JoVE Logo
Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Pankreasın in vivo yüksek çözünürlüklü görüntülenmesi pankreas intravital görüntüleme penceresi ile kolaylaştırıldı.

Özet

Pankreasın canlı bir küçük hayvan modelinde doğrudan in vivo hücresel çözünürlüklü görüntülenmesi teknik olarak zorlayıcı olmuştur. Yeni bir intravital görüntüleme çalışması, bir abdominal görüntüleme penceresi ile, karın organlarındaki hücresel dinamiklerin in vivoolarak görselleştirilmesini sağladı. Bununla birlikte, fare pankreasının fizyolojik hareketten (örneğin peristalsis ve solunum) kolayca etkilenebilen yumuşak tabaka benzeri mimarisi nedeniyle, fare pankreasındaki adacıkları veya kanser hücrelerini tanımlamak, izlemek ve ölçmek için hücresel düzeyde birkaç hafta boyunca stabilize uzunlamasına in vivo görüntüleme yapmak zordu. Burada, pankreasın mikro yapısının boyuna zaman atlamalı intravital görüntülemesi için pankreası bağırsaktan mekansal olarak ayırabilen yeni bir destek tabanı, entegre bir pankreas intravital görüntüleme penceresi yerleştirme yöntemini açıklıyoruz. Görüntüleme penceresi ile uzunlamasına in vivo görüntüleme, kararlı görselleştirme sağlar, 3 haftalık bir süre boyunca adacıkların izlenmesine ve burada bir ortopedik pankreas kanseri modelinde kanıt olduğu gibi mikroyapının yüksek çözünürlüklü üç boyutlu görüntülenmesine izin verir. Yöntemimizle, daha fazla intravital görüntüleme çalışması, pankreası içeren çeşitli hastalıkların patofizyolojisini hücresel düzeyde aydınlatabilir.

Giriş

Pankreas, sindirim sisteminde ekzokrin bir işleve ve kan dolaşımına hormon salgılamanın endokrin işlevine sahip bir karın organıdır. Pankreasın yüksek çözünürlüklü hücresel görüntülemesi, pankreatit, pankreas kanseri ve diabetes mellitus1dahil olmak üzere pankreası içeren çeşitli hastalıkların patofizyolojisini ortaya çıkarabilir. Bilgisayarlı tomografi, manyetik çözünürlüklü görüntüleme ve ultrasonografi gibi geleneksel tanısal görüntüleme araçları klinik alanda yaygın olarak mevcuttur1,2. Bununla birlikte, bu görüntüleme yöntemleri sadece yapısal veya anatomik değişiklikleri görselleştirmekle sınırlıdır, hücresel veya moleküler düzeydeki değişiklikler belirlenemez. İnsanlarda diabetes mellitus veya pankreas kanserindeki moleküler değişikliklerin tanıdan 10 yıldan daha önce başlatabileceği göz önüne alındığında3,4, pankreas hastalıklarının gizli dönemde moleküler geçişlerinden tespit edilmesi erken tanı ve zamanında müdahale sağlama potansiyeline sahiptir. Bu nedenle, çözünürlük sınırlamalarını aşacak ve işlev hakkında değerli içgörüler sağlayacak görüntüleme, pankreas kanserinin erken teşhisini veya diabetes mellitus5'inilerlemesi sırasında adacıkların değiştirilmesinin ileri düzeyde tanımlanmasını sağlayarak dikkat çekici bir şekilde dikkat kazanacaktır.

Özellikle adacıklarda nükleer görüntüleme, biyolüminesans görüntüleme ve optik koherens tomografi invaziv olmayan adacık görüntüleme teknikleri olarak öne sürlenmiştir6. Bununla birlikte, bu yöntemlerin çözünürlüğü, birkaç on ila yüzlerce mikrometre arasında değişen tipik değerlerle önemli ölçüde düşüktür ve adacıklardaki hücresel düzeydeki değişiklikleri tespit etmek için sınırlı bir yetenek sunar. Öte yandan, daha önce ex vivo7,8 (örneğin, pankreasın dilimlenmesi veya sindirimi), fizyolojik olmayan9 (örneğin, pankreasın dışsallaştırılması) ve heterotopik durumlar10,11,12 (örneğin, böbrek kapsülü altında, karaciğerin içinde ve gözün ön odasında implantasyon), bu da yorumlarını ve klinik etkilerini kısıtlar. Yüksek çözünürlüklü görüntülemenin in vivo,fizyolojik ve ortotopik modeli kurulabilirse, pankreas adacıklarının araştırılması için kritik bir platform olacaktır.

