JoVE Logo
Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Protokol, Staphylococcus aureus ile enfekte olmuş bir ex vivo küçükbaş yaralı cilt modeli oluşturmak için adım adım bir yöntem tanımlamaktadır. Bu yüksek verimli model, geleneksel mikrobiyoloji tekniklerine kıyasla enfeksiyonları in vivo olarak daha iyi simüle eder ve araştırmacılara ortaya çıkan antimikrobiyallerin etkinliğini test etmek için fizyolojik olarak ilgili bir platform sunar.

Özet

Antimikrobiyallerin geliştirilmesi, giderek daha düşük başarı oranlarına sahip pahalı bir süreçtir ve bu da antimikrobiyal keşif araştırmalarına daha fazla yatırım yapmayı daha az çekici hale getirmektedir. Antimikrobiyal ilaç keşfi ve müteakip ticarileştirme, araştırmacıların ilaç tasarımı ve formülasyonu üzerinde daha fazla kontrole sahip oldukları kurşun optimizasyon aşamalarında hızlı ve başarısız ucuz bir yaklaşım uygulanabilirse daha kazançlı hale getirilebilir. Bu makalede, Staphylococcus aureus ile enfekte olmuş bir ex vivo ovine yaralı cilt modelinin kurulumu basit, uygun maliyetli, yüksek verim ve tekrarlanabilir olan açıklanmaktadır. Modeldeki bakteriyel fizyoloji, enfeksiyon sırasında bakteriyel proliferasyon olarak patojenin dokuya zarar verme yeteneğine bağlı olduğunu taklit eder. Yara enfeksiyonunun oluşumu, inoküluma kıyasla canlı bakteri sayımlarında bir artış ile doğrulanır. Bu model, kurşun optimizasyonu aşamasında ortaya çıkan antimikrobiyallerin etkinliğini test etmek için bir platform olarak kullanılabilir. Bu modelin mevcudiyetinin, antimikrobiyaller geliştiren araştırmacılara, sonraki hayvan denemelerinde başarı oranlarını artırmaya yardımcı olacak hızlı ve başarısız ucuz bir model sağlayacağı iddia edilebilir. Model aynı zamanda araştırma için hayvan kullanımının azaltılmasını ve iyileştirilmesini kolaylaştıracak ve sonuçta cilt ve yumuşak doku enfeksiyonları için yeni antimikrobiyallerin kliniğe daha hızlı ve daha uygun maliyetli bir şekilde çevrilmesini sağlayacaktır.

Giriş

Cilt enfeksiyonları, dünyadaki sağlık hizmeti sağlayıcılarına büyük ekonomik maliyetler getiren önemli bir küresel sorundur. Patojenler tarafından çoklu ilaç direncinin ve biyofilm oluşumunun gelişmesi, iyileşmeyen yaraların prevalansında kilit rol oynar 1,2,3,4. Bunun bir sonucu olarak, cilt ve yumuşak doku enfeksiyonları, uzun süreli hastanede yatış ve ardından yeniden kabul için daha yaygın nedenlerden biridir5. Yara iyileşmesindeki gecikmeler hem hasta hem de sağlık hizmeti sağlayıcıları için maliyetlidir ve bazı tahminler ABD'de yılda yaklaşık 6,5 milyon hastanın etkilendiğini göstermektedir. İngiltere'de, cilt enfeksiyonları ve ilişkili komplikasyonlar yılda yaklaşık 75.000 ölümle sonuçlanmaktadır 2.4,6.

Staphylococcus aureus (S. aureus) sıklıkla hasta yaralarından izole edilen zorlu bir yara patojenidir 2,7. Çoklu ilaç direncinin ortaya çıkma oranı 2000'li yıllarda büyük ölçüde artmıştır. Bu süre zarfında, akut bakteriyel deri ve cilt yapısı enfeksiyonlarının yaklaşık% 60'ı, metisiline dirençli S. aureus1 için kültür pozitifti. Son 2 on yılda Stafilokoklar ve aslında diğer patojenler arasında çoklu ilaca dirençli suşların sayısının artması, direncin üstesinden gelebilecek yeni etki biçimlerine sahip antibiyotiklerin hızlı bir şekilde geliştirilmesine acil bir ihtiyaç olduğunu göstermektedir.

