Bir sıçan modelinde deneysel subaraknoid kanamayı indüklemek için kiazmatik öncesi, tek otolog kan enjeksiyonu

Özet

Subaraknoid kanama insanda yüksek mortalite ve morbidite yükü taşımaya devam etmektedir. Durum ve patofizyolojisi hakkında daha fazla araştırmayı kolaylaştırmak için, kiazmatik öncesi, tek enjeksiyon modeli sunulmaktadır.

Özet

Son yıllarda tedavideki ilerlemelere rağmen, subaraknoid kanama (SAK), oldukça genç bir nüfusu büyük ölçüde etkileyen yüksek bir morbidite ve mortalite yükü taşımaya devam etmektedir. SAK'ın arkasındaki patofizyolojik mekanizmaları araştırmak ve farmakolojik müdahaleleri test etmek için çeşitli SAH hayvan modelleri geliştirilmiştir. Bu makalede sunulan sıçandaki kiazmatik öncesi, tek enjeksiyon modeli, önceden belirlenmiş bir kan hacmine sahip deneysel bir SAH modelidir. Kısaca, hayvan uyuşturulur, entübe edilir ve mekanik ventilasyon altında tutulur. Sıcaklık bir ısıtma yastığı ile düzenlenir. Kuyruk arterine bir kateter yerleştirilerek sürekli kan basıncı ölçümünün yanı sıra kan örneklemesi de sağlanır. Atlantooksipital membran kesilir ve intraserebral basınç ölçümünü sağlamak için cisterna magna'ya basınç kaydı için bir kateter yerleştirilir. Bu kateter intratekal terapötik müdahaleler için de kullanılabilir. Sıçan stereotaksik bir çerçeveye yerleştirilir, bregmanın önünden bir çapak deliği açılır ve çapak deliğinden bir kateter yerleştirilir ve optik kiazmın hemen önüne yerleştirilir. Otolog kan (0.3 mL) kuyruk kateterinden çekilir ve manuel olarak enjekte edilir. Bu, intraserebral basıncın yükselmesine ve serebral kan akışının azalmasına neden olur. Hayvan 30 dakika boyunca yatıştırılır ve deri altı salin ve analjezikler verilir. Hayvan ekstübe edilir ve kafesine geri gönderilir. Ön kiazmatik model, önceden belirlenmiş kan hacmi nedeniyle yüksek bir tekrarlanabilirlik oranına ve hayvanlar arasında sınırlı bir varyasyona sahiptir. İnsanlarda SAH'ı taklit eder, bu da onu SAH araştırması için uygun bir model haline getirir.

Giriş

Travmatik olmayan subaraknoid kanama (SAK), tüm vakaların yaklaşık% 5'ini temsil eden bir inme şeklidir. Travmatik olmayan SAK'ın en yaygın nedeni, SAH'ların% 85'ini oluşturan bir anevrizmanın (aSAH) ani rüptürüdür. Diğer nedenler arasında arteriyo-venöz malformasyonun rüptürü, koagülopatiler ve perimezensefalik kanamada ven rüptürü^{sayılabilir 1}. İnsidans oranı 100.000 kişi-yılda 9'dur ve mortalite yaklaşık üçte biri ve diğer üçte biri SAH ^2,3'ü takiben günlük yaşamın desteğini gerektirir.

İlk stabilizasyon ve tanı onayını takiben, tedavi kanamanın ciddiyetine bağlıdır. En ciddi şekilde etkilenen hastalar, intraserebral basıncı (ICP) azaltmak için ventriküllere yerleştirilen ekstraventriküler bir drene sahip olacak ve yakından izlendikleri nöroyoğun bakım ünitesine kabul edilecektir. Hastalar (olası) anevrizmayı tanımlamak için bir anjiyografiye tabi tutulacak ve daha sonra yeniden kanamayı önlemek için anevrizmayı saracak veya kırpacaktır⁴. Farmakolojik tedavilerin sayısız denemesine rağmen, sadece bir kalsiyum kanalı antagonisti olan nimodipinin sonuçları iyileştirdiği gösterilmiştir⁵. Şu anda çoklu klinik çalışmalar devam etmektedir. Kapsamlı bir liste için lütfen Daou ve meslektaşları tarafından yapılan incelemeye bakın⁶.