Canlı bir hayvanda patofizyolojiyi mikroskobik çözünürlük seviyesinde ortaya çıkaran intravital görüntüleme, son zamanlarda büyük ilgi gördü13. In vivo görüntüleme yöntemlerinden, bir farenin karnına bir pencere yerleştiren bir abdominal görüntülemepenceresinin geliştirilmesi 14, yeni bulguların keşfine izin sağlamıştır (yani, erken karaciğer metastazının mikrometaz öncesi aşaması15 ve bağırsak epitelinde kök hücre bakım mekanizması16). Abdominal görüntüleme penceresi değerli sonuçlar sağlasa da bu pencerenin pankreas için uygulamaları ve pankreas içeren hastalıklara dayalı sonuçlanan intravital görüntüleme araştırmaları kapsamlı bir şekilde araştırılmamıştır.

İnsan pankreasının iyi tanımlanmış katı organ özelliklerinin aksine, bir farenin pankreası yaygın olarak dağılmış yumuşak doku benzeri bir yapıdır17. Bu nedenle peristalsis ve solunum gibi fizyolojik hareketlerden sürekli etkilenir. Pankreas için abdominal görüntüleme penceresinin uygulanması üzerine daha önce yapılan bir çalışma, dolaşmanın bağırsak hareketlerinin neden olduğu hareket eserleri nedeniyle meydana geldiğinigöstermiştir 18. Elde edilen ortalama görüntüde, mikro ölçekli yapıların görselleştirilmesine ve tanımlanmasına engel olan ciddi bulanıklık gözlendi.

Burada, pankreası içeren hastalıklarda boyuna hücresel düzeydeki olayları araştırmak için intravital mikroskopi19,20 ile birlikte yeni bir destekleyici baz entegre pankreas intravital görüntüleme penceresinin kullanımını anlatıyoruz. Önceki çalışmada metodolojinin ayrıntılı bir açıklamasına ek olarak18Pankreası içeren çeşitli hastalıklar için pankreas görüntüleme penceresinin genişletilmiş uygulaması bu makalede ele alınacaktır. Bu protokolde intravital mikroskopi sistemi olarak özel yapım video-oranlı lazer taramalı konfokal mikroskopi sistemi kullanılmıştır. Dört lazer modülü (405, 488, 561 ve 640 nm'deki dalga boyları) bir heyecan kaynağı olarak kullanılmıştır ve fotomultiplier tüpler (PMT) tarafından bant geçiş filtreleri (BPF1: FF01-442/46) aracılığıyla dört kanal emisyon sinyali tespit edilmiştir; BPF2: FF02-525/50; BPF3: FF01-600/37; BPF4: FF01-685/40). Lazer tarama, dönen çokgen ayna (X ekseni) ve video hızı taramasını (saniyede 30 kare) sağlayan bir galvanometre tarama aynası (Y ekseni) oluşuyordu. İntravital mikroskopi hakkında detaylı bilgi önceki çalışmalardaaçıklanmıştır 10,18,19,20,21,22,23.

Önceki adacık çalışmamızda18, adacıkların GFP ile etiketlendiğini transgenik bir fare modeli (MIP-GFP)24 kullanarak canlı farelerdeki adacıkları başarıyla ve kararlılıkla görüntüledik. Yöntem, adacıklardaki değişikliklerin 1 haftalık bir süre içinde yüksek çözünürlüklü görselleştirilmesini sağladı. Ayrıca aynı adacıkların 3 haftaya kadar görüntülenmesini kolaylaştırdı, bu da diyabet mellitus patogenez sırasında fonksiyonel izleme veya izleme için pankreas adacıklarının uzun süreli çalışmalarının fizibilitesini düşündürmektedir18. Ayrıca, floresan pankreas kanseri hücrelerinin (PANC-1 NucLight Red)25'in doğrudan farenin pankreasına yerleştirildiği bir ortotopik pankreas kanseri modeli geliştirdik. Pankreas intravital görüntüleme penceresinin uygulanması ile bu model, pankreas kanserinin tümör mikroçevreslerindeki hücresel ve moleküler patofizyolojinin araştırılması ve yeni ilaç adaylarının terapötik takibi için bir platform olarak kullanılabilir.