Bununla birlikte, 2000'li yılların başından bu yana, antibiyotik keşif programlarına daha uzun gelişim süreleri ve düşük başarı oranları hakim olmuştur ve ABD'deki klinik çalışmalara giren yeni antibiyotiklerin sadece% 17'si pazar onayını almıştır8. Bu, ortaya çıkan antibiyotiklerin in vitro testlerinden elde edilen sonuçlar ile klinik sonuçları arasında bir eşitsizlik olduğunu göstermektedir. Bu eşitsizliğin büyük ölçüde in vivo enfeksiyonlar sırasında ve in vitro preklinik aşamalarda antibiyotiklerin etkinliğini test ederken geleneksel mikrobiyolojik yöntemler sırasında bakteriyel fizyolojideki farklılıklardan kaynaklandığı iddia edilebilir. Bu nedenle, antibiyotik keşif programlarındaki başarı oranlarını artırmak için enfeksiyon sırasında bakteriyel fizyolojiyi daha iyi temsil eden yeni laboratuvar yöntemlerine ihtiyaç vardır.

Cilt enfeksiyonlarını incelemek için mevcut yöntemler arasında canlı hayvanlar (örneğin, fareler), ex vivo cilt modelleri (örneğin, domuz) ve 3D doku mühendisliği cilt modelleri (örneğin, insan) 9,10,11,12 üzerinde yapılan çalışmalar bulunmaktadır. Canlı hayvanlardaki çalışmalar sıkı bir şekilde düzenlenir ve nispeten düşük verime sahiptir. Hayvan modellerinde, yaralanma ve enfeksiyon hayvanlar için önemli sıkıntılara neden olur ve etik kaygıları gündeme getirir. Ex-vivo veya doku mühendisliği yapılmış insan derisi modelleri, etik onay, yerel ve küresel mevzuata (İnsan Dokusu Yasası, Helsinki Deklarasyonu) uygunluk gerektirir ve bazı taleplerin yerine getirilmesi yıllar süren dokuların elde edilmesinde zorluklar vardır.13,14. Her iki model türü de emek yoğundur ve deneysel başarıyı sağlamak için önemli uzmanlık gerektirir. Bazı mevcut ex vivo cilt enfeksiyonu modelleri, enfeksiyonu sağlamak için yara yatağı için önceden aşılanmış diskler ve katkı maddeleri gerektirir; Bu modeller inanılmaz derecede yararlı olsa da, katkı maddeleri yara yatağının besin kaynağı olarak kullanımını sınırladığı için enfeksiyon sürecinde sınırlamalar vardır10,15,16,17. Bu çalışmada açıklanan model, yara yatağına hiçbir katkı maddesi kullanmamakta, bu da enfeksiyon patolojisinin ve canlı hücre sayımlarının, yara yatağının tek besin kaynağı olarak doğrudan kullanılmasının bir sonucu olmasını sağlamaktadır.

Yeni laboratuvar yöntemlerine duyulan ihtiyaç göz önüne alındığında, ortaya çıkan antibiyotiklerin etkinliğini değerlendirmede kullanılmak üzere cilt enfeksiyonlarının yeni bir yüksek verimli ex vivo küçükbaş modeli geliştirilmiştir. Cilt enfeksiyonu çalışmaları birçok zorlukla karşı karşıyadır: yüksek maliyetler, etik kaygılar ve tam bir resim göstermeyen modeller20,21. Ex vivo modeller ve 3D eksplant modelleri, hastalık sürecinin daha iyi görselleştirilmesini sağlar ve etki tedavileri klinik olarak daha alakalı bir modelden sahip olabilir. Burada, basit, tekrarlanabilir ve klinik olarak alakalı ve yüksek verime sahip yeni bir küçükbaş hayvan cilt modelinin kurulumu açıklanmaktadır. Koyun, in vivo enfeksiyonlara verilen yanıtları modellemek için yaygın olarak kullanılan büyük memelilerden biri olduğu için küçükbaş hayvan derisi seçilmiştir. Dahası, mezbahalardan kolayca temin edilebilirler, araştırma için sürekli bir cilt kaynağı sağlarlar ve karkasları haşlanmaz, bu da iyi doku kalitesi sağlar. Bu çalışmada örnek patojen olarak S. aureus kullanılmıştır; ancak, model diğer mikroorganizmalarla iyi çalışır.

