Ceza Uygulanan Yoksunluktan Sonra Eroinin Strese Bağlı Nüksetmesini İncelemek İçin Bir Prosedür

Özet

Ceza uygulanan yoksunluktan sonra eroin arayışına karşı sağlam bir akut gıda yoksunluğuna bağlı nüks gösteren bir prosedür açıklanmaktadır. Cezalandırılan bir yoksunluk modeli, eroinin kendi kendini yönetmesi için arama ve alma zinciri programı kullanılarak başarıyla uygulandı. Eroin arama testleri daha sonra 24 saatlik gıda yoksunluğu stresinin ardından gerçekleştirilir.

Özet

Ceza ile uygulanan yoksunluk prosedürü, uyuşturucu alımı ile ilişkili olumsuz sonuçlar nedeniyle insanların başlattığı kendi kendine empoze edilen yoksunluğu modellemektedir. Bu model, metamfetamin, kokain ve alkol gibi farklı kötüye kullanım maddeleri kullanan deneylerde uygulanmıştır. Bununla birlikte, eroin eğitimi almış hayvanlarda cezaya bağlı yoksunluk gösterilmemiştir. Ayrıca, akut stres, insanlarda ve hayvan modellerinde nüks için önemli bir tetikleyicidir. Daha önce, akut gıda yoksunluğunun, söndürülmüş kokain ve eroin arayışının yeniden başlatılmasına neden olduğu güçlü bir şekilde gösterilmiştir. Burada açıklanan prosedür, akut strese maruz kalmanın, ceza uygulanan yoksunluktan sonra eroin arayışı üzerindeki etkilerini değerlendirmek için kullanılabilir. Toplam 8 sıçana kronik intravenöz (i.v.) kateterler implante edildi ve arama-alma zincirleme bir program kapsamında 18 gün boyunca eroini (0.1 mg / kg / infüzyon) kendi kendine uygulamak için eğitildi. Arama bağlantısını tamamlamak, bir eroin infüzyonu ile eşleştirilen alma koluna erişim sağladı. Arama kolu değişken aralıklı 60 takviye programı (VI60) ile programlandı ve alma kolu sabit oranlı 1 takviye programı (FR1) ile programlandı. Kendi kendine yönetim eğitimini takiben, alma kolunun uzatılması yerine, tamamlanan arama bağlantılarının% 30'unda hafif bir ayak şoku verildi. Ayak şoku yoğunluğu günlük seans başına 0,1 mA artarak 0,2 mA'dan 1,0 mA'ya çıkarıldı. Eroin arama testleri, 24 saatlik gıda yoksunluğu (FD) veya doymuş koşullardan sonra yapıldı. Akut gıda yoksunluğu koşulu altındaki sıçanlar, ceza ile uygulanan yoksunluk arayışındaki eroini güçlü bir şekilde arttırdı.

Giriş

Relaps, uyuşturucu kullanımının tedavisinde en zorlu sorundur ^1,2. Bununla birlikte, insanlarda nüksetmeyi önlemeye yardımcı olmak için sadece bir avuç farmakolojik tedavi onaylanmıştır³. Kuzey Amerika'nın şu anda karşı karşıya olduğu opioid salgını bunun çarpıcı bir örneğidir ve opioidlere nükseden hayvan modelleri üzerinde farklı yaklaşımların dikkate alınmasını gerektirir.