Protokol

Bu makalede açıklanan tüm prosedürler, Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve KullanımıKılavuzu'nun 8.baskısına (2011)26 uyarınca yapılmış ve Kore İleri Bilim ve Teknoloji Enstitüsü (KAIST) ve Seul Ulusal Üniversitesi Bundang Hastanesi'ndeki (SNUBH) Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylanmıştır.

1. Pencerenin ve diğer malzemelerin hazırlanması

  1. Pankreası karın boşluğundaki bağırsaktan inzivaya çekmek için pankreas intravital görüntüleme penceresini özel olarak tasarlayın18 (Şekil 1A,B). Pencerenin ayrıntılı bir planı, önceki bir çalışmanın ek bir figüründe açıklanmıştır18.
  2. Intravital pankreas görüntüleme için 8-12 haftalık erkekler olan C57BL/6N fareleri kullanın. Damar etiketlemesi amacıyla görüntülemeden 2 saat önce alexa 647 floroforu ile konjuge edilen anti-CD31 antikoru enjekte edin.
  3. Adacıklar çalışması için, adacıkların floresan bir muhabir proteini ile etiketlendiğini transgenik bir fare modeli hazırlayın. Burada, yeşil floresan proteinin fare insülin 1 gen promotörünün kontrolü altında ifade edildiği MIP-GFP'yi kullandık, faredeki tüm adacıkların beta hücrelerinde aktifolan 24.
  4. Pankreas kanseri çalışması için floresan muhabir proteini ve BALB/C çıplak fareleri ile etiketlenmiş transgenik kanser hücreleri hazırlayın. Bu çalışmada PANC-1 NucLight Red hücreleri kullanılmıştır. PANC-1 kanser hücreleri25, NucLight Red floresan probu ile etiketlendi.
  5. Tüm cerrahi aletleri sterilize edin, camı örtün (PEG ile veya değil) ve bir otoklav kullanarak pencereleri görüntüleme.
  6. Enflamatuar yanıtı önlemek ve uzun süreli görüntüleme için uygun olan biyouyumluluğu artırmak için kapak camına PEG kaplama uygulayın.