Bir anevrizmanın yırtılması, şimdiye kadar yaşanan en kötü baş ağrısının ani başlangıcı veya gök gürültüsü baş ağrısı olarak tanımlanmıştır. Rüptür, ICP'de dik bir artışa ve ardından serebral kan akışında (CBF) bir azalmaya neden olur. Bu azalma, beynin küresel iskemisi ile sonuçlanır ve bu da bilinç kaybına neden olabilir. Bu daha mekanik yolak, ekstravaze edilmiş kan elementlerinin parçalanmaya başlamasıyla birlikte, steril nöroinflamasyonla sonuçlanan doğuştan gelen bağışıklık sisteminin sitokin salınımına ve aktivasyonuna yol açar. Ayrıca, iyon homeostazında serebral ödem ve rahatsızlık ile sonuçlanan kan-beyin bariyerinin bozulması sıklıkla gözlenir. Tüm bu değişiklikler ve daha fazlası, erken beyin hasarı (EBI) olarak adlandırılır, ilk birkaç gün içinde ortaya çıkar ve nöronal kayıp ve apoptoz ile sonuçlanır⁷.

ASAH'tan etkilenen hastaların yaklaşık 1/3'ünde 4-14. günler arasında gecikmiş serebral iskemi (DCI) gelişecektir⁸. DCI, nöbetler ve yeniden kanama dahil olmak üzere diğer nedenler hariç tutulduğunda, fokal, nörolojik bir bozukluğun başlangıcı veya Glasgow koma ölçeğinde en az 1 saat süren en az iki puanlık bir düşüş olarak tanımlanır. DCI, aSAH^9'u takiben artmış ölüm riski ve azalmış fonksiyonel sonuç ile ilişkilidir. Serebral arterlerin daralması olan serebral vazospazmın (CVS), on yıllardır DCI ile ilişkili olduğu bilinmektedir ve eskiden DCI'nın tek nedeni olduğu düşünülmektedir. O zamandan beri CVS'nin DCI gelişmeden ortaya çıkabileceği gösterilmiştir ve mikrovasküler tromboz ve daralma, kortikal yayılan depresyon ve EBI'nin enflamatuar yanıtı dahil olmak üzere daha fazla faktör tanımlanmıştır^10,11,12.

EBI ve DCI'nın hastalığın seyri ve etkilenen hastaların sonuçları üzerindeki büyük etkisi nedeniyle, hayvan modellerinin bunları mümkün olan en yüksek dereceye kadar taklit etmesi ve yine de tekrarlanabilir olması gerekir. Araştırmacılar, aSAH'ı denemek ve simüle etmek için farelerden insan olmayan primatlara kadar çeşitli hayvanlarda çok çeşitli farklı modeller kullandılar. Sprague-Dawley ve Wistar vahşi tip sıçanlar şu anda en sık kullanılan laboratuvar hayvanlarıdır ve en yaygın modeller endovasküler perforasyon modeli, cisterna-magna çift enjeksiyon modeli ve son olarak bu makale^13'te açıklanacak olan kiazmatik öncesi tek enjeksiyon modelidir.

Kiazmatik öncesi, tek enjeksiyon modeli başlangıçta Prunell ve meslektaşları tarafından diğer deneysel modellerin bazı eksikliklerine karşı koymak için geliştirilmiştir¹⁴. Ameliyat, ustalaşıldığında, oldukça tekrarlanabilir ve hayvanlar arasındaki çeşitliliği en aza indirir. Model, insanlarda SAH'ı, kan enjeksiyonunu takiben ICP'deki ani artış da dahil olmak üzere birçok noktada taklit eder ve CBF^15,16'daki düşüşe bağlı olarak geçici küresel iskemi ile sonuçlanır. İnsanlarda çoğu aSAH'ın meydana geldiği anterior dolaşımı etkiler¹⁷. Mortalite çalışmaya ve enjekte edilen kan miktarına bağlı olarak %10-%33 arasında değişmektedir^14,18. Gecikmiş hücre ölümü ve nöroinflamasyon 2. ve 7. günlerde tespit edilebilir, böylece EBI ve DCI ^19,20'nin sonuçlarını incelemek için değişkenler sağlar.

