Sıçanlarda Hücreden Sönmemiş Böbrek İskelelerinin Hazırlanması

Özet

Bu protokol, hücreden sönmemiş sıçan böbrekleri kullanarak bir iskele geliştirmek için bir yöntem sunar. Protokol, biyoyararlanıcılığı doğrulamak için hücreden arındırma ve yeniden hücreleştirme süreçlerini içerir. Desellülerizasyon Triton X-100 ve sodyum dodecyl sülfat kullanılarak gerçekleştirilir.

Özet

Doku mühendisliği biyotıpta son teknoloji bir disiplindir. Hastalıklı veya hasarlı organların yerine fonksiyonel doku ve organların yenilenmesi için hücre kültürü teknikleri uygulanabilir. Vivo olarak farklılaştırılmış kök hücreler kullanılarak üç boyutlu organ veya dokuların üretilmesini kolaylaştırmak için iskelelere ihtiyaç vardır. Bu raporda, hücreden sönmemiş sıçan böbrekleri kullanarak damarlı iskeleler geliştirmek için yeni bir yöntem anlatıyoruz. Bu çalışmada sekiz haftalık Sprague-Dawley sıçanları kullanıldı ve heparin böbrek damarlarına akışı kolaylaştırmak için kalbe enjekte edildi ve heparinin böbrek damarlarına nüfuz etmesini sağladı. Karın boşluğu açıldı ve sol böbrek toplandı. Toplanan böbrekler, dokuyu hücreden çıkarmak için Triton X-100 ve sodyum dodecyl sülfat gibi deterjanlar kullanılarak 9 saat boyunca perfüzyona uğradı. Hücreden çıkarıcı böbrek iskeleleri daha sonra hücresel kalıntıları ve kimyasal kalıntıları gidermek için% 1 penisilin / streptomisinin ve heparin ile nazikçe yıkandı. Kök hücrelerin hücre dışılaştırılmış damar iskeleleri ile naklinin yeni organların üretilmesini kolaylaştırması beklanmaktadır. Böylece, damarlı iskeleler gelecekte organ greftlerinin doku mühendisliği için bir temel sağlayabilir.

Giriş

Hücre kültürü teknikleri, hastalıklı veya hasarlı organların yerini alacak fonksiyonel doku ve organların yenilenmesi için uygulanır. Allojenik organ nakli şu anda geri dönüşü olmayan organ hasarının en yaygın tedavisidir; ancak bu yaklaşım, nakledilen organın reddedilmesini önlemek için immünosupresyon kullanılmasını gerektirir. Ayrıca, transplant immünolojislerindeki gelişmelere rağmen, nakil alıcılarının% 20'si 5 yıl içinde akut ret yaşayabilir ve transplantasyondan sonraki 10 yıl içinde, alıcıların% 40'ı nakledilen greftini kaybedebilir veya¹ölebilir.

Doku mühendisliği teknolojilerindeki gelişmeler, farklılaştırı....

Protokol

Bu çalışma Pusan Ulusal Tıp Üniversitesi yönetimi tarafından onaylanmış ve hayvanların kullanımı ve bakımı için etik kurallara uygun olarak yapılmıştır. (sertifika no. 2017-119). Herhangi bir hayvan çalışması öncesinde kurumsal onay alınmalıdır.
NOT: Karın organlarının başarılı cerrahi sunumu ve görüntülenmesi için önerilen tüm cerrahi ve anestezik aletler/ekipmanlar ve reaktifler Tablo 1'deayrıntılı olarak açıklanmıştır.

1. Sıçan böbreklerinin toplanması için hazırlık prosedürleri

1. Ameliyata hazırlanırken, 8 haftalık Sprague-Dawley sıçanlarını (200-250 g ağırlığında) bir ısınma yastığına yerleştirin. Çekirdek s....

Sonuçlar

Sıçan böbreklerinin brüt morfolojisi koyu kırmızıydı (Şekil 1A). Hücreden arındırma sonrası böbrek soluk ve yarı saydam hale geldi(Şekil 1D). Kalıntı genomik DNA, üreticinin talimatlarına göre, hücreden sönmemiş böbrek iskelelerinde ve yerli böbreklerdeki (kontrol) ile karşılaştırıldığında ticari bir kit ile değerlendirildi. Kantitatif analiz, doku genomik DNA'sının hücreden arındırıldıktan sonra neredeyse ortadan kaldı.......

Tartışmalar

Organların ve diğer dokuların hücreden arındırılması için çeşitli protokoller kullanılmıştır. En uygun hücre dışılaştırma protokolü, hücre dışı matrisin (ECM) üç boyutlu mimarisini korumalıdır. Genel olarak, bu tür protokoller hücre zarının fiziksel işleme veya iyonik çözeltilerle lizin edilmesi, sitoplazma ve çekirdeğin enzimatik işleme veya deterjanlarla ECM'den ayrıştırması ve daha sonra hücresel kalıntıların dokudan çıkarılmasından oluşur³. .......

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
1 cc syringe (inject probes and vehicle solutions	Becton Dickinson	305217
10-0 ethilon for vessel anastomosis	Ethicon	9032G
25 gauge inch guide needle(for vascular catheters)	Becton Dickinson	305145
3-0 PDS incision closure rat	Ethicon	Z316H
3-0 Prolene incision closure rat	Ethicon	8832H
3-0 silk spool vascular access/ligation in rat	Braintree Scientific	SUT-S 110
4-0 PDS incision closure mouse	Ethicon	Z773D
4-0 Prolene incision closure mouse	Ethicon	8831H
5-0 silk spool vascular access/ligation in mouse	Braintree Scientific	SUT-S 106
Fine Scissors to cut fascia/connective tissue	Fine Science Tools	14058-09
Halsey needle holder	Fine Science Tools	12001-13
Kelly Hemostat for rats: muscle clamp to minimize bleeding when cut	Fine Science Tools	13018-14
Polyethelyne 50 tubing, catheter tubing 100 ft	Braintree Scientific	.023" × .038”
Schwartz microserrefine vascular clamps	Fine Science Tools	18052-01 (straight)
		18052-03 (curved)
Surgical Scissors to cut skin	Fine Science Tools	14002-12
Vannas-Tubingen Spring scissors for arteriotomy	Fine Science Tools	15003-08