2. Cerrahi

  1. Steril bir cerrahi platform hazırlayın ve yüzeyleri% 70 etanol ile sterilize edin.
    NOT: Boyuna görüntüleme seansları için aseptik teknik gereklidir.
  2. Fareleri tiletamin / zolazepam (30 mg / kg) ve ksilazin (10 mg / kg) karışımı ile uyuşturun.
    NOT: Hipergliseminin olumsuz etkisi nedeniyle ketamin yerine tiletamin/zolazepam kullanılması önerilir. Deney amacıyla optimal anestezi seçilmelidir9,27.
  3. Homeotermik kontrollü ısıtma yastığı ile rektal prob kullanarak vücut sıcaklığını izleyin.
  4. Farenin sol kanadını tıraş edin ve üç tur alternatif alkol ve iyot bazlı ovma uygulayın.
    NOT: Depilatör krem kullanılıyorsa, kimyasal yanığı önlemek için 1 dakikadan fazla bırakmayın.
  5. Farenin sol kanadında 1,5 cm'lik bir kesi yapın ve cildi ve kası parçalara ayrılın.
  6. Kesi kenar boşluğunda siyah veya naylon 4-0 dikişli bir çanta-string dikiş gerçekleştirin.
  7. Kesi üzerinde bir mikro retraktör kullanın ve dalağını hafifçe açığa çıkarın.
  8. Dalağını halka kanatları ile dikkatlice bir araya getirin ve pankreası tanımlayın.
  9. Pencereyi farenin kanadına yerleştirin ve dalak ve pankreası pencerenin açık alanından geçirin. Pankreasın manipülasyonu, kanamaya veya pankreatite neden olabileceği için çok yumuşak olmalıdır.
  10. Pankreası görüntüleme penceresinin plakasına hafifçe yerleştirin; dalak pencerenin açık alanına yerleştirilecektir.
  11. Kanser hücresi çalışması için PANC-1 NucLight Red 'i (1.0 x 106 hücre) doğrudan pankreasa enjekte edin.
    NOT: Ortotopik insan pankreas kanseri ksinograftlarının görüntülenmesi için PANC-1 veya diğer insan pankreas kanseri hücresi gibi kanser hücresinin doğrudan implantasyonu kolaylaştırılabilir28. İntravital floresan mikroskopi ile görselleştirmek için PANC-1 hücreleri, çekirdeği etiketleyen NucLight Red lentiviral reaktif kullanılarak kırmızı floresan protein ile transdüklenmiştir29. Maksimal enjeksiyon hacmi belirsiz olsa da, pankreastaki basınç etkisini önlemek için hacmi mümkün olduğunca azaltın.
  12. Görüntüleme penceresinin kenar boşluğuna N-butil siyanoakrilat tutkal damlaları uygulayın.
    1. Uygulanan tutkal miktarını en aza indirmek için uygulama için 31 G kateter iğnesi kullanın. Damla miktarı büyükse, doku istemeden pencereye veya kapak camına yapışır.
  13. Görüntüleme penceresinin kenar boşluğuna hafifçe 12 mm yuvarlak bir kapak camı uygulayın.
  14. Dikiş halkasını pencerenin yanal oluğuna sığacak şekilde çekin ve üç kez bağlayın.
  15. Bu fareler uyanıkken sıkı dikişlerin kesilmesini önlemek için düğümün maksimum proksimal bölgesini kesin.
  16. Farelerin anesteziden (2-3 saat) iyileşmesine izin verin ve ağrı kesici için ketoprofen (5 mg / kg, hayvanın boyun veya kalça tabanındaki gevşek ciltte deri altı) enjekte edin. Her 12 saatte bir ağrı belirtileri için yeniden değerlendirme ve ketoprofen 1-3 gün boyunca her 24 saatte bir düşünülmelidir.
    NOT: Analjezi glikoz9'ayanıt olarak insülin salgısını etkiler. Analjezi seçimi ve zamanlaması deneysel amaç için bireyselleştirilmelidir.
  17. Pencerenin kafese temasını önlemek için fareyi kafeste yeterli yatak takımı ile birikin. Pencere ameliyatı olmadan evi farelerle barındırmaktan kaçının.