Çalışma, sıçandaki kiazmatik öncesi tek enjeksiyon modelinin güncellenmiş bir tanımını ve ICP-probunun farmasötiklerin intratekal uygulaması için bir liman olarak nasıl kullanılacağına dair bir açıklama sunmaktadır.

Protokol

Bu prosedür, bilimsel amaçlar için kullanılan hayvanların korunmasına ilişkin Avrupa Birliği'nin 2010/63/EU sayılı Direktifine uygun olarak yapılır ve Danimarka Hayvan Deneyleri Müfettişliği tarafından onaylanır (lisans no. 2016-15-0201-00940). Cerrahi, steril aletler, eldivenler, kateterler ve dikişler dahil olmak üzere mümkün olan en geniş ölçüde aseptik teknik kullanılarak gerçekleştirilir. Çalışmada, 230-350 g ağırlığındaki erkek ve dişi Sprague-Dawley sıçanları, 12 saatlik aydınlık / karanlık döngüsünde barındırılan, sabit sıcaklık 22 ° C (± 2 ° C) ve% 55 nem oranıyla (% 10 ±) nem oranı kullanılmıştır. Hayvanlara standart chow ve su ad libitum verilir. Hayvanlar ameliyattan sonra tek kafeslerde barındırılır, ancak ICP probu çıkarıldığında grup kafeslerine geri döndürülebilir. Bu protokoldeki anestezik izofluran gazıdır, ancak ketamin (100 mg / mL) ve ksilazin (20 mg / mL) 'nin 1.5 mL / kg'lık 3: 2 intraperitoneal karışımı da etkilidir²¹.

1. Hazırlıklar

1. Entübasyon için 16 G periferik ven kateterini modifiye edin. Modifiye etmek için, iğneyi 1 cm kısaltın ve kalan distal 1 cm'yi enjeksiyon valfine doğru 30 ° bükün. Kateter kanatlarını çıkarın (çoklu kullanım).
2. Bir ICP probu yapmak için, 20 mm'lik bir polietilen boru parçasını kesin (iç çap (ID): 0,58 mm, dış çap (OD): 0,96 mm) ve açık bir lümen tutarak dairesel bir plaka yapmak için bir ucunu yakın. Polietilen borunun sonuna 10 mm silikon boru (ID: 0,76 mm, OD: 2,4 mm) bağlamadan önce polietilen boruyu 1 mm silikon boru (ID: 1,0 mm, OD: 3,0 mm) ile atlatın.
3. Dizüstü bilgisayarı açın ve veri toplama yazılımını açın. Kan basıncı (BP) ve intra serebral basınç (ICP) dönüştürücülerini ve Lazer-Doppler'i üreticinin talimatlarına göre kalibre edin.
4. Kan gazı analizörü aparatını hazırlayın.
   DİKKAT: Buharlaştırıcıda yeterli izofluran bulunduğundan emin olun.
5. O2 ve atmosferik hava akışını açın. _O2'nin akışını% 30'a ve atmosferik havayı% 70'e ayarlayın.
6. Isıtma yastığını yerleştirin ve sıcaklığı 37 ° C'ye ayarlayın.