Akut stresin insanlarda nüksetmek için önemli bir tetikleyici olduğu gösterilmiştir⁴. Genellikle uyuşturucu bağımlılığı ile ilişkili bir çevresel stres faktörü gıda yoksunluğudur. Uyuşturucu kullanıcıları genellikle gıda yerine ilaç elde etmek için kaynak ayırmayı tercih ederler. Kalori açığının sigara⁵ ve alkol⁶ kullanımında daha yüksek nüks ile ilişkili olduğu gösterilmiştir. Etik ve pratik konular nedeniyle, alandaki araştırmaları kolaylaştırmak için son yıllarda hayvan modelleri geliştirilmiştir. Hayvan modellerinde, akut gıda yoksunluğunun,⁷ arayan söndürülmüş eroini sağlam bir şekilde eski haline getirdiği gösterilmiştir. Şu anda, çoğu hayvan nüks modeli, ya insan yoksunluğunu temsil etmeyen (örneğin, nesli tükenmeye dayalı modeller) ya da hapsedilme veya yatarak tedavi nedeniyle kaçınmaya zorlanan uyuşturucu kullanıcılarının yalnızca küçük bir yüzdesini kapsayan yoksunluk prosedürlerine dayanmaktadır (örneğin, zorla yoksunluk modelleri). Uyuşturucu kullanıcılarının kaçınmayı seçmelerinin ana nedeni, uyuşturucu arama ve⁸ alma ile ilişkili olumsuz sonuçlardır. Ceza ile uygulanan yoksunluk, insanlarda kendi kendine empoze edilen yoksunluk üzerinde uyuşturucu arayışı ile ilişkili olumsuz sonuçları taklit eden bir hayvan modelidir. Bu model, uyuşturucu arama veya alma ile hafif bir ayak şoku gibi engelleyici bir uyaran sunar ve bu da hayvanın ilacı gönüllü olarak almayı bırakmasına neden olur. Uyuşturucu arayışı için olumsuz sonuçlar içeren bir başka prosedür, uyuşturucudan yoksunluk ve nüks için elektriksel bariyer çatışma modelidir⁹. Sıçan, ilacın kendi kendine uygulanmasıyla bağlantılı operant davranışı gerçekleştirmek için bir elektrik bariyerini geçmelidir. Model, psikostimülan ve opioid ilaçlara gönüllü yoksunluk ve nüks göstermek için başarıyla kullanıldı^10,11. Bununla birlikte, elektriksel bariyer prosedürü altında, uyuşturucu arama çabaları, insanlık durumundan farklı olarak, her zaman engelleyici bir olayla ilişkilidir. Dahası, ilaç alımının kendisi, hayvan bariyeri tekrar geçerek infüzyonu takiben güvenli alana döndüğü için elektriksel ayak şoku ile örtüşebilir.

Ceza ile uygulanan yoksunluk, kokain 12, alkol¹³, metamfetamin¹⁴, remifentanil¹⁵ gibi diğer kötüye kullanım ilaçlarıyla birlikte kullanılmıştır, ancak eroin eğitimi almış hayvanlara hiçbir zaman uygulanmamıştır. Model,¹⁴ ve ilaçla ilişkili ipuçları^16'nın astarlanması ile indüklenen nüksetmeyi incelemek için kullanılmıştır, ancak strese bağlı bir nüks prosedürüne entegre edilmemiştir. Burada açıklanan prosedür, erkek sıçanlarda ceza uygulanan yoksunluktan sonra eroine akut gıda yoksunluğuna bağlı nüksetmeyi göstermek için kullanılır.

Protokol

Tüm sıçanlar, Kanada Hayvan Bakımı Konseyi'nin yönergelerine göre tedavi edilir. Tüm deneysel prosedürler için onay Concordia Üniversitesi Hayvan Araştırmaları Etik Kurulu tarafından verildi.

1. Hayvanlar

1. 275-300 g (erkek) veya 225-250 g (dişiler) ağırlığındaki Long Evans sıçanlarını edinin. Ameliyata kadar mısır koçanı yatakları ve rendelenmiş kağıt ile standart plastik kafeslerde çift ev fareleri.
2. Sıçanları ters bir açık-karanlık döngüsünde tutun (ışıklar 9: 30'da kapalı, ışık 21: 30'da yanıyor).
3. Gıda yoksunluğu testi dışında yiyecek ve suya sınırsız erişime izin verin. Düzenli sıçan chow kullanın (% 20.9 protein,% 67.2 karbonhidrat ve% 11.8 yağ).

2. İntravenöz ameliyatlar

1. Kateter oluşturun ve Sedki ve ark. 2013^17'de açıklandığı gibi intravenöz cerrahi gerçekleştirin: 1) Anestezi için% 2-2.5 İzoflor kullanın, 2) Ameliyat sırasında uygulanan penisilin dozunu deri altı enjeksiyonu yoluyla 60.000 IU / sıçan olarak değiştirin ve 3) Kateterleri yıkamak için kullanılan heparin ve gentamisin karışımındaki gentamisin dozunu 7.5 IU + 800 μg'ye yükseltin; 0.2- 0.3 mL.
2. Ketoprofen veya karprofen, bir anti-enflamatuar analjezik, intraperitoneal veya subkutan (5 mg / kg) ameliyattan hemen sonra (anesteziden iyileşmeden önce) ve takip eden 3 günde enjekte edin. 2 günlük iyileşme süresi boyunca, iyileşmeye yardımcı olmak için püre haline getirilmiş yiyecek ve ısı (gerekirse) verin. Ani kilo kaybı veya diğer sağlık sorunları belirtileri olup olmadığını kontrol etmek için hayvanları günlük olarak tartın ve denetleyin.

3. Davranışsal prosedür

1. Çalışma koşullandırma odaları:
   1. Sedki et al. 2013^17'de açıklandığı gibi çalışma koşullandırma odalarını ayarlayın.
2. Alışkanlık günü:
   1. Ameliyattan iyileştikten sonra fareleri operant eğitim odalarında barındırın ve herhangi bir protokole başlamadan önce hayvanların 24 saat boyunca odaya alışmasına izin verin. Tüm deney boyunca hayvanları operant odalarda tutun.
   2. Sıçanları metal yaya bağlamayın ve herhangi bir deneysel protokol başlatmayın (işaret ışığı, ton ve kollar alışkanlık gününde mevcut değildir).
3. Eroinin kendi kendini yönetmesi:
   1. 5'li konektörü Tygon borusuna ve metal yaya takın.
   2. Aşağıda açıklanan prosedüre göre 6 saatlik eroin kendi kendine uygulama (0.1 mg / kg / infüzyon) günlük eğitim seansları ayarlayın.
   3. Ters ışık döngüsünün karanlık fazının başlangıcında (temsili sonuçlarda saat 09:30 civarında) arama kolunun uzatılmasıyla (veya ilk 2 günde kolu alın; aşağıya bakınız) günlük eğitim oturumlarına başlayın ve ev ışığını kapatın.
   4. Sabit oranlı 1 (FR1; 2 gün) altında yalnızca alma kolu ile kendi kendine yönetim
      1. Her denemeyi, alma kolunun takılmasıyla başlayacak şekilde programlayın.
      2. Sıçan alma koluna bir kez bastığında (FR1), alma kolunu geri çekin, kolun üzerindeki işaret ışığını açın ve 20 saniyelik bir zaman aşımı süresi boyunca tonlayın, ev ışığını kapatın ve bir eroin infüzyonunun verilmesine izin verin (0.13 mL'de 0.1 mg / kg)
      3. Hiçbir ipucunun sunulmadığı, ev ışığının kapatıldığı ve kolun geri çekildiği 30 saniyelik bir deneme arası aralık programlayın. Bir sonraki denemenin başlangıcı için, alma kolunu takın ve ev lambasını açın.
   5. FR1 altında arama-alma zinciri ile kendi kendine yönetim (5 gün)
      1. Çalışma eğitim sistemini yalnızca arama kolunu yerleştirecek şekilde programlayın ve oturumun başlangıcını bildirmek için ev ışığını açın. Alma kolu geri çekilmiş durumdadır.
      2. Sıçan arama koluna bir kez (FR1) bastığında, program arama kolunu geri çeker ve alma kolunu yerleştirir.
      3. Çekme kolu (FR1) üzerindeki bir basma, alma kolunu geri çeker ve adım 3.3.4.2 ve 30 s denemeler arası aralıktaki ile aynı prosedürü başlatır.
      4. Çalışan eğitim sistemini, denemeler arası aralığın sonunda arama kolunu yerleştirmek ve bir sonraki denemenin başlangıcını işaret etmek için ev ışığını açmak için programlayın.
      5. Bir sıçan, bir denemenin sonunu ve ilacı uygulama fırsatının kaybını temsil etmek için 10 dakika boyunca arama-alma zincirini gerçekleştiremezse (arama veya alma koluna basmadan) denemeler arası aralığı başlatmak için çalışma eğitim sistemini programlayın.
   6. Değişken Aralıklar altında arama-alma zinciri ile kendi kendini yönetme (VI5, VI30 ve VI60)
      1. Bölüm 3.3.5'teki tüm adımları programlayın, ancak FR1 yerine arama kolunda yeni takviye zamanlaması olarak 5 (VI5) değişken aralığını ekleyin. VI5 programı kapsamında 3 gün boyunca kendi kendini yönetme eğitimine izin verin.
      2. Yazılımı, VI5 programını etkinleştirmek için arama koluna ilk basıldığında izin verecek şekilde ayarlayın. VI5 zamanlaması için, yazılımın 0,1 sn, 5 s ve 10 s'lik bir listeden rastgele bir aralık süresi seçmesine izin verin, bu da ortalama 5 s aralıkla sonuçlanır. Seçilen aralık geçtikten sonra ilk arama kolu presi, arama kolunu geri çeker ve alma kolunu uzatır.
      3. 3.3.4.2, 3.3.5.4., 3.3.5.5 adımlarını izleyin. kolu almak ve deneme talimatlarının sona ermesi için.
      4. Daha sonra, sıçanları arama bağlantısı için VI30 programı altında 5 gün, ardından VI60 programı altında 3 gün boyunca eğitin.
      5. VI30 zamanlaması için, yazılımın ortalama 30 sn için 15 sn, 30 sn ve 45 s'lik bir listeden rastgele bir zaman seçmesine izin verirken, VI60 programı için yazılım 45 sn, 60 s ve 75 s'lik bir listeden rastgele bir zaman seçer.
      6. Denemeler arası aralıkları, farklı takviye programları boyunca değiştirin. FR1 ve VI5 sırasında denemeler arası aralığı 30 sn'de başlatın, ancak VI30 ve VI60 sırasında kademeli olarak 7 dakikaya yükseltin.
4. Ceza ile uygulanan yoksunluk
   1. Arama kolunun takılması ve ev ışığının açılmasıyla ceza oturumlarına başlayın. Hayvanların anormal ağrı belirtileri veya herhangi bir sağlık sorunu göstermemesini sağlamak için düzenli gözetim ile 8 gün boyunca ceza seanslarına izin verin.
   2. Çalışan eğitim sistemini, VI60 altında arama bağlantısını tamamladıktan sonra, arama kolu geri çekilecek, ev ışığı kapatılacak ve alma kolunun yerleştirilmesi yerine tamamlanan arama bağlantılarının% 30'una hafif bir ayak şoku uygulanacak şekilde programlayın. Alma kolu, normal bir özyönetim denemesinde olduğu gibi, tamamlanmış arama bağlantılarının diğer% 70'ine uzanır.
   3. Arama kolunu takmadan ve bir sonraki denemenin başlangıcını işaret etmek için ev ışığını açmadan önce tüm ipuçları ve ev ışığı kapalıyken 7 dakikalık bir deneme aralığı programlayın.
   4. Ayak şoku yoğunluğunu 0,2 mA'ya ayarlayın ve 1,0 mA'ya kadar ceza günü başına 0,1 mA artırın.
   5. Sıçanlar alma koluna bastıktan sonra (mevcut olduğunda denemelerde), kolun geri çekilmesi, eroin infüzyonunun verilmesi ve ipuçlarının sunulması için 3.3.4.2 adımını tekrarlayın, ardından 7 dakikalık bir deneme arası aralık izleyin.
   6. Bir sonraki denemeye, arama kolunun takılması ve ev ışığının açılmasıyla başlayın.
   7. Sıçan 10 dakika boyunca herhangi bir kola basmazsa, 3.3.5.5 adımını izleyin.
5. Akut gıda yoksunluğu (24 saat)
   1. Ceza uygulanan yoksunluğun son gününü takip eden günde, fareleri iki eşleşen gruba ayırın (vücut ağırlığına ve kendi kendine yönetim eğitiminin son 3 günü boyunca ortalama arama kolu ve infüzyon sayısına göre): Gıda Yoksunluğu (FD) ve Sated.
   2. Gıda yoksunluğuna bağlı nüks testine tabi tutulan sıçanlar için yiyecek haznelerini odalardan çıkarın (yaklaşık 9: 30) ve yiyeceğe sınırsız erişimi olan doymuş grup için yiyecek hazneleri bulundurun. Her iki grupta da suya sınırsız erişim sağlayın ve gıda yoksunluğu döneminde herhangi bir sağlık sorunu göstermemelerini sağlamak için hayvanları denetleyin.
6. Gıda yoksunluğuna bağlı eroin arama testleri
   1. 24 saatlik gıda yoksunluğundan sonraki sabah, VI60 programı kapsamında, şok veya eroin infüzyonu verilmeden 7 dakikalık bir deneme aralığı ile 3 saatlik bir eroin arama testi yapın. 3 saatlik seanstan sonra yiyecek haznelerini yiyecekten yoksun sıçanlara iade edin.
   2. İlk eroin arama testinden sonraki sabah, ilk nüks testinde doyurulan sıçanların odalarından yiyecek haznelerini çıkarın. Test öncesi ve sırasında daha önce gıdadan mahrum bırakılmış sıçanların yiyeceğe (doymuş durum) sınırsız erişimine izin verin.
   3. Adım 3.6.1'de olduğu gibi, ertesi gün (24 saat yiyecek yoksunluğundan sonra) başka bir 3 saat eroin arama testi yapın.
   4. Testten sonraki gün, sıçanları bir karbondioksit odası kullanarak ötenazi yapar (dakikada oda hacminin% 30-70'inin doluluk oranında% 100 CO₂ ).

Sonuçlar

Erkek sıçanlar, takviye programı eğitim günleri boyunca arttıkça arama kolu preslerinde bir artış ve eğitim günleri boyunca güvenilir, tutarlı sayıda eroin infüzyonu göstermiştir (Şekil 1). Cezalandırma sırasında, sıçanlar 8 ceza günü boyunca ayak şoku yoğunluğunun artmasıyla arama kolu preslerinin ve infüzyonlarının sayısını azaltmıştır (Şekil 2). Gıda yoksunluğu durumu, ceza uygulanan yoksunluktan sonra eroin arayışı...

Tartışmalar

Bu makalede iki önemli gösterim var. Birincisi, eroinle arama ve alma zincirini kullanarak cezalandırılan yoksunluğun doğrulanması. İkincisi, strese bağlı nüksün ceza ile uygulanan bir yoksunluk prosedüründe gözlenebileceği gösterilmiştir. Bunlar önemli gösterilerdir, çünkü (i) Cezaya bağlı yoksunluk prosedürü, gönüllü yoksunlukla sonuçlandığı için insan durumunu daha yakından taklit eder, yani uyuşturucu arayanların neslinin tükenmesi veya uyuşturucu alma ortamından zorla çıkar...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Anafen Injection 100 mg/mL Vial/50 mL	MERIAL Canada, Inc.	1938126	anti-inflammatory drug
Balance arm	Coulbourn Instruments	H29-01
Cannulae (22 G, 5-up)	Plastics One	C313G-5up
Environment connection board & Linc cable	Coulbourn Instruments	H03-04
Fixed speed infusion pump (3.3 RPM)	Coulbourn Instruments	A73-01-3.3
GE Marine Silicon	GE	SE-1134
Graphic State Notation 3	Coulbourn Instruments	GS3	Software
Habitest universal Linc	Coulbourn Instruments	H02-08
Heroin HCl	National Institute for Drug Abuse, Research Triangle Park, NC, USA
House light-Rat	Coulbourn Instruments	H11-01R
Isofluorane USP 99.9% Vial/250 mL	Fresenius Kabi Canada Ltd	2237518
Liquid Swivels, Plastic, 22 G	Lomir Biomedical, Inc.	RSP1
Rat test cage	Coulbourn Instruments	H10-11R-TC	Operant conditioning chambers
Retractable lever-Rat	Coulbourn Instruments	H23-17RA
Silastic tubing (ID 0.02, OD 0.037)	Fisher Scientific (Canada)	1118915A
Single high-bright cue-Rat	Coulbourn Instruments	H11-03R
Sound attenuation boxes	Concordia University	Home made
Stainless steal grid floor	Coulbourn Instruments	H10-11R-TC-SF
System controller 2	Coulbourn Instruments	SYS CTRL 2
System power base	Coulbourn Instruments	H01-01
Tone module 2.9 KHz	Coulbourn Instruments	H12-02R-2.9
Tygon tubing (ID 0.02, OD 0.060)	VWR	63018-044