3. İntravital görüntüleme

  1. Lazer gücü de dahil olmak üzere intravital mikroskobu açın.
  2. Isıtma yastığını açın ve homeotermik regülasyonu 37 °C olarak ayarlayın.
    NOT: Alternatif olarak, homeotermik bir düzenleme yoksa sık kontrole sahip pasif bir ısıtma yastığı veya lamba kullanın.
  3. Tiletamin/zolazepam (30 mg/kg) ve ksilazin (10 mg/kg) karışımı ile göz içi anestezi gerçekleştirin.
    NOT: Hipergliseminin olumsuz etkisi nedeniyle ketamin yerine tiletamin/zolazepam kullanılması önerilir. Deneylerin amacı için optimal anestezi seçilmelidir9,27.
  4. Enjeksiyon için bir vasküler kateter yerleştirin.
    1. Turnike uygulamasına alternatif olarak kuyruğun proksimal tarafına indeks ve üçüncü parmakla basınç uygulayın. Gerekirse kuyruğu bir lamba ile ısıtın.
    2. Kuyruk damarını% 70 etanol spreyi ile sterilize edin.
    3. Yanal kuyruk damarına 30 G kateter yerleştirin. Pe10 tüpünde kanın kusmuması görselleştirilecektir.
    4. Stabilize etmek için katetere ipek bir bant uygulayın.
    5. Floresan probların kombinasyonuna göre FITC / TMR dektran veya diğer floresan probları (Alexa 647 ile eşleştirilmiş 25 μg anti-CD31) enjekte edin18.
      NOT: Floresan konjuge antikor probları için görüntüleme seansından önce 2 saat enjekte edin.
  5. Fareyi cerrahi platformdan görüntüleme aşamasına aktarın.
  6. Homeotermik ısıtma yastığı sistemi ile vücut sıcaklığını otomatik olarak kontrol etmek için bir rektal prob takın.
  7. Pankreas görüntüleme penceresini intravital mikroskopi kurulumu sırasında hazırlanan pencere tutucusuna yerleştirin (Şekil 2). Ters mikroskop için pencere tutucusu gerekmeyebilir.
  8. İntravital görüntüleme gerçekleştirin.
    1. Pankreası görüntülemek için, pankreasın pankreas görüntüleme penceresindeki tüm görünümünü taramak için düşük büyütme objektif lensi (örneğin, 4x) ile başlayın (önerilen görüş alanı: 2500 x 2500 μm).
    2. İlgi çekici bölgenin belirlenmesinden sonra, hücresel düzeyde görüntülemeyi gerçekleştirmek için daha yüksek büyütme objektif lensine (20x veya 40x) geçin (önerilen görüş alanı: 500 x 500 μm veya 250 x 250 μm). Bu deneyde yanal ve eksenel çözünürlük sırasıyla yaklaşık 0,5 μm ve 3 μm idi.
    3. 3D yapıyı veya hücre geçişi gibi hücre düzeyindeki dinamikleri gözlemlemek için z yığını veya hızlandırılmış görüntüleme gerçekleştirin.
      NOT: Transgenik hayvanların (MIP-GFP) floresan protein ifade hücrelerini görüntülemek için, 0,43 mW'a kadar güçle 30 s aralıklı 488 nm lazer maruziyeti gözle görülür fotobleaching veya doku hasarı olmadan tolere edilebilirdi. Alexa 647 ile etiketlenmiş floresan proteinleri görüntülemek için, 0,17 mW'a kadar 640 nm lazer gücü gözle görülür fotobleaching veya doku hasarı olmadan tolere edilebilirdi. Bu ayarın üzerinde bir güçle uzun süreli heyecan lazer maruziyeti fototoksiklik ile fotobleaching veya doku hasarına yol açabilir. İlgi alanına uygun şekilde görüntü vermek için yeterli kazancı ve gücü ayarlayın. Enstitüde hazırlanan her intravital mikroskopi için intravital mikroskopideki parametrelerin ayrıntılı ayarı bireyselleştirilmelidir.