2. Anestezi

1. Sıçanı,_O2'nin % 30'u ve% 70'i atmosferik hava akışı ile anestezi odasına yerleştirin. İzofluran gazının% 5'ini odaya uygulayın. Yeterli anestezi yaklaşık 4 dakika sürecektir. Solunumu dikkatlice kontrol edin.
2. Anestezi uygulandığında, sıçanı sırtüstü pozisyonda lastik bir bantla atlatılmış ağır bir plakaya yerleştirin. Sıçanın ön dişlerini lastik bandın altına yerleştirin.
3. Dili kavisli forsepslerle dikkatlice çizin. Larenksi pamuklu bir uçla temizleyin. Ses tellerini görselleştirmek için boğazın orta hattına harici bir ışık yerleştirin.
4. Modifiye 16 G periferik ven kateterini kullanarak inspirasyon sırasında entübe edin. Doğru yerleştirildiğinde, stilettoyu çıkarın. Kateteri ventilatöre bağlayın.
   NOT: Tüpün doğru yerleştirilmesi, solunum hızı ile senkronize göğüs hareketleri ile doğrulanır. Karın hareketleri görülürse, ekstübe edin ve sıçanı anestezi ziline tekrar sokun. Hava yollarına zarar verme riski nedeniyle prosedürü üç defadan fazla tekrarlamayın.
5. Entübe edildiğinde, hayvanı_O2'nin % 30'u ve atmosferik havanın% 70'i ile suni solunumda tutun. Anesteziyi izofluranın% 1.5-3'ünde tutun. Kan basıncını 80-100 mmHg arasında tutmak için izofluranı ayarlayın.
6. Solunum cihazının inspiratuar hacmini 3 mL'de ve frekansını 40-45 ilham / dak'da tutun. İnspiratuar hacmi kan gazı analizine göre ayarlayın.
7. Yanağın iç yumuşak dokusundan 2-0 dikiş ile dikiş atın. Kateteri sabitlemek için dikişi enjeksiyon tüpünün etrafına ve periferik ven kateterinin enjeksiyon kapağına bağlayın.
8. Sıçanı ameliyat alanına taşıyın ve kuyruğu cerraha bakacak şekilde sırtüstü pozisyonda yerleştirin.
9. Kuru gözlere karşı koymak için gerektiğinde göz jelini uygulayın.
10. Yeterli anestezi derinliğini doğrulamak için bir parmak tutamağı tutamağı uygulayın. Ameliyat sırasında anestezi derinliğini değerlendirin ve koruyun.

3. Kuyruk kateteri

1. Kuyruğun proksimal 3-4 cm'sini% 0.5 klorheksidin etanol ile dezenfekte edin.
   NOT: Şu andan itibaren, cerrahın takdirine bağlı olarak cerrahi mikroskop kullanın.
2. Ventral tarafta kuyruğun proksimal ucunda 15-20 mm'lik bir cilt kesisi yapın. Arteri kesmemeye dikkat edin.
3. Kavisli bir forseps kullanarak cildi altta yatan bağ dokusundan gevşetin.
4. Arteri açığa çıkaran fasyaya dikkatlice nüfuz edin.
5. Kuyruk arterini kavisli bir forseps kullanarak altta yatan dokudan dikkatlice serbest bırakın.
6. Geminin altına üç siyah ipek iplik sürün. Bir ipliği mümkün olduğunca distal olarak yerleştirin ve cerrahi bir düğümü arterin etrafına sıkıca bağlayın. İpliğin gevşek uçlarını bir hemostat ile tutun.
7. Kalan iki ipliği arterin etrafına gevşek bir şekilde bağlayın.
8. Proksimal ipliği mümkün olduğunca yakından itin. Proksimal ipliğin uçlarını tutmak için bir hemostat uygulayın. Hemostatı hafifçe çekin, ancak kan akışını kısıtlamak ve engellemek için yeterlidir. Hemostatı karın üzerine yerleştirin.
9. Kateterin ucunu 45° açıyla kesin. Arteriyel duvara nüfuz etmeyi önlemek için keskin noktayı kesin.
10. Bir Vannas makası kullanarak, arter çapının 1 / 3'ünü, distal düğümden 3-5 mm uzakta, 30 ° 'lik bir açıyla bir arter kesisi yapın.
11. Kateteri iki düz forseps kullanarak artere yerleştirin. Kateteri tutmak için bir forseps, diğerini ise arteri kateterin üzerine dikkatlice çekmek için kullanın.
12. Kateteri damardan proksimal düğüme kadar yerleştirin ve düğümü hemostattan gevşetin. Kateterdeki kan akışını görselleştirin. Orta ipliği gevşek bir şekilde katetere sabitleyin.
13. Arterin tekrar fasyayla kaplandığı noktaya ve mümkünse hemen ötesine yerleştirmeye devam edin.
14. Kateter yerleşimini ve olası sızıntıyı salinle yıkayarak kontrol edin.
15. Cerrahi düğümler kullanarak iki proksimal ipliği sabitleyin.
    NOT: Kan basıncı ölçümünün pulsatil olması gerekir; Değilse, kateter uygun şekilde yerleştirilmemiştir.
16. Distal ipliği kullanarak cerrahi bir düğüm bağlayarak kateteri insizyonun ucuna sabitleyin.
17. Cilt insizyonunu iki adet emilemeyen monofilament 4-0 sütür ile birlikte gevşek bir şekilde dikin. Katetere nüfuz etmemeye dikkat edin.
    NOT: Ameliyat boyunca nabız genliğinin farkında olun. Bu düşükse, kateteri salinle yıkayın.
18. Kan gazı örneklemesi için kan akışına izin vermek üzere arteriyel kateteri basınç dönüştürücüsünden gevşetin. Kateterin sonuna mikro kılcal bir tüp yerleştirin. Kanın tüpe akmasına izin verin. Kan alındıktan sonra kateteri dönüştürücüye tekrar takın ve kateteri yıkayın.
19. Kılcal tüpü kan gazı analizörüne yerleştirin. pH, pCO2 ve pO2'yi ölçün ve not edin
    NOT: Kan gazı ve kan basıncı değerlerine bağlı olarak, havalandırma oranını değiştirin. Ortalama arteriyel basınç (MAP) çok düşükse, izofluran akış hızını düşürmeye çalışın. Uygun anestezi derinliğini sağlamak için refleksleri test edin.

4. ICP probu

1. Sıçanı stereotaksik çerçeveye yerleştirin. Sıçanı simetrik olarak konumlandırmak önemlidir.
2. Boynun ön fleksiyonunu oluşturmak için stereotaksik çerçevenin altına silindirik bir yastık yerleştirin.
3. Sıçanın kafa derisini, boynunu ve kulakların arkasındaki alanı tıraş edin. Gereksiz saçları çıkarın.
4. Alanı% 0.5 klorheksidin etanol ile dezenfekte edin.
5. Adrenalin ile 0.7 mL 10 mg / 5 μg / mL lidokain ile lokal anestezi yapın, iğneyi orta hatta kafatasının kaudal ucuna yerleştirin. Boynun kas sistemine 0.3-0.4 mL ile enjekte edin. Geri kalanını deri altından bregmanın etrafına ve önüne enjekte edin.
6. İğne delinmesinden orta hatta kaudal olarak ~8 mm bir cilt kesisi yapın.
7. Atlantooksipital membranı tanımlamak için tüm kasları katmanlar halinde keskin bir şekilde diseke edin (orta hattaki kafatasına kaudal olarak mermer renkli üçgen).
8. Boyun kas sistemini kısıtlamak için Alm retraktörünü kullanın. Gerekirse uçlu retraktörü kaudal olarak yerleştirin.
9. Steril ICP probunun ICP dönüştürücüsüne bağlı olup olmadığını kontrol edin. ICP probunu tuzlu suyla yıkayın. ICP probunda hava kabarcığı bulunmadığından emin olun.
10. Atlantooksipital membranı 23 G'lik bir iğne kullanarak kesin. ICP probunu membrandan koaksiyel hale getirmek için bir delik açın.
11. Probu atlantooksipital membrandan yavaşça koaksiyel hale getirin. Probu hafifçe çekin ve 0-5 mmHg arasında değişen bir titreşim eğrisi gösterdiğinden emin olun. Değilse, probu çıkarın, dönüştürücüye bağlantıyı kontrol edin ve lümenden geçen akışı onaylayın.
12. Doku yapıştırıcısından iki damla uygulayın. 1 mm'lik silikon boruyu membrana doğru hareket ettirin ve ICP-prob yer değiştirme riskini en aza indirmek için ek yapıştırıcı uygulayın.
13. Rötraktör(ler)i çıkarın.
14. İnsizyonun sefalik ucuna bir yatay yatak sütürü ve emilemeyen bir monofilament 4-0 sütür kullanarak kaudal uca basit bir kesilmiş sütür yapın.

5. İğnenin ve Lazer-Doppler probunun yerleştirilmesi

1. Orta hatta gözlerin hemen önünde, kaudal olarak 15 mm bir kesi yapın.
2. Bağ dokusunu ve kasları forseps ile çıkarın. Steril bir pamuklu çubuğun ucunu bir rougine olarak kullanın, böylece bregma ve koronal dikişlerin tanımlanmasını mümkün kılar.
3. Alm ekartörünü yerleştirin.
4. Stereotaksik çerçeveye 25 G spinal iğne yerleştirin. İğneyi tam olarak bregma üzerine yerleştirin ve pozisyonu not edin.
   NOT: Stereotaksik çerçevenin orta hat eklemini dikey düzlemde hayvana doğru 30° 'ye yerleştirin.
5. İğneyi bregmadan çıkarın, çerçeveyi 65 mm önden hareket ettirin ve ardından delme bölgesini işaretlemek için iğneyi orta hatta değiştirin.
6. Dura mater kemiğin altında tanımlanana kadar delin. Kemik parçalarını düz forseps kullanarak yavaşça çıkarın ve boşluğu kemik mumu ile doldurun.
7. Lazer-Doppler için bregmanın sağında 3-4 mm lateral ve koronal sütürün hemen önünde başka bir delik açın. Kemiğin içinden sonuna kadar delmek gerekli değildir. Dura mater nüfuz etmemeye dikkat edin.
8. Lazer-doppler'in kan akışını ölçebileceği damarları arayın. Lazer-doppler'i yerleştirin ve değerleri kontrol edin. Minimum 100 FU değeri gereklidir. Mikroskobu çıkarın (yapay ışık).
9. Değerler hala kabul edilebilirse, probu sabitlemek için bir damla yapıştırıcı ekleyin.
10. Değerin 80 FU'nun üzerinde olup olmadığını doğrulamak için yeniden denetleyin. Değer 80 FU'nun altındaysa, 80 FU'nun üzerinde bir değere ulaşmak için probu çıkarın ve yeniden konumlandırın.
    NOT: FU değeri, serebral kan akışını (CBF) gösteren rastgele bir birimdir.

6. SAH'ın İndüksiyonu

1. İğneyi, kafatasının tabanının direnci hissedilene kadar yarımküreler arasındaki orta çizgide kafatasından yavaşça yerleştirin. Optik kiazmın hemen önüne doğru yerleştirmeyi sağlamak için iğneyi 1 mm geri çekin.
2. Kanı enjekte ederken en homojen sonucu elde etmek için iğne ucu sağa bakacak şekilde iğneyi saat yönünde 90° çevirin. Stilettoyu çıkarın (Şekil 3).
3. 15 dakika boyunca dengeleyin ve 80-100 mmHg aralığında ortalama bir arteriyel kan basıncı elde etmek için anestezi seviyesini ayarlayın.
4. Bir kan gazı analizi yapın. Anestezi seviyesini buna göre ayarlayın.
5. Künt 23 G iğneli 1 mL'lik bir şırınga kullanarak kuyruk kateterinden 500 μL kan çekin.
6. Hava enjeksiyonunu önlemek için omurilik iğne odasının ölü alanını kanla doldurun. 23 G iğnesini kan dolu şırıngadan çıkarın ve şırınganın 300 μL kan içerdiğini onaylayın.
7. Şırıngayı spinal iğneye bağlayın. Sıkıca tutun ve MAP'yi aşmak için kanı manuel olarak enjekte edin.
8. Dizüstü bilgisayarda ICP'de dik bir artış ve CBF'de dik bir düşüş gözlemleyin.
   NOT: CBF, ameliyatın başarılı olması için en az 5 dakika boyunca başlangıç puanına kıyasla% 50 veya daha düşük olmalıdır , bkz. Sahte sıçanlar 6.1-6.7 adımlarından geçmez, böylece spinal iğnenin serebruma sokulmasını atlar, olası spontan kanamayı ve iyatrojenik beyin hasarını en aza indirir.

7. İyileşme ve uyanış

1. Deri altından 0.1 mL/100 g hayvan ağırlığı 5.0 mg/mL karprofen ve 1 mL/100 g hayvan ağırlığında izotonik salin uygulayın. Uygulamadan önce sıvıların en azından oda sıcaklığında olduğundan emin olun.
2. Daha sonra sıçanı SAH'ı takiben 30 dakika boyunca anestezi altında tutun.
3. İğneyi, lazer doppler probunu çıkarın ve ardından boşlukları kemik mumu ile doldurun. Emilemeyen monofilament 4-0 dikişli iki yatay yatak sütürü kullanarak insizyonu kapatın.
4. ICP probunu sterna magna'ya enjeksiyon yapmak üzere kullanmak için, silikon boruyu çıkarın ve polietilen boruya bir nokta adaptörü takın.
5. Herhangi bir müdahale planlanmıyorsa, basit, kesilmiş dikişi kesin. ICP probunu bir makas kullanarak mümkün olduğunca kısaltın ve ardından beyin omurilik sıvısının (BOS) sızmasını önlemek için ucunu yapıştırın. Kesiyi emilemeyen bir monofilament 4-0 sütür ile kapatın.
6. Sıçanı stereotaksik çerçeveden çıkarın ve sırtüstü pozisyonda yerleştirin. Gevşek dikişleri kuyruk kesisinden çıkarın.
7. Arteriyel kateterin proksimal ve derinliğinde tek bir dikiş yerleştirin. Kateteri çıkarın ve kanamayı önlemek için dikişi bağlayın. Kuyruk insizyonunu emilemeyen monofilament 4-0 sütür ile dikin.
8. İzofluranı kapatın.
9. Sıçanı ve kürkünü mümkün olduğunca temizleyin.
10. Pedal çekme refleksi yeniden kazanıldığında ve sıçan ventilatörden ayrıldığında spontan solunuma sahip olduğunda, ekstübe edin.
11. Sıçanı yiyecek ve su ad libitum ile tek bir kafese yerleştirin. Kafesin yarısını bir ısıtma plakasının altına yerleştirin ve sıçanı kafesin bu bölgesine yerleştirin.
12. Pinport enjektörünü hassas bir şırıngaya uyarlayarak intratekal uygulama gerçekleştirin ve tedaviyi pinport adaptörü aracılığıyla uygulayın. Bu müdahale uyanık olan hayvanlarda mümkündür. Bkz. Şekil 5.

8. ICP-probu çıkarılması (ameliyat sırasında çıkarılmazsa)

NOT: Cerrahın takdirine bağlı olarak cerrahi mikroskop kullanın.

1. Sıçanı daha önce tarif edildiği gibi anestezi odasına yerleştirin.
2. Anestezi uygulandığında, sıçanı ısıtma yastığı ile operasyon alanında sırtüstü pozisyonda yerleştirin.
3. Burnu anestezi maskesine yerleştirin. _O2 ila% 30, atmosferik hava% 70 ve izofluran seviyelerini% 2 olarak ayarlayın.
4. Kuru gözlere karşı koymak için göz jelini sürekli olarak uygulayın.
5. Kaudal basit kesilmiş dikişi kesin. Kesi açın ve olası nekrotik dokuyu veya kan pıhtılarını çıkarın.
6. ICP probunu bir makas kullanarak mümkün olduğunca kısaltın ve beyin omurilik sıvısının (BOS) sızmasını önlemek için ucunu yapıştırın. Kesiyi emilemeyen bir monofilament 4-0 sütür ile kapatın.
7. İzofluranı kapatın.
8. Sıçan hareket etmeye başladığında, yiyecek ve su ad libitum içeren tek bir kafese yerleştirin. Kafesin yarısını bir ısıtma plakasının üzerine yerleştirin ve sıçanı bu alana yerleştirin.
9. Alışılmış duruma geri döndüğünde, hayvanları ilk 15 dakika boyunca gözetim altında ortak bir kafeste birbirlerine tekrar tanıtın.

Sonuçlar

Kadınların erkeklere kıyasla daha fazla aSAH riski vardır. Buna rağmen, erkek kemirgenler öncelikle kadınlarda östrus döngüsünün heterojenliğinden kaynaklanan olası önyargı nedeniyle deneylerde kullanılır. Burada sunulan temsili sonuçlar, dişi ve erkek sıçanları karşılaştıran ve modelin dişi hayvanlarda erkek^21'e kıyasla benzer sonuçlar verdiğini doğrulayan yeni bir yayından alınmıştır. Çalışmaya 34 dişi Sprague-Dawley sıçanı (18 SAH ve 16 şems) dahil e...

Tartışmalar

SAK'ın kizmatik öncesi tek enjeksiyon modeli, ICP'deki artış, CBF'nin azaltılması, geçici küresel iskemi, nöroinflamatuar belirteçlerin upregülasyonu ve CVS 14,15,16,18,19,20 dahil olmak üzere insan SAK'ının birçok önemli unsurunu taklit eder. ICP probu ayrıca intratekal uygulama için bir liman olarak da kul...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
16 G peripheral vein catheter	BD Venflon	393229	Needle shortened, distal 1 cm curved. Wings removed
Anesthesia bell/ chamber	Unknown
Blood gas analyzer	Radiometer	ABL80
Blood pressure (BP) monitor	Adinstruments	ML117	Connects to Powerlab
Curved forceps, 12 cm x 3	F.S.T	11001-12	For anesthesia
Cylindrical pillow, 28 cm x 4 cm	Homemade		Made from surgical towels
Data acquisition hardware	Adinstruments	ML870 Powerlab
Data acquistion software	Adinstruments	LabChart 6.0
Drill	KMD	1189
Drill controller	Silfradent	300 IN
Flexible light	Schott	KL200
Heating pad	Minco	1135
Hypodermic needle, 20 G	KD Medical	301300	Connects to stereotaxic frame
ICP monitor	Adinstruments	ML117	Connects to Powerlab
Isoflurane vaporizer	Ohmeda	TEC3
Laptop	Lenovo	T410
Laser doppler monitor	Adinstruments	ML191
Laser doppler probe	Oxford Optronics	MSF100XP	Connects to laser doppler monitor
Needle holder, 13 cm	F.S.T	12001-13	For anesthesia
Precision syringe, 0.025 mL	Hamilton	547407
Stereotaxic frame	Kopf Instruments	M900
Surgical microscope	Carl Zeiss	F170
Suture needle	Allgaier	1245	For anesthesia
Temperaure controller	CWE,INC.	TC-1000
Transducer x 2	Adinstruments	MLT0699	Connects to BP and ICP monitor
Ventilator	Ugo Basile	7025
Veterinary clipper	Aesculap	GT421
3-pronged Blair retractor, 13.5 cm	Agnthos	17022--13
Blunt Alm retractor	F.S.T	17008-07
Curved forceps, 12 cm x 2	F.S.T	11001-12
Needle holder, 13 cm	F.S.T	12001-13
Straight Dumont forceps, 11 cm	F.S.T	11252-00
Straight Halsted-Mosquito hemostat x 2	F.S.T	13008-12
Straight Iris scissor, 9 cm	F.S.T	14090-09
Straight Vannas scissor, 10.5 cm	F.S.T	15018-10
Absorpable swabs	Kettenbach	31603
Black silk thread, 4-0, 5 x 15 cm	Vömel	14757
Bone wax	Aesculap	1029754
Carbomer eye gel 2 mg/g	Paranova
Cotton swab	Heinz Herenz	WA-1
Cotton tipped applicator x 4	Selefa	120788
Hypodermic needle, 23 G x2	KD Medical	900284	Connects to stopcock. Remove distal end
Hypodermic needle, 23 G x3	KD Medical	900284	Remove distal end. 2 connects to stopcock, 1 to syringe
ICP probe:	Homemade		Made of the following:
Polythene tubing, 20 mm	Smiths medical	800/100/200	Inner diameter (ID): 0.58 mm, Outer diameter (OD): 0.96 mm.
Silicone tubing, 10 mm	Fisher	15202710	ID: 0.76 mm, OD: 2.4 mm.
Silicone tubing, 2 mm	Fisher	11716513	ID: 1.0 mm, OD: 3.0 mm.
Micro hematocrit tubes	Brand	7493 11
OP-towel, 45 cm x75 cm	Mölnlycke	800430
PinPort adapter, 22 G	Instech	PNP3F22
PinPort injector	Instech	PNP3M
Polythene tubing, 2 x 20 cm	Smiths medical	800/100/200	Connects to syringe. ID: 0.58 mm, OD: 0.96 mm.
Rubberband	Unknown
Scalpel, 10 blade	Kiato	23110
Spinalneedle, 25 G x 3.5''	Braun	5405905-01
Stopcock system, Discofix x 2	Braun	16494C	Connects to transducer
Suture, 4-0, monofil, non-resorbable x 3	Ethicon	EH7145H
Syringe, 1 mL	BD Plastipak	1710023
Syringe, luer-lock, 10 mL x 4	BD Plastipak	305959	Connects to transducer
Tissue adhesive glue	3M	1469SB
0.5% Chlorhexidine spirit	Faaborg Pharma	210918
Carprofen 50 mg/mL	ScanVet	43715	Diluted 1:10
Isoflurane	Baxter
Isotonic saline	Amgros	16404
Lidocaine-Adrenaline 10 mg/5 µg/mL	Amgros	16318