Protokol

Bu projede deri örneklerinin kaynağı olarak R.B Elliott ve Son Mezbaha'dan kuzu başları kullanılmıştır. Bütün kuzular yiyecek olarak tüketilmek üzere kesildi. Kafaları atmak yerine, bunlar araştırma için yeniden tasarlandı. Doku mezbahalardan atılan atıklardan kaynaklandığı için etik onay gerekli değildi.

1. Sterilizasyon

  1. Kafaları toplamadan önce forsepsleri temiz forseps alarak ve 1 saat boyunca 200 °C'de bir fırında kuru ısı sterilizasyonu yaparak dezenfekte edin. Tüm cam eşyaları kullanmadan önce 15 dakika boyunca 121 ° C'de otoklav yapın.
  2. Tarif edilen tüm çalışmaları bir mikrobiyoloji sınıf 2 kabini içinde gerçekleştirin. Tüm reaktifleri üreticinin talimatlarına göre hazırlayın.

2. Örnek toplama

  1. Mezbahada, Swaledale kuzuları elektrik veya esir cıvatalı tabanca kullanılarak çarpıcı bir şekilde kesildi ve exsanguined edildi. Kuzu kafalarını kesim sonrası en fazla 4 saat toplayın.

3. Kafaların hazırlanması

  1. Kuzunun alın kısmını, numune alanına yaklaşık 100 mL 200 ppm klor dioksit çözeltisi dökerek dezenfekte edin. Başın alın kısmını elektrikli makaslar kullanarak tıraş edin ve alanı 200 mL 200 ppm klor dioksit çözeltisi ile yıkayın.
  2. Alanı etanol ve mavi rulo ile silin ve numune alanını 35 dakika boyunca epilasyon kremi ile örtün. Bir kazıma aleti kullanarak epilasyon kremini nazikçe kazıyın ve numune alanını değerlendirin. Önemli miktarda saç kalırsa, epilasyon işlemini tekrarlayın.
  3. Alanı durulamak için 200 mL klor dioksit çözeltisi kullanın ve ardından etanol ile durulayın ve mavi bir rulo ile silin.
  4. Steril 8 mm biyopsi punch kullanarak, hazırlanan bölgeden 8 mm cilt örneklerini kesin. Steril forseps ve 15 bıçaklı bir neşter kullanarak numuneleri çıkarın ve tüm kutanöz yağların çıkarılmasını sağlayın.
  5. Numuneleri steril fosfat tamponlu salin (PBS) ile doldurulmuş steril bir 0,5 L kavanoza yerleştirin ve ardından 50 mL 200 ppm klor dioksit çözeltisi içeren steril 50 mL tüplere aktarın, iki kez ters çevirin ve 30 dakika sterilize etmeye bırakın.
  6. Numuneleri klor dioksit çözeltisinden çıkarın ve 40 mL steril PBS ile doldurulmuş 50 mL'lik bir tüpe yerleştirerek yıkayın. Yıkandıktan sonra, her bir cilt örneğini 24 delikli bir plakanın ayrı bir kuyucuğuna yerleştirin.
  7. Numuneyi hava-sıvı arayüzünde tutarken 350 μL önceden ısıtılmış ortam ekleyin. Ortamın bileşimi aşağıdaki gibidir: MK ortamı (Hanks'in tuzları, L-glutamat ve 1.75 mg / mL sodyum bikarbonat ile Orta 199) ve Ham'ın F12'si, FBS (% 10 v / v), EGF (10 ng / mL), insülin (5 μg / mL), penisilin-streptomisin (100 U / mL) ve amfoterisin B (2.5 μg / mL) eklenmiştir.
  8. 24 delikli plakaları gaz geçirgen bir plaka contası ile kapatın ve nemlendirilmiş% 5 CO 2 doku inkübatöründe24 saate kadar 37 ° C'de inkübe edin.

4. Cilt örneklerinin bakımı

  1. Kuluçkadan sonra, kültür ortamını çıkarın ve numuneleri 500 μL steril PBS içinde durulayın. Her numuneye antibiyotik içermeyen ortamlar ekleyin ve numunedeki artık antibiyotikleri çıkarmak için nemlendirilmiş% 5 CO2 doku inkübatöründe 24 saat boyunca 37 ° C'de inkübe edin.
  2. 24 saat sonra antibiyotiksiz ortamda bulanıklık veya mantar enfeksiyonu gelişirse, numuneyi atın.

5. İnokulumun hazırlanması

  1. 10 mL steril triptik soya suyu ile 50 mL'lik bir tüp hazırlayın. Taze bir agar tabağı S. aureus alın ve birkaç koloniyi et suyuna aktarmak için bir çubuk kullanın. 150 rpm'de 37 °C'de 18 saat boyunca inkübe edin.
  2. 3 dakika boyunca 4.000 x g'de santrifüj. Süpernatantı çıkarın ve hücre peletini 10 mL steril PBS içinde yeniden askıya alın. Hücrelerin yeterli şekilde yıkanmasını sağlamak için iki kez tekrarlayın.
  3. İnokulumu, steril PBS'de 0,6 OD600'e ayarlayın. Manuel uygulanabilir plaka sayımı yaparak inokulum yükünü onaylayın.

6. Cilt örneklerinin enfeksiyonu

  1. 400 μL önceden ısıtılmış antibiyotik içermeyen ortam içeren taze bir 24 delikli plaka hazırlayın ve steril forseps kullanarak 24 delikli eklere ekleyin.
  2. Ortamı cilt örneklerinden çıkarın, 500 μL steril PBS ile yıkayın ve yıkamayı çıkarın. Numuneyi yavaşça kuyucuğun dibine tutmak için steril forseps kullanın.
  3. Merkezi bir yara flebi yapmak için 4 mm'lik bir punch biyopsisi kullanın, 1-2 mm'lik kaba bir derinliğe kadar delin. Daha sonra, yara kapağının üst tabakasını çıkarmak için 15 bıçaklı bir neşter ve steril dişli allis doku forseps kullanın. Yara boyutlarındaki değişkenlik enfeksiyonun sonucunu ve son nokta koloni oluşturan birimleri (CFU) etkileyebilir.
  4. Tüm numuneler yaralandıktan sonra, steril forseps kullanarak 24 delikli eklere aktarın. Pipet, bakteri inokulunun 15 μL'sini yara yatağına sokar. Daha sonra, nemlendirilmiş% 5 CO 2 doku inkübatöründe 37 ° C'de24 saat boyunca inkübe edin.
  5. Daha uzun inkübasyon süreleri gerekiyorsa, ortamı çıkarın ve her 24 saatte bir taze ortamla değiştirin ve aynı koşullarda inkübe edin.

7. Bakteri yükünün belirlenmesi

  1. Ortamları kuyucukların dibinden çıkarın. Steril forsepslerde, her numuneyi 1 mL steril PBS ile doldurulmuş ayrı bir 50 mL tüpe aktarın.
  2. Numunenin yüzeyini homojenize etmek için ince uçlu bir homojenizatör kullanın. Yara yatağının homojenizatörün ucu ile doğrudan temas halinde olmasına dikkat edin.
  3. Her numuneyi orta/yüksek frekansta 35 sn homojenize edin. Homojenizatör, bakteri yükünün numaralandırılmasına izin vermek için bakterileri yara yatağının yüzeyinden ayırır.
  4. Tüm numuneler işlendikten sonra, pipetlemeden önce sırayla her numuneyi vorteksleyin. Bu, bakteriyel homojenatın karıştırılmasını sağlamak içindir.
  5. Pipet, 180 μL steril PBS içeren 96 delikli bir plakanın karşılık gelen kuyucuğuna 20 μL vortekslenmiş homojenat.
  6. Her numune homojenatını 1 x 10−7'ye kadar seri olarak seyreltin ve seyreltilmiş homojenatın 10 μL'lik pipetini triptik soya agar plakasına üçlü olarak seyreltin.
  7. Agar plakasını 37 °C'de 18 saat boyunca inkübe edin. Ardından, her örnek için CFU'yu belirlemek üzere koloni sayısını sayın.

Sonuçlar

Yara enfeksiyonu modelini kurmadan önce cildi sterilize etmek için bir yolun belirlenmesi zordu. Buradaki zorluk, farklı cilt katmanlarına zarar vermeden cildi sterilize etmekte yatıyordu, bu da enfeksiyonun sonucunda istenmeyen sonuçlara yol açabilir. Uygun bir sterilizasyon rejimini tanımlamak için, Tablo 1'de belirtildiği gibi, farklı süreler boyunca farklı tedaviler denenmiştir. Kontaminasyon, cilt örneklerini korumak için kullanılan MK ortamında 48 saat sonra bulanıklık gelişimi...

Tartışmalar

Antimikrobiyallerin geliştirilmesi, yaklaşık 1 milyar dolara mal olduğu ve tamamlanması yaklaşık 15 yıl sürdüğü tahmin edilen önemli ama pahalı bir girişimdir. Antimikrobiyal ilaç keşfinin ve antimikrobiyal ilaç etkinliğinin klinik öncesi çalışmalarının% 90'ından fazlası, akademik araştırmacılar ve tipik olarak 50'den az çalışanı olan küçük ve orta ölçekli şirketler tarafından yürütülmektedir22. Bu ekipler finansal olarak çok kısıtlıdır, bu da trans...

Açıklamalar

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur

Teşekkürler

Yazarlar EPSRC'ye (EP/R513313/1) finansman için teşekkür eder. Yazarlar ayrıca Calow, Chesterfield'daki R.B Elliot ve Son Mezbaha'ya, kuzu başlarını sağladıkları ve projenin ilk aşamalarında bu kadar uzlaşmacı oldukları için, Kasia Emery'ye bu protokolün geliştirilmesi boyunca verdiği destek için ve Sheffield Üniversitesi Enfeksiyon, Bağışıklık ve Kardiyovasküler Hastalıklar Bölümü'nden Fiona Wright'a histoloji örneklerini işledikleri ve bu proje boyunca inanılmaz derecede yardımcı oldukları için teşekkür etmek istiyorlar.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
24 Well Companion PlateSLS 353504
4 mm Biopsy PunchWilliams MedicalD7484
50 ml centrifuge tubesFisher Scientific 10788561
8 mm Biopsy PunchWilliams MedicalD7488
Amphotericin B solution, sterileSigma A2942
Colour Pro Style Cordless Hair ClipperWahl9639-2117XHair Clippers
Dual Oven IncubatorSLSOVe1020Sterilising oven
Epidermal growth factor SLSE5036-200UG
EthanolHoneywell458600-2.5L
F12 HAMSigmaN4888
Foetal bovine serum Labtech InternationalCA-115/500
ForcepsFisher Scientific15307805
Hair Removal CreamVeetNot applicable
Heracell VIOS 160iThermo Scientific15373212 Tissue culture incubator
Heraeus Megafuge 16RVWR521-2242Centrifuge
Homogenizer 220, HandheldFisher Scientific15575809
Homogenizer 220, plastic blending conesFisher Scientific 15585819
Insert Individual 24 well 0.4um membraneVWR International353095
Insulin, recombinant HumanSLS91077C-1G
Medium 199 (MK media)SigmaM0393
Microplate, cell culture Costar 96 wellFisher Scientific10687551
MultitronInforsNot applicableBacterial incubator
PBS tabletsSigma P4417-100TAB
Penicillin-StreptomycinSLS P0781
Plate sealsFisher ScientificESI-B-100
Safe 2020Fisher Scientific1284804Class II microbiology safety cabinet
Scalpel blade number 15Fisher ScientificO305
Scalpel Swann MortonFisher Scientific11849002
Sodium bicarbonateSigmaS5761-1KG
Toothed Allis Tissue ForcepsRocialleRSPU500-322
Tryptic Soy AgarMerck Life Science UK Limited14432-500G-F
Tryptic Soy BrothMerck Life Science UK Limited41298-500G-F
Vimoba TabletsQuip LabsVMTAB75BX

Referanslar

  1. Claeys, K. C., et al. Novel application of published risk factors for methicillin-resistant S. aureus in acute bacterial skin and skin structure infections. International Journal of Antimicrobial Agents. 51 (1), 43-46 (2018).
  2. Rahim, K., et al. Bacterial contribution in chronicity of wounds. Microbial Ecology. 73 (3), 710-721 (2017).
  3. Guest, J. F., Fuller, G. W., Vowden, P. Costs and outcomes in evaluating management of unhealed surgical wounds in the community in clinical practice in the UK: A cohort study. BMJ Open. 8 (12), 022591 (2018).
  4. Sen, C. K., et al. Human skin wounds: A major and snowballing threat to public health and the economy. Wound Repair and Regeneration. 17 (6), 763-771 (2009).
  5. Wilcox, M. H., Dryden, M. Update on the epidemiology of healthcare-acquired bacterial infections: Focus on complicated skin and skin structure infections. Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 76, (2021).
  6. Han, G., Ceilley, R. Chronic wound healing: A review of current management and treatments. Advances in Therapy. 34 (3), 599-610 (2017).
  7. Percival, S. L., Hill, K. E., Malic, S., Thomas, D. W., Williams, D. W. Antimicrobial tolerance and the significance of persister cells in recalcitrant chronic wound biofilms. Wound Repair and Regeneration. 19 (1), 1-9 (2011).
  8. Dheman, N., et al. An analysis of antibacterial drug development trends in the United States, 1980-2019. Clinical Infectious Diseases. 73 (11), 4444-4450 (2021).
  9. MacNeil, S., Shepherd, J., Smith, L. Production of tissue-engineered skin and oral mucosa for clinical and experimental use. Methods in Molecular Biology. 695, 129-153 (2011).
  10. Yang, Q., et al. Development of a novel ex vivo porcine skin explant model for the assessment of mature bacterial biofilms. Wound Repair and Regeneration. 21 (5), 704-714 (2013).
  11. Malachowa, N., Kobayashi, S. D., Lovaglio, J., Deleo, F. R. Mouse model of Staphylococcus aureus skin infection. Methods in Molecular Biology. 1031, 109-116 (2013).
  12. Brandenburg, K. S., Calderon, D. F., Kierski, P. R., Czuprynski, C. J., Mcanulty, J. F. Novel murine model for delayed wound healing using a biological wound dressing with Pseudomonas aeruginosa biofilms. Microbial Pathogenesis. 122, 30-38 (2018).
  13. Bledsoe, M. J., Grizzle, W. E. The use of human tissues for research: What investigators need to know. Alternatives to Laboratory Animals. , (2022).
  14. Danso, M. O., Berkers, T., Mieremet, A., Hausil, F., Bouwstra, J. A. An ex vivo human skin model for studying skin barrier repair. Experimental Dermatology. 24 (1), 48-54 (2015).
  15. Torres, J. P., et al. Ex vivo murine skin model for B. burgdorferi biofilm. Antibiotics. 9 (9), 1-18 (2020).
  16. Zhao, G., et al. Delayed wound healing in diabetic (db/db) mice with Pseudomonas aeruginosa biofilm challenge: A model for the study of chronic wounds. Wound Repair and Regeneration. 18 (5), 467-477 (2010).
  17. Schierle, C. F., Dela Garza, M., Mustoe, T. A., Galiano, R. D. Staphylococcal biofilms impair wound healing by delaying reepithelialization in a murine cutaneous wound model. Wound Repair and Regeneration. 17 (3), 354-359 (2009).
  18. Trøstrup, H., et al. Pseudomonas aeruginosa biofilm aggravates skin inflammatory response in BALB/c mice in a novel chronic wound model. Wound Repair and Regeneration. 21 (2), 292-299 (2013).
  19. Thompson, M. G., et al. Evaluation of gallium citrate formulations against a multidrug-resistant strain of Klebsiella pneumoniae in a murine wound model of infection. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 59 (10), 6484-6493 (2015).
  20. Maboni, G., et al. A novel 3D skin explant model to study anaerobic bacterial infection. Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 7, 404 (2017).
  21. Macneil, S. Progress and opportunities for tissue-engineered skin. Nature. 445 (7130), 874-880 (2007).
  22. Theuretzbacher, U., Outterson, K., Engel, A., Karlén, A. The global preclinical antibacterial pipeline. Nature Reviews Microbiology. 18 (5), 275-285 (2019).
  23. Miethke, M., et al. Towards the sustainable discovery and development of new antibiotics. Nature Reviews Chemistry. 5 (10), 726-749 (2021).
  24. Guedes, G. M. M., et al. Ex situ model of biofilm-associated wounds: Providing a host-like environment for the study of Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa biofilms. Journal of Applied Microbiology. 131 (3), 1487-1497 (2021).
  25. Johnson, C. J., et al. Augmenting the activity of chlorhexidine for decolonization of Candida auris from porcine skin. Journal of Fungi. 7 (10), 804 (2021).
  26. Horton, M. V., et al. Candida auris Forms High-Burden Biofilms in Skin Niche Conditions and on Porcine Skin. mSphere. 5 (1), 00910-00919 (2020).
  27. Ashrafi, M., et al. Validation of biofilm formation on human skin wound models and demonstration of clinically translatable bacteria-specific volatile signatures. Scientific Reports. 8, 1-16 (2018).
  28. Brackman, G., Coenye, T. In vitro and in vivo biofilm wound models and their application. Advances in Experimental Medicine and Biology. 897, 15-32 (2016).
  29. Rumbaugh, K. P., Carty, N. L. In Vivo Models of Biofilm Infection. Biofilm Infections. , 267-290 (2011).
  30. Boase, S., Valentine, R., Singhal, D., Tan, L. W., Wormald, P. J. A sheep model to investigate the role of fungal biofilms in sinusitis: Fungal and bacterial synergy. International Forum of Allergy & Rhinology. 1 (5), 340-347 (2011).
  31. Williams, D. L., et al. Experimental model of biofilm implant-related osteomyelitis to test combination biomaterials using biofilms as initial inocula. Journal of Biomedical Materials Research. Part A. 100 (7), 1888-1900 (2012).
  32. Scheerlinck, J. P. Y., Snibson, K. J., Bowles, V. M., Sutton, P. Biomedical applications of sheep models: From asthma to vaccines. Trends in Biotechnology. 26 (5), 259-266 (2008).
  33. Metcalfe, A. D., Ferguson, M. W. J. Tissue engineering of replacement skin: The crossroads of biomaterials, wound healing, embryonic development, stem cells and regeneration. Journal of the Royal Society Interface. 4 (14), 413-417 (2007).
  34. Kazemi-Darabadi, S., Sarrafzadeh-Rezaei, F., Farshid, A. A., Dalir-Naghadeh, B. Allogenous skin fibroblast transplantation enhances excisional wound healing following alloxan diabetes in sheep, a randomized controlled trial. International Journal of Surgery. 12 (8), 751-756 (2014).
  35. Martinello, T., et al. Allogeneic mesenchymal stem cells improve the wound healing process of sheep skin. BMC Veterinary Research. 14 (1), 1-9 (2018).
  36. Roberts, C. D., Windsor, P. A. Innovative pain management solutions in animals may provide improved wound pain reduction during debridement in humans: An opinion informed by veterinary literature. International Wound Journal. 16 (4), 968 (2019).
  37. Mazzone, L., et al. Bioengineering and in utero transplantation of fetal skin in the sheep model: A crucial step towards clinical application in human fetal spina bifida repair. Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 14 (1), 58-65 (2020).
  38. Olkowska, E., Gržinić, G. Skin models for dermal exposure assessment of phthalates. Chemosphere. 295, 133909 (2022).
  39. Couto, N., et al. Label-free quantitative proteomics and substrate-based mass spectrometry imaging of xenobiotic metabolizing enzymes in ex vivo human skin and a human living skin equivalent model. Drug Metabolism and Disposition. 49 (1), 39-52 (2021).

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

mm noloji ve EnfeksiyonSay 187

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır