ringer's Solution
Sterile sheets
Surgical instruments			micro forceps, micro scissor, blunt surgical scissor
Surgical microscope	OPMI, Carl Zeiss AG, Oberkochen, Germany
Syringe 2ml, 5ml, 50ml
Tape
Three-way-stopcock
Torch light
Xylazin			any generic products
For rats
Aluminium foil
Animal shaver
Black tape
Blue filter	Thorlabs MF475-35
Body warm plate
Camera	Sony NEX-5R
Disinfictant
Fluorescein sodium	Fluorescein Faure 10%
Green filter	Thorlabs MF539-43
Incontinence pad
Isoflurane
Ketamine hydrochloride			any generic products
Medetomidine hydrochloride			any generic products
Needle	25G
Oxygen
Plate
Ringer's Solution
Sterile sheets
Surgical instruments			micro forceps, micro scissor, blunt surgical scissor
Surgical microscope	OPMI, Carl Zeiss AG, Oberkochen, Germany
Syringe 2ml, 5ml
Tape
Torch light