Sonuçlar

İntravital mikroskopi, destekleyici taban entegre pankreas intravital görüntüleme penceresi ile birlikte, pankreasın farede boyuna hücresel düzeyde görüntülenmesini sağlar. Pankreas intravital görüntüleme penceresi ile yapılan bu protokol, tek tek adacıkları 3 haftaya kadar izlemek için yüksek çözünürlüklü görüntülemenin edinimine olanak sağlayan uzun süreli doku stabilitesi sağlar. Sonuç olarak, genişletilmiş bir görüş alanı için mozaik görüntüleme, z-stack görüntülemenin ü?...

Tartışmalar

Burada açıklanan protokol, karın görüntüleme penceresinden modifiye edilmiş yeni bir destekleyici taban entegre pankreas intravital görüntüleme penceresi kullanılarak pankreasın intravital görüntülemesinden oluşur. Yukarıda açıklanan protokoller arasında ilk kritik adım fareye intravital pankreas görüntüleme penceresinin yerleştirilmesidir. Tutkalın pencerede uygulanması için, tutkalın pencerenin kenar boşluğu ile kapak camı arasına uygulanması önemlidir, ancak pankreas dokusuna uygulan...

Açıklamalar

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Teşekkürler

Bu çalışma, SNUBH Araştırma Fonu'ndan (14-2020-002) ve Kore hükümeti (MSIT) (NRF-2020R1F1A1058381, NRF-2020R1A2C3005694) tarafından finanse edilen Kore Ulusal Araştırma Vakfı (NRF) hibesi ile desteklenmiştir.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
Alexa Fluor 647 Succinimidyl Esters (NHS esters)InvitrogenA20006Fluorescent probe for conjugate with antibody
BALB/C NudeOrientBioBALB/C NudeBALB/C Nude
BD Intramedic polyethylene tubingBD Biosciences427401PE10 catheter for connection with needle
C57BL/6NOrientBioC57BL/6NC57BL/6N
Cover glasses circularMarienfeld0111520Cover glass for pancreatic imaging window
FITC Dextran 2MDaMerck (Former Sigma Aldrich)FD200SFor vessel identification
IMARIS 8.1BitplaneIMARISImage processing
Intravital MicroscopyIVIM techIVM-CIntravital Microscopy
IRIS ScissorJEUNGDO BIO & PLANT CO, LTDS-1107-10This product can be replaced with the product from other company
Loctite 401Henkel401N-butyl cyanoacrylate glue
Micro Needle holderJEUNGDO BIO & PLANT CO, LTDH-1126-10This product can be replaced with the product from other company
Micro rectractorJEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD17004-03This product can be replaced with the product from other company
MicroforcepsJEUNGDO BIO & PLANT CO, LTDF-1034This product can be replaced with the product from other company
MIP-GFPThe Jackson Laboratory006864B6.Cg-Tg(Ins1-EGFP)1Hara/J
Nylon 4-0AILEENB434Non-Absorbable Suture
Omnican N 100 30GB BRAUNFT9172220SFor Vascular Catheter, Use only Needle part
PANC-1 NucLightRedCustom-madeCustom-madeMade in laboratory
Pancreatic imaging windowGeumto EngineeringCustom orderPancreatic imaging window - custom order
PhysiosuiteKent ScientificPS-02Homeothermic temperature controller
Purified NA/LE Rat Anti-Mouse CD31BD Biosciences553708Antibody for in vivo vessel labeling
Ring ForcepsJEUNGDO BIO & PLANT CO, LTDF-1090-3This product can be replaced with the product from other company
RompunBayerRompunAnesthetic agent
TMR Dextran 65-85kDaMerck (Former Sigma Aldrich)T1162For vessel identification
Window holderGeumto EngineeringCustom orderWindow holder - custom order
ZoletilVirbacZoletil 100Anesthetic agent

Referanslar

  1. Dimastromatteo, J., Brentnall, T., Kelly, K. A. Imaging in pancreatic disease. Nature Reviews. Gastroenterology & Hepatology. 14 (2), 97-109 (2017).
  2. Cote, G. A., Smith, J., Sherman, S., Kelly, K. Technologies for imaging the normal and diseased pancreas. Gastroenterology. 144 (6), 1262-1271 (2013).
  3. Yachida, S., et al. Distant metastasis occurs late during the genetic evolution of pancreatic cancer. Nature. 467 (7319), 1114-1117 (2010).
  4. Hardt, P. D., Brendel, M. D., Kloer, H. U., Bretzel, R. G. Is pancreatic diabetes (type 3c diabetes) underdiagnosed and misdiagnosed. Diabetes Care. 31, 165-169 (2008).
  5. Baetens, D., et al. Alteration of islet cell populations in spontaneously diabetic mice. Diabetes. 27 (1), 1-7 (1978).
  6. Holmberg, D., Ahlgren, U. Imaging the pancreas: from ex vivo to non-invasive technology. Diabetologia. 51 (12), 2148-2154 (2008).
  7. Marciniak, A., et al. Using pancreas tissue slices for in situ studies of islet of Langerhans and acinar cell biology. Nature Protocols. 9 (12), 2809-2822 (2014).
  8. Ravier, M. A., Rutter, G. A. Isolation and culture of mouse pancreatic islets for ex vivo imaging studies with trappable or recombinant fluorescent probes. Methods in Molecular Biology. 633, 171-184 (2010).
  9. Frikke-Schmidt, H., Arvan, P., Seeley, R. J., Cras-Meneur, C. Improved in vivo imaging method for individual islets across the mouse pancreas reveals a heterogeneous insulin secretion response to glucose. Science Reports. 11 (1), 603 (2021).
  10. Lee, E. M., et al. Effect of resveratrol treatment on graft revascularization after islet transplantation in streptozotocin-induced diabetic mice. Islets. 10 (1), 25-39 (2018).
  11. Evgenov, N. V., Medarova, Z., Dai, G., Bonner-Weir, S., Moore, A. In vivo imaging of islet transplantation. Nature Medicine. 12 (1), 144-148 (2006).
  12. Mojibian, M., et al. Implanted islets in the anterior chamber of the eye are prone to autoimmune attack in a mouse model of diabetes. Diabetologia. 56 (10), 2213-2221 (2013).
  13. Pittet, M. J., Weissleder, R. Intravital imaging. Cell. 147 (5), 983-991 (2011).
  14. Ritsma, L., et al. Surgical implantation of an abdominal imaging window for intravital microscopy. Nature Protocols. 8 (3), 583-594 (2013).
  15. Ritsma, L., et al. Intravital microscopy through an abdominal imaging window reveals a pre-micrometastasis stage during liver metastasis. Science Translational Medicine. 4 (158), (2012).
  16. Ritsma, L., et al. Intestinal crypt homeostasis revealed at single-stem-cell level by in vivo live imaging. Nature. 507 (7492), 362-365 (2014).
  17. Dolensek, J., Rupnik, M. S., Stozer, A. Structural similarities and differences between the human and the mouse pancreas. Islets. 7 (1), 1024405 (2015).
  18. Park, I., Hong, S., Hwang, Y., Kim, P. A Novel pancreatic imaging window for stabilized longitudinal in vivo observation of pancreatic islets in murine model. Diabetes & Metabolism Journal. 44 (1), 193-198 (2020).
  19. Park, I., et al. Neutrophils disturb pulmonary microcirculation in sepsis-induced acute lung injury. The European Respiratory Journal. 53 (3), 1800786 (2019).
  20. Park, I., et al. Intravital imaging of a pulmonary endothelial surface layer in a murine sepsis model. Biomedical Optics Express. 9 (5), 2383-2393 (2018).
  21. Seo, H., Hwang, Y., Choe, K., Kim, P. In vivo quantitation of injected circulating tumor cells from great saphenous vein based on video-rate confocal microscopy. Biomedical Optics Express. 6 (6), 2158-2167 (2015).
  22. Moon, J., et al. Intravital longitudinal imaging of hepatic lipid droplet accumulation in a murine model for nonalcoholic fatty liver disease. Biomedical Optics Express. 11 (9), 5132-5146 (2020).
  23. Hwang, Y., et al. In vivo cellular-level real-time pharmacokinetic imaging of free-form and liposomal indocyanine green in liver. Biomedical Optics Express. 8 (10), 4706-4716 (2017).
  24. Hara, M., et al. Transgenic mice with green fluorescent protein-labeled pancreatic beta -cells. American Journal of Physiology, Endocrinology and Metabolism. 284 (1), 177-183 (2003).
  25. Lieber, M., Mazzetta, J., Nelson-Rees, W., Kaplan, M., Todaro, G. Establishment of a continuous tumor-cell line (panc-1) from a human carcinoma of the exocrine pancreas. International Journal of Cancer. 15 (5), 741-747 (1975).
  26. National Institutes of Health. Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. Committee for the Update of the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. The National Academies Collection: Reports funded by National Institutes of Health. , (2011).
  27. Windelov, J. A., Pedersen, J., Holst, J. J. Use of anesthesia dramatically alters the oral glucose tolerance and insulin secretion in C57Bl/6 mice. Physiological Reports. 4 (11), 12824 (2016).
  28. Kim, M. P., et al. Generation of orthotopic and heterotopic human pancreatic cancer xenografts in immunodeficient mice. Nature Protocols. 4 (11), 1670-1680 (2009).
  29. Cichocki, F., et al. GSK3 inhibition drives maturation of NK cells and enhances their antitumor activity. Cancer Research. 77 (20), 5664-5675 (2017).
  30. Zhu, S., et al. Monitoring C-peptide storage and secretion in islet beta-cells in vitro and in vivo. Diabetes. 65 (3), 699-709 (2016).
  31. Reissaus, C. A., et al. A versatile, portable intravital microscopy platform for studying beta-cell biology in vivo. Science Reports. 9 (1), 8449 (2019).
  32. Kong, K., Guo, M., Liu, Y., Zheng, J. Progress in animal models of pancreatic ductal adenocarcinoma. Journal of Cancer. 11 (6), 1555-1567 (2020).
  33. Bisht, S., Feldmann, G. Animal models for modeling pancreatic cancer and novel drug discovery. Expert Opinion in Drug Discovery. 14 (2), 127-142 (2019).
  34. Herreros-Villanueva, M., Hijona, E., Cosme, A., Bujanda, L. Mouse models of pancreatic cancer. World Journal of Gastroenterology. 18 (12), 1286-1294 (2012).
  35. Feig, C., et al. The pancreas cancer microenvironment. Clinical Cancer Research. 18 (16), 4266-4276 (2012).
  36. Garcia, P. L., Miller, A. L., Yoon, K. J. Patient-derived xenograft models of pancreatic cancer: overview and comparison with other types of models. Cancers (Basel). 12 (5), 1327 (2020).

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

T pSay 